中国东北地区汉族癫痫患者HLA-B*1502等位基因分布频率

人类白细胞抗原基因(HLA)分为3类:HLA-I、Ⅱ、Ⅲ类基因。其中,HLA-I类中有HLA-A、HLA-B和HLA-C[1]。HLA基因具有高度多态性,个体携带HLA等位基因型别不同,可导致其对同一种抗原递呈能力不同,进而使得机体对某些及药物的遗传易感性存在差异。HLA-B是多态性发生频率最高的基因之一。HLA等位基因是调控人体特异性免疫应答和决定疾病易感性个体差异的主要基因系统。不同种族、不同区域的人群,HLA基因型频率的分布存在较大差异。目前,国内外均尚未见东北地区汉族人群HLA-B*1502等位基因分布频率的报道。

材料、对象与方法

1  研究对象

收集2008年1月至2010年12月,于中国医科大学附属盛京医院诊断为癫痫的门诊及住院患者。

诊断与入选标准  按照国际标准[2],经临床及脑电图确诊为癫痫。长期服用卡马西平且无不良反应发生;定期检测卡马西平稳态血药浓度;患者民族应为汉族,且至少三代以上的直系亲属均定居于中国东北地区。

详细记录患者一般资料、诊疗记录、用药信息及卡马西平稳态血药浓度监测结果等。

2  试剂与仪器

蛋白酶Κ,Amresco公司生产;氯仿、异丙醇、乙醇,天津博士德公司生产;CBZ试剂盒,美国雅培公司生产。Axsym全自动免疫分析仪,美国雅培公司产品。

3  基因分型

血液标本收集  均抽取静脉血2mL,ETDA抗凝。

DNA提取  用饱和氯化钠法提取外周血基因组DNA。用蛋白酶K和SDS裂解白细胞并释放DNA;以饱和氯化钠溶液溶解DNA;以氯仿抽提DNA。去除溶液中蛋白质后,以3mol·L-1NaAc沉淀DNA。以70%乙醇洗涤DNA,洗脱后的DNA以TE溶解,置-20℃冰箱保存待用。

DNA鉴定  以双蒸水为空白对照,在紫外分光光度计上分别测定DNA样品在260.280nm下的吸光度值,并计算A260/A280的比值,当其比值介于1.6-1.8时,表明该DNA样本纯度符合要求,可以进行后续试验。

HLA-B*1502等位基因检测  用聚合酶链反应DNA序列分析法(PCR-SBT),对所有125例患者DNA样本进行HLA-B基因高分辨分型,即分型结果至来号后第四位(北京华大基因研究中心),根据峰图改变,确定患者基因型。

结果

1  基本情况分析

共收集符合入选条件的病例125例,男66例,女59例,均为汉族。其中,来自辽宁省的患者为102例,来自吉林和黑龙江省的患者共计23例。

紫外分光光度计检测,125例DNA样品的A20/A28O比值均介于1,6~1.8,可满足后续研究要求。

2  HLA-B*1502基因分布频率

所有样本经PCR-SBT法检测后,125例患者中,仅有2例患者携带HLA-B*1502等位基因,均为杂合型,分别为1502/5201和1502/4006。HLA-B*1502等位基因分布频率为1.6%。

3  其他主要等位基因分布频率

125例患者中,共检测出骅种不同的HLA-B等位基因。其中,分布频率较高的分别为HLA-B*4001、B*4601、B*4801、B*1302和B*4OO2,结果见表1。

讨论

在印度、马来西亚、泰国、中国香港与台湾及中国南方地区人群中,HLA-B*1502与卡马西平所致SJS/TEN高度相关;但此结果在日本、韩国及高加索人群中未得到验证[5-8]。HLA-B*1502与卡马西平所致SJS/TEN高度相关的国家和地区,HLA-B*1502分布频率均较高;而HLA-B*1502与卡马西平所致SJS/TEN无相关性的国家和地区,HLA-B*1502分布频率均较低。我国各区域、各民族间HLA-B*1502频率差异较大(1.5%~12.5%),并呈现以南方地区分布频率最高,向北而降低的趋势[2]。HLA-B*1502分布频率可能与卡马西平所致SJS/TEN相关[9]。本研究结果表明,125例患者中,仅有2例患者携带HLA-B*1502等位基因,HLA-B*1502等位基因分布频率为1.6%。该结果与已报道的韩国人群、中国北京地区汉族人群结果-致(1.5%)[2]。

参考文献

[1]Horton R,Wilming L,Rand V. Gene map of the extended human MHC[J].Nature Reviews Genetics,2004.889-899.

[2]解学孔. 癫痫病学[M].北京:人民卫生出版社,1998.225.

[3]YangG,DengYJ,HuSN. HLA-A,-Band-DRB1 polymorphism defined by sequence-based typing of the Han population in Northern China[J].Tissue Antigens,2006.146-152.

[4]Gao X. HLA-11 th International Histocompatibility Conference[M].日本:横滨,1997.155.

[5]Locharernkul C,Loplumlert J,Limotai C. Carbamazepine and phenytoin induced Stevens-Johnson syndrome is associated with HLA-B * 1502 allele in Thai population[J].Epilepsia,2008.2087-2091.

[6]Wang Q,Zhou JQ,Zhou LM. Association between HDA-B * 1502 allele and carbamazepine-induced severe cutaneous adverse reactions in Han people of southern China mainland[J].Seizure-European Journal of Epilepsy,2011.446-448.

[7]Then SM,Rani ZZ,Raymond AA. Frequency of the HLA-B * 1502 allele contributing to carbamazepine-induced hypersensitivity reactions in a cohort of Malaysian epilepsy patients[J].Asian Pacific Journal of Allergy and Immunology,2011.290-293.

[8]Kaniwa N,Saito Y,Aihara M. HLA-B locus in Japanese patients with anti-epileptics and allopurinol-related Stevens-Johnson syndrome and toxic epidermal necrolysis[J].Pharmacogenomics,2008.1617-1622.

[9]Hung SI,Chung WH,Jee SH. Genetic susceptibility to carbamazepine-induced cutaneous adverse drug reactions[J].Pharmnacogenet Genomics,2006.297-306.