犬急性水肿型胰腺炎胰液外引流模型的制备及胰腺外分泌功能的观察
发表时间：2012-06-05 浏览次数：711次
作者：金约朋1,程水兵2,周蒙滔1,张启瑜1 作者单位：(温州医学院第一附属医院，浙江 温州 325000，1.普外科;2.创伤外科)
【摘要】目的 建立犬急性水肿型胰腺炎胰液外引流模型，观察胰腺外分泌的功能。方法 健康杂种犬12只，分为对照组和胰腺炎组，每组6只。制备犬胰液外引流模型后24 h，5%牛磺胆酸钠(0.5 mL/kg)1 mL/min胰管逆行注射制备急性水肿型胰腺炎模型。每12 h收集胰液一次，测定胰液的分泌量，胰液中淀粉酶、脂肪酶、总蛋白、pH值和主要电解质含量。制模后在不同时段采血，检测血中的淀粉酶、脂肪酶的浓度。取胰腺组织行病理学检查。结果 成功建立犬急性水肿型胰腺炎胰液外引流模型。胰腺炎组胰液分泌量，胰液中淀粉酶、脂肪酶、总蛋白、HCO3-含量和pH值低于对照组(P<0.05)，Cl-高于对照组(P<0.05)。胰液中的Na+、K+、Ca2+、Mg2+胰腺炎组与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论 本模型适用于急性水肿型胰腺炎胰腺外分泌功能的研究。
【关键词】 胰腺外分泌;模型，动物;胰腺炎;犬
Abstract Objective To establish dogs’ pancreatic juice external drainage models of the edematous pancreatitis for the observation on pancreatic exocrine secretion function. Methods Twelve healthy dogs were randomly divided into control group and pancreatitis group， each group had six dogs. The dogs’ pancreatic juice external drainage models of the edematous pancreatitis was induced by injecting 0.5 mL/kg of 5% sodium taurocholate with the speed of 1 mL/min into the pancreas via pancreatic duct after 24 h of the preparation of dogs’ pancreatic juice external drainage models. Pancreatic juice flow and the output of amylase， lipase， protein， pH， HCO3-， Na+， K+， Cl-， Ca2+， Mg2+ in pancreatic juice were determined for every 12 h. Output of amylase and lipase in blood was determined in different times in pancreatitis group. Pancrease pathology of dog were observed under light microscope. Results The dogs’ pancreatic juice external drainage models of the edematous pancreatitis were established successfully. Compared with the control group， in pancreatitis group， pancreatic juice flow and output of amylase， lipase， protein， HCO3- in pancreatic juice decreased (P<0.05)， output of Cl- in pancreatic juice increased (P<0.05)， output of Na+， K+， Ca2+， Mg2+ in pancreatic juice had no difference between two groups (P>0.05). Conclusion The dog’s pancreatic juice external drainage model is suitable for the study of function of edematous pancreatic exocrine secretion.
Key words pancreatic exocrine secretion; models， animal; pancreatitis; dogs
虽然急性胰腺炎(acute pancreatitis，AP)的诊断与治疗取得很大的进步，但其病死率高、治疗费用昂贵、并发症多等依然是困扰外科界的难题之一。急性胰腺炎后胰腺外分泌功能的变化是选择治疗的关键因素，但是AP后胰腺外分泌的变化目前尚无定论，故胰腺外分泌变化成为人们所关注的问题。建立一种适合胰腺外分泌研究的动物模型，将有助于胰腺外分泌的基础研究，进而将有利于发病机制的研究和临床治疗的指导。
