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免疫荧光

一、实验原理

免疫荧光(IF),是应用抗原与抗体特异性结合的原理,通过荧光标记抗体对组织细胞内抗原进行定位、定性及定量的研究。

免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。


二、应用简介

目前主要可以对石蜡切片、冰冻切片、细胞爬片、组织芯片进行免疫荧光检测。

免疫荧光技术可用于:(1)研究特异蛋白抗原在细胞内分布;(2)对抗原进行细胞定位;(3)对特定抗原进行定量检测


三、实验方法


四、样本送检要求


五、案例展示



六、常见问题

1、无/弱染色

烤片温度过高,推荐56℃-60℃1-2h;
    一抗是否适用固定液和石蜡切片,使用浓度是否过低,孵育是否时间过短等。

2、非特异性背景染色

是否灭活内源性过氧化物酶;
     孵育过程中干片;
     抗原热修复过度。

3、染色过深

一抗浓度过高;
     染色试浓度过高或孵育时间过长;
     染色剂浓度过高或孵育时间过长。

 


七、服务流程

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