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细胞增殖及活性检测


一、 实验原理

细胞增殖是细胞在周期调控因子的作用下,通过DNA复制 、RNA转录和蛋白质合成等一系列复杂反应而进行的分裂过程,是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础。细胞增殖检测广泛应用于分子生物学、免疫学、肿瘤生物学、药理学等研究领域,是评价细胞代谢、生理和病理状况的重要方法。目前,常用的方法包括胸腺嘧啶核苷渗入法 、MTT检测法、羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂 (CFSE)检测法等。但最直接精确的就是利用胸腺嘧啶核苷酸类似物检测新合成的DNA,即5‐乙炔基‐2′脱氧尿嘧啶核苷(5‐ethynyl‐2′‐deoxyuridine,EdU)和 5‐溴‐2′‐脱氧尿嘧啶核苷(5‐bromo‐2′‐deoxyuridine,BrdU)标记。

BrdU是另一种嘧啶类似物,其化学结构特点是溴替代了胸腺嘧啶环与5位C原子连接的甲基,可竞争性掺入到S期新合成的DNA中,利用免疫荧光技术标记增殖细胞,如同时结合其他细胞标记物进行双重染色,可判断细胞种类及增值速度,对研究细胞动力学有重要意义。

EdU是一种胸腺嘧啶核苷的类似物,其化学结构特点是脱氧胸腺嘧啶环上与5位C原子相连的甲基被乙炔基取代,在S期细胞增殖时可作为底物掺入到正在复制的DNA链中, 通过与染料的共轭反应可以进行高效快速的细胞增殖检测,其中,乙炔基能够与一种荧光标记的小分子叠氮化合物探针反应,形成稳定的三唑环,该反应是一种被称“click”化学作用的Cu+催化的环加成作用。EdU的[3+2]环加成 作用由Cu+催化完成,由于Cu+盐的低溶解度,Cu+通常以配基的形式引入到[3+2]环加成作用之中。


二、应用简介

目前,BrdU标记新合成DNA的方法在动物细胞组织的肿瘤生物学、遗传学、分子生物学等领域得到广泛应用。

与传统的免疫荧光染色比较,EdU反应非常快速,能在几分钟内完成,且不需要进行DNA变性处理,只需简单的几个步骤,使得组织成像更简单易行,因此也适用于高通量筛选试验,尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他药物的筛选实验。


三、实验方法


     四、样本送检要求



五、案例展示


六、常见问题

1、BrdU配制方法:10mg容于10ml双蒸水,4℃避光保存。

2、BrdU会对肌体造成不可逆损伤,使用时注意安全,避免吸入BrdU粉尘。


     七、服务流程


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