一、 实验原理

细胞增殖是细胞在周期调控因子的作用下，通过DNA复制 、RNA转录和蛋白质合成等一系列复杂反应而进行的分裂过程，是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础。细胞增殖检测广泛应用于分子生物学、免疫学、肿瘤生物学、药理学等研究领域，是评价细胞代谢、生理和病理状况的重要方法。目前，常用的方法包括胸腺嘧啶核苷渗入法 、MTT检测法、羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂 （CFSE）检测法等。但最直接精确的就是利用胸腺嘧啶核苷酸类似物检测新合成的DNA，即５‐乙炔基‐２′脱氧尿嘧啶核苷（５‐ethynyl‐２′‐deoxyuridine，EdU）和 ５‐溴‐２′‐脱氧尿嘧啶核苷（５‐bromo‐２′‐deoxyuridine，BrdU）标记。

BrdU是另一种嘧啶类似物，其化学结构特点是溴替代了胸腺嘧啶环与5位C原子连接的甲基，可竞争性掺入到S期新合成的DNA中，利用免疫荧光技术标记增殖细胞，如同时结合其他细胞标记物进行双重染色，可判断细胞种类及增值速度，对研究细胞动力学有重要意义。

EdU是一种胸腺嘧啶核苷的类似物，其化学结构特点是脱氧胸腺嘧啶环上与５位C原子相连的甲基被乙炔基取代，在S期细胞增殖时可作为底物掺入到正在复制的DNA链中， 通过与染料的共轭反应可以进行高效快速的细胞增殖检测，其中，乙炔基能够与一种荧光标记的小分子叠氮化合物探针反应，形成稳定的三唑环，该反应是一种被称“click”化学作用的Cu＋催化的环加成作用。EdU的［3+2］环加成 作用由Cu＋催化完成，由于Cu＋盐的低溶解度，Cu＋通常以配基的形式引入到［3+2］环加成作用之中。

二、应用简介

目前，BrdU标记新合成DNA的方法在动物细胞组织的肿瘤生物学、遗传学、分子生物学等领域得到广泛应用。

与传统的免疫荧光染色比较，EdU反应非常快速，能在几分钟内完成，且不需要进行DNA变性处理，只需简单的几个步骤，使得组织成像更简单易行，因此也适用于高通量筛选试验，尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他药物的筛选实验。

三、实验方法

     四、样本送检要求

五、案例展示

六、常见问题

1、BrdU配制方法：10mg容于10ml双蒸水，4℃避光保存。

2、BrdU会对肌体造成不可逆损伤，使用时注意安全，避免吸入BrdU粉尘。

     七、服务流程