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Cell Counting Kit-8细胞增殖毒性检测试剂盒


性能简介

Cell Counting Kit-8是用于化学药物等对细胞增殖或毒性实验时进行细胞计数的试剂盒。试剂盒中使用高灵敏度的新型水溶性四唑盐WST-8甲臜染料作为显色底物,与传统的细胞计数试剂盒相比,灵敏度大幅度的提高。WST-8被细胞内的脱氢酶还原产生水溶性的甲臜染料。通过直接测量甲臜染料(450 nm)的吸光度,即可测出活细胞的数量。细胞数量与甲臜染料成正比关系。同时试剂盒为配置好的1瓶溶液,易于使用。

产品特点

1)对比[3H]法,无需放射性同位素。

2)使用水溶性四唑盐与水溶性甲臜染料,因此无需DMSO换液操作步骤。(如MTT分析等需要)

3)与其他水溶性四唑盐法(XTT,MTS)相比,灵敏度更高的同时毒性更低。

4)试剂盒为1瓶装,无需提前配置,无需准备其他试剂。

5)试剂盒稳定性高。

6)试剂可以与酚红同时使用。

原理

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Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 包含了Dojindo开发的水溶性四唑盐—WST®-8和电子载体(1-Methoxy PMS)。由于WST®-8具有高水溶性,它存在于细胞外而不渗透活细胞膜,通过1-Methoxy PMS接受乳酸脱氢酶的辅酶NADH的电子而被还原,生成水溶性WST®-8甲臜染料(最大吸收波长450nm:详见下方吸收光谱)。

光谱.jpg

产品概述

Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 利用了Dojindo开发的水溶性四唑盐—WST®-8 (2- (2-甲氧基-4-硝苯基) -3- (4-硝苯 基) -5- (2,4-二磺基苯) -2H-四唑单钠盐),它在电子载体1-Methoxy PMS存在的情况下能够被还原成水溶性的橙黄色甲臜。 CCK-8溶液可以直接加入到细胞样品中,无需配制。CCK-8法是用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目的 一种高灵敏度,无放射性的比色检测法。WST®-8被细胞内脱氢酶氧化还原后生成的橙黄色甲臜能够溶解在培养基中 ,生成的甲臜物的数量与活细胞数量成正比。

操作步骤

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本试剂盒测定方法简单,只需一瓶试剂即可操作,无需二次配制工作液,从而提高实验者的效率。

CCK-8使用例

细胞增殖实验(左)与细胞毒性实验(右)


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CCK-8与LDH

Cell Counting Kit-8 与Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST同时检测细胞毒性


CCK-8与LDH2.jpg













检测药物: Mitomycin C

细胞: HeLa

培养基: MEM, 10% FBS

孵育条件: 37℃, 5% CO2, 48小时

检测波长: Cell Counting Kit-8 (450 nm), Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST® (490 nm)

使用Mitomycin C 检测检测HeLa细胞毒性。通过使用Cell Counting Kit-8和Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST® [货号: CK12]两种方法检测。Cell Counting Kit-8以细胞活性为指标,Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST以游离的LDH为指标,实验证实两种指标检测存在差异性。二者联用,能更全面的表征细胞毒性。

WST®-8甲臜染料

WST®-8甲臜染料吸光度与续细胞数量的关系

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培养基: MEM, 10%FBS(HeLa ) , RPM1640(HL60)

孵育条件:37℃, 5%CO2, 2hr (HeLa、HL60) 

检测试剂:Cell Counting Kit-8

    () 450 nm, XTT () 450 nm, MTS

    () 490 nm, MTT() 570 nm 

将HeLa细胞和HL60细胞以不同的细胞数接种到96孔板中,按孵育条件处理后加入以上每种试剂测定吸光度。根据细胞数量增加吸光度。CCK-8灵敏度、线性范围优于以上其他方法。

试剂稳定性比较

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Cell Counting Kit-8可冷藏保存1年以上,避免试剂浪费!

试剂毒性评价

试剂本身对细胞毒性的比较

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HeLa细胞在96孔板中孵育(5000个/孔)。在CO2培养箱中开始显色反应,每隔3、6、24小时在显微镜下观察细胞形态。Cell Counting Kit-8在24小时后细胞形态没有改变。在使用药物进行细胞毒性试验时,应选择测量试剂本身对细胞毒性影响更小的试剂。

3D培养检测


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