足细胞标志蛋白检测在糖尿病肾病中的临床应用价值

糖尿病是一组以慢性血糖水平增高为特征的代谢性疾病,发病率为3%~5%,随着全球人口老龄化的进程,糖尿病的发病率也呈逐年增加的趋势,成为一个不容忽视的严重公共健康卫生问题,20%~30%的1或2型糖尿病患者在5~15年发展为糖尿病肾病(DN)[1-2]。肾脏具有强大的代偿功能,如果在病变的早期进行干预治疗,则可有效防止肾损伤的发展,可见DN的早期诊断和及时治疗极其重要,在过去的几十年里,寻找用于肾损伤早期诊断和病情检测的生物分子一直是临床工作者们努力的方向。足细胞标志蛋白(PCX)特异性地表达于肾小球脏层上皮足细胞,足细胞的损伤往往是肾脏轻微损伤的早期表现,因此PCX可用来检测肾小球损伤的活动性囵,本研究检测了DN患者PCX表达的变化,并探讨了其相关的临床应用价值。

资料与方法

1,临床资料:选择天津市大港油田总医院2010年12月至2012年6月收治的DN患者68例作为DN组,男46例,女22例,年龄32~74(51.6±12.8)岁,病程3~18(11.4±6.1)年;另选择体检中心健康体检者20例作为对照组,两组年龄、性别构成、体重、身高等一般临床资料比较差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。DN的诊断标准符合1999年WHO标准和2008年中华医学会糖尿病学分会制定的《中国2型糖尿病防治指南(2007年版)》[4]。排除标准:急慢性炎眭疾病、原发性肾炎、关节炎、系统性红斑狼疮等其他免疫炎性疾病、严重心脑血管和肝脏疾病、1个月内未服用免疫抑制剂等药物。胡例DN患者按尿白蛋白与肌酐比值分为三个亚组:正常蛋白尿组(<30mg/g,A组)、微量白蛋白尿组(≥30mg/g而<3O0mg/g,B组)、大量白蛋白尿组(≥300mg/g,C组)。

2.尿沉渣PCX表达的测定:留取所有受试者晨起清洁中段尿,1500×g离心20min,去上清,PBS清洗尿沉渣3次,100ul含0.2%Triton-100的PBS裂解尿沉渣中的细胞,PCX的表达使用酶联免疫吸附试验法检测,检测试剂盒购自美国BD公司,参照Κ汕等囵和试剂盒说明书操作,使用标准品绘制标准曲线,然后对照标准曲线计算PCX的表达水平。

3.肾功能生化指标检测:血肌酐和血尿素氮等肾功能生化指标由检验科检测。

4.统计学方法:应用SPSS12.0软件进行统计分析,计量资料比较采用t检验,计数资料比较采用单因素方差分析,各检测指标的相关关系采用Pearson相关性分析,P<0.05为差异有统计学意义。

结果

1.DN组与对照组尿沉渣中PCX及肾功能生化指标比较:见表1.DN组患者尿沉渣中PCX、血肌酐和血尿素氮的表达水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。

2.DN患者不同亚组尿沉渣中PCX及肾功能生化指标比较:见表2。A、B、C三组患者尿沉渣中PCX的表达水平比较差异均有统计学意义(P<0.05)。而血肌酐和血尿素氮在A组和B组比较差异无统计学意义(P>0.05),但在A组和C组、B组和C组比较差异有统计学意义(P<0.05)。

讨论

糖尿病的主要危害是对微血管或大血管的损害,继而导致一系列并发症的发生,DN是糖尿病微血管损害的主要表现,肾损害的常用临床评估指标是血肌酐、血尿素氮、内生肌酐清除率等,而DN患者早期常缺乏明显的临床表现,上述生化指标均不能反映糖尿病患者的早期肾损伤[6],本研究也显示了在正常蛋白尿组和微量白蛋白尿组之间血肌酐和血尿素氮的表达差异无统计学意义,故而临床诊断DN时患者多处于疾病的中晚期,所以DN也是终末期肾病最常见的原因,有研究显示DN患者中约40%需要透析治疗,给患者造成了沉重的经济负担,可见寻找DN的早期肾损伤检测指标,对于阻止DN的进展和疾病的治疗具有重要的临床意义[7]。

足细胞是肾脏固有细胞之一,位于肾小球基底膜外侧,表面覆盖一层富含唾液酸的特异性糖蛋白,称为PCX,PCX只表达于足细胞而不表达于其他的尿道上皮细胞,PCX是维持负电荷屏障和保持足细胞形态的重要分子,近年的研究发现,足细胞损伤和脱落是肾病最早期的病理改变,足细胞病变时足突融合、收缩与血管基底膜剥离脱落至尿液中,因此检测足细胞中的特异性PCX可以间接反映肾小球滤过膜的损伤网。本研究也显示了DN患者中PCX的表达显著高于健康体检者,提示了尿沉渣中PCX的检测可以反映肾小球的早期损伤。足细胞脱落后血管基底膜裸露,大量蛋白渗漏,导致毛细血管袢透明样变性,加重肾小球的损伤,本研究也显示了PCX的表达水平随着尿白蛋白排泄率的增加而显著增加,说明了随着足细胞的大量脱落和肾损伤的加重尿沉渣中PCX的表达也相应增加,提示了PCX可用于DN患者肾损伤程度的检测。

综上所述,DN患者尿沉渣中存在PCX表达的上调,检测PCX有利于DN患者肾损害的早期诊断以及肾损伤程度的评估,对于DN的早期防治具有重要的临床意义。

参考文献

[1] Kelly T,Yang W,Chen CS,el a1.Global burden  of obesity in 2005 and projectlons to 2030. Int J Obes (Lond),2008,32(9):1431- 1437.

[2] Zherlg W,Chen L. Factor  analysis  of diabetic nephropathy in Chinese patients.Diabetes Metab syndr,2011,5(3): 130-136.