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    使用EDTA抗凝血检测凝血酶原时间

    发表时间:2010-03-16  浏览次数:684次

    作者:季明德,魏源华    作者单位:江苏省中医院检验科,江苏 南京 210029     【摘要】  目的 比较病人用EDTA抗凝血和枸橼酸钠抗凝血检测PT、INR结果的差异。方法 120位受试对象用枸橼酸钠和EDTA抗凝各采两管血,分离血浆后在STAGO仪器上检测PT,对两种抗凝方式所得PT、INR结果进行线性回归分析,分析其相关性及其结果间有无显著性差异。结果 以枸橼酸钠法测得PT为y,EDTA法测得PT为x,两者间PT线性方程为y=0.86x-2.8,R2=0.97,PT结果相关性好,但差异有显著性。INR线性方程为y=0.95x+0.03,R2=0.98,相关性好且差异无显著性。讨论 EDTA抗凝血浆检测PT在临床上是可接受的,但前提条件是应建立自己的参考区间,报告INR结果时还应统计EDTA抗凝血的MNPT(正常人平均PT),根据公式INR=(PT/MNPT)ISI计算INR值。

        【关键词】  EDTA; 凝血酶原时间

        现阶段进行凝血项目检测都是用枸橼酸钠抗凝,抽取血液量与枸橼酸钠的比例是9:1,在真空采血管中包含固定量的0.3 ml抗凝剂,真空采血管内的负压保证了从血管中吸出2.7 ml血液。但是在实际情况中偶尔会发生血液量不足的问题,比例发生改变会影响凝血结果[1]。使用EDTA抗凝管可能会解决这个问题,因为EDTA粉末在抗凝过程中几乎不对血液造成稀释,也就不会发生稀释比例的改变。本文研究在于诠释用EDTA抗凝时所测得的PT、INR结果与枸橼酸钠抗凝时的相关性。

        1  材料和方法

        1.1  仪器和试剂  Stago 公司生产的STA型全自动凝血分析仪,使用Stago 公司配套试剂,配套质控品。Dade-Behring公司生产的INR校准血浆;

        1.2  标本来源  收集本院健康体检者标本60例,男30例,女30例,年龄20~53岁;收集本院心胸外科心脏瓣膜置换术后及其它原因致PT延长病人标本60例,男35例,女25例,年龄21~55岁。

        1.3  实验方法

        1.3.1   枸橼酸钠抗凝血MNPT的计算  同一仪器使用不同生产厂家、不同批号的凝血活酶试剂所计算出的正常人平均PT(MNPT)值是不一样的,故我们应重测所用凝血活酶试剂匹配的仪器MNPT值,而不应使用生产厂家给我们提供的MNPT值[2]。计算MNPT需要至少20份正常血浆。本实验我们挑选60名健康体检者,经过仪器测试PT值,剔除>2S的数据, 经统计学处理,计算得出枸橼酸钠抗凝血的MNPT值。

        1.3.2  EDTA抗凝血MNPT的计算  60名健康体检者的EDTA抗凝血,测试PT结果后,剔除>2S的数据, 经统计学处理,计算得出EDTA抗凝血的MNPT值。

        1.3.3  Local ISI(仪器区域国际敏感指数)的建立  仪器不可使用试剂说明书上附带的ISI值,因为此ISI值是试剂制造商用手工方法所测出的,并非是实验室仪器对所用批号凝血活酶试剂的Local ISI[3],所以要重新建立Local ISI。用已标注INR值的校准血浆复溶后,在Stago仪器上测PT 2~3次,得出PT秒数均值,INR=(PT/MNPT)Local ISI,将枸橼酸钠及EDTA抗凝血各自的MNPT结果及已知的INR结果代入上式,即可求出Local ISI=lgINR/(lgPT-lgMNPT),故能分别求出两种抗凝方式各自的Local ISI。

