货号：R1200
规格：50T/100T
产品内容：
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试剂盒组成 |
R1200-50 |
R1200-100 |
保存 |
有效期 |
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裂解液 |
50ml |
100ml |
2-8℃ |
一年 |
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漂洗液 |
15ml |
30ml |
RT |
一年 |
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洗柱液 |
50ml |
100ml |
RT |
一年 |
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15ml |
30ml |
RT |
一年 |
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RNase free吸附柱 |
50个 |
100个 |
RT |
一年 |
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RNase free收集管(2ml) |
50个 |
100个 |
RT |
一年 |
操作步骤：1. 样品处理： a. 植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀。
b. 动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。
c. 贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每106细胞加1ml 裂解液。用取样器吹打混匀。
d. 细胞悬液：离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。
e. 血液处理：取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，10000rpm离心1分钟。弃上清，若沉淀含有红细胞，可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1 ml裂解液混匀。
2. 将处理后的样品在室温放置5分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。
3. 向匀浆样品中加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置3-5分钟。
4. 2-8℃ 12000 rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中，把水相转移到新管中，不要吸到沉淀。
5. 吸附柱前处理：在吸附柱中加入500ul 洗柱液，室温放置2分钟，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。
6. 第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀，加入吸附柱静置2分钟，2-8℃ 12000rpm离心2min，弃废液。
7. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。
8. 向吸附柱中加入600ul漂洗液，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。
9. 12000rpm离心2min，弃掉收集管，将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除。
10. 将吸附柱放入新管中，向膜中央滴加50-100ul RNase free ddH2O，室温放置5min，12000rpm室温离心2min即得到RNA。
注意事项：
1，所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品，操作过程要小心，带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。
2，RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA不纯，需电泳检测。
注意：
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
| Title ： | The establishment of clonally derived chicken embryonic fibroblast cell line (CSC) with high transfection efficiency and ability as a feeder cell |
|---|---|
| Author： | Ruifeng Zhao , Jing Jin , Xinyu Sun , Kai Jin , Ma |
| Publish_to： | Journal of cellular Biochemistry |
| IF： | 3.0620 |
| PMID： | 30076744 |
| Title ： | The establishment of clonally derived chicken embryonic fibroblast cell line (CSC) with high transfection efficiency and ability as a feeder cell |
| Author： | Ruifeng Zhao , Jing Jin , Xinyu Sun , Kai Jin , Ma |
| Publish_to： | Journal of cellular Biochemistry |
| IF： | 2.9590 |
| PMID： | 30076744 |