        1.3.4  PT、INR的检测  本院健康体检者标本60例,本院心胸外科心脏瓣膜置换术后及其它原因致PT延长病人标本60例用枸橼酸钠和EDTA抗凝管各抽一管血,3 500 r/min离心5 min,以制备乏血小板血浆,在4 h内完成检测。根据公式INR=(PT/MNPT)Local ISI,得到INR值。

        1.4  统计学方法  对枸橼酸钠和EDTA抗凝所得的各120份标本的PT、INR结果进行线性回归统计,分析其相关性,并用配对t检验分析两者间是否存在显著性差异。

        2  结    果

        2.1  MNPT结果  橼酸钠抗凝血MNPT为13.8 s,EDTA抗凝血MNPT为18.6 s。

        2.2   Local ISI结果  橼酸钠抗凝血Local ISI为1.24,EDTA抗凝血Local ISI为1.33。

        2.3   枸橼酸钠抗凝血的PT结果为y,EDTA抗凝血的PT结果为x,结果见表1。经线性回归统计,两者间PT线性方程为y=0.86x-2.8,R2=0.97, PT结果相关性好,经配对t检验,t=-29.8,P=0.0<0.05, 差异有显著性。

        2.4  枸橼酸钠抗凝血的INR结果为y,EDTA抗凝血的INR结果为x,结果见表1。经线性回归统计,两者间INR线性方程为y=0.95x+0.03,R2=0.98, INR结果相关性好,经配对t检验,t=0.699,P=0.492>0.05,差异无显著性。表1  枸橼酸钠与EDTA抗凝血的PT、INR检测结果

        3  讨    论

        3.1   研究发现PT、INR结果间是有相关性的,在临床上使用EDTA抗凝管检测PT是可行的。但同时也发现,PT结果间差异有显著性,两种抗凝方式下PT的生物参考区间是不同的,所以要建立EDTA抗凝下PT的参考区间。INR结果间差异无显著性,因为我们重新计算了EDTA抗凝下的MNPT,从上述结果可见,EDTA抗凝下的MNPT比枸橼酸钠抗凝下MNPT要长,通过PT/MNPT在一定程度上消减了EDTA抗凝下PT的延长,INR结果有良好的相关性。因此我们可以报告INR结果或者通过公式换算PT结果y=0.86x-2.8。

        3.2  PT结果间的差异主要是因为标本的稀释不同造成的,因为枸橼酸钠抗凝管中存在0.3 ml抗凝剂,血液:抗凝剂=9:1,而EDTA管中抗凝剂是固体粉末,加入血液后几乎不对血液稀释,因而抽取血液量的多少十分关键,这也是分析前质量控制的一个环节。

        3.3  使用EDTA抗凝血的优势在于抗凝管可与血液学分析使用同一管血液,血样进行完血液学分析后可分离血浆,用于凝血项目检测,便于检验科仪器自动化的建立。使用一管血液不仅节省抗凝管,而且病人没有必要抽取更多管血液,也便于医疗废弃物的处理,不会因为血量的多少造成稀释不同而影响结果。

        3.4  本文使用经过计算的EDTA抗凝下的Local ISI,与枸橼酸钠抗凝下的Local ISI是不一样的,因为现阶段没有EDTA抗凝下的INR定值血浆存在,以后若有INR定值血浆来校准ISI会使得EDTA抗凝的使用更方便,更有市场。

    【参考文献】[1] 徐爱丽,毛庆民,张乐研.标本采集量对PT、APTT检测结果的影响[J].临床军医杂志,2007,35(6):913.

    [2] 倪赞明,徐明光,王晓明,等.凝血酶原时间ISI/INR系统测定中的一些问题及改进意见[J]检验医学,2006,21(5):492495.

    [3] 许蕾,王学锋,李泳,等.血浆凝血酶原时间测定中建立仪器区域国际敏感指数的实验控讨[J]检验医学,2004,19(5):441443.

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