1 材料和方法
1.1 实验动物 健康杂种犬12只，雌雄不拘，体质量10～14 kg，随机分为对照组和胰腺炎组，每组6膀胱造瘘。③显露十二指肠以及胰腺，取距幽门约7 cm处切开十二指肠系膜缘对侧肠壁纵形切口约2 cm，于十二指肠降部的肠腔内后壁黏膜面可见1.0～1.5 mm直径的白色脐样凹陷，即为十二指肠小乳头(主胰管开口于此)。④主胰管插管固定：a.沿十二指肠小乳头开口插入中心静脉导管约1.5～2.5 cm，在胰腺与十二指肠交界处，靠近十二指肠，双侧均用1号丝线贯穿全层“8”字缝合固定导管。b.中心静脉导管从十二指肠壁另戳孔引出，与十二指肠固定，间断全层内翻缝合十二指肠切口。c.将胰腺和十二指肠放回原处，十二指肠浆肌层与相邻的腹膜缝合一针，中心静脉导管在腹壁上戳孔引出体外，固定在皮肤上。⑤术后禁食，每天按(125±25)mL/kg交替使用10%葡萄糖注射液和5%葡萄糖注射液，补充氯化钾1.0 g/d、氯化钠1.0 g/d。术后3日每日给予灭滴灵50 mL/bid和头孢噻肟钠0.5 g/bid预防感染。
1.2 动物模型的制作
1.2.1 犬胰液外引流模型的制备：①术前禁食36 h，禁饮12 h，盐酸氯胺酮注射液1 mL/5 kg肌肉注射后，1.5%戊巴比妥钠以1.5 mL/kg的剂量缓慢静脉推注麻醉，将实验犬仰卧位固定于手术台上，切口周围15 cm范围内脱毛，常规消毒铺巾，取腹正中切口，长约8～12 cm，逐层进腹。②用14号导尿管行
1.2.2 急性水肿型胰腺炎胰液外引流模型的制备：在犬胰液外引流模型制备24 h后，5%牛磺胆酸钠(0.5 mL/kg)以1 mL/min的速度从十二指肠小乳头插入胰管的中心静脉导管注入，夹管滞留5 min。
1.2.3 对照组的制备：犬胰液外引流模型制成后引流胰液。胰腺炎组犬制备急性水肿型胰腺炎胰液外引流模型后引流胰液。
1.3 标本的采集和检测 ①胰液生化指标的检测：每12 h收集胰液，测量胰液中的Na+、K+、Cl-、Ca2+、Mg2+、淀粉酶、脂肪酶、总蛋白、pH值、HCO3-(应用日立7600全自动生化仪和AVL compact 3血气分析仪检测)。②胰液量的测定：制模后有胰液流出并稳定1 h后，每12 h收集胰液一次，用量桶测量。③血液生化指标的检测：术前抽取静脉血5 mL，5%牛磺胆酸钠胰管逆行注射后1 h、12 h、24 h、48 h、96 h各抽取静脉血5 mL，测血清中的淀粉酶、脂肪酶(应用日立7600全自动生化仪检测)。④制模后第4天，剖腹探查，取胰腺组织行病理学检查。
1.4 统计学方法
结果用均数±标准差(x±s)表示，采用SPSS10.0统计软件处理，两样本均数的比较采用独立样本的t检验。
2 结果
2.1 胰液情况
胰腺炎时胰液分泌量、胰液中淀粉酶、脂肪酶、总蛋白含量和pH值的变化情况见表1。在第1天和第2天，胰液分泌量，胰液中的淀粉酶、脂肪酶、总蛋白、pH值胰腺炎组均低于对照组(P<0.05)。
2.2 胰腺炎时胰液中主要电解质的变化情况
胰腺炎组胰液中的Cl-在第1天和第2天均高于对照组(P<0.05)。胰腺炎组胰液中的HCO3-浓度在第1天和第2天均低于对照组(P<0.05)。胰液中的Na+、K+、Ca2+、Mg2+胰腺炎组与对照组无明显的差异(P>0.05)，见表2。
2.3 胰腺炎时血淀粉酶和脂肪酶的变化
建立胰管逆行注射牛磺胆酸钠急性水肿型胰腺炎模型后1 h，血淀粉酶和脂肪酶明显升高，淀粉酶24 h达高峰，脂肪酶12 h达高峰，第4天时血淀粉酶和脂肪酶均没有接近正常值(见图1)。
2.4 病理学检查
制模后的胰腺炎组，胰腺间质水肿，炎性细胞浸润，未见出血坏死，可见散在的脂肪坏死灶，符合急性水肿型胰腺炎的病理改变。
3 讨论
经典理论认为胰酶的异常激活与胰腺自身消化是急性胰腺炎发病的重要原因。然而，胰酶如何激活以及胰腺自身消化的病理过程尚不清楚。近年来，随着对急性胰腺炎胰腺细胞分泌功能的研究，急性胰腺炎时胰腺外分泌功能的研究日益受到重视。犬急性水肿型胰腺炎胰液外引流模型可动态观察其胰腺外分泌的变化，有利于急性胰腺炎的治疗。
本实验建立了犬急性水肿型胰腺炎胰液外引流的模型。制模后1 h，血淀粉酶和脂肪酶明显升高，胰腺病理可见胰腺间质水肿，炎性细胞浸润，符合水肿型胰腺炎的改变，可以说明本实验模型的成功建立。
急性胰腺炎后胰腺外分泌功能的变化是选择治疗的关键因素，但是AP后胰腺外分泌的变化目前尚无定论。Niederau等[1]的研究发现，雨蛙素诱导的大鼠急性胰腺炎时的基础分泌和胆囊收缩素-8 (cholecystoskinin-8，CCK-8)刺激下的分泌早期均有显著下降，而CCK-8刺激下的胰酶分泌几乎为零，胰外分泌的机能障碍与胰腺组织病变的严重程度有密切的关系。Bielecki等[2]的研究证明，急性胰腺炎时胰腺腺泡消化酶的蛋白合成和分泌已显著降低且促分泌酶的分泌也降低。Symersky[3]等对急性胰腺炎患者的胰腺功能的恢复进行了前瞻性研究，发现胰腺炎后部分患者存在胰腺外分泌功能的受损。但是部分实验研究结果却恰恰相反，Sata等[4]采用雨蛙素诱导大鼠急性胰腺炎时发现胰液的基础分泌量显著增高，胰液中的淀粉酶、脂肪酶含量也显著升高。本实验结果表明急性水肿型胰腺炎早期胰腺外分泌功能呈下降的趋势，短期内未见升高。急性胰腺炎时外分泌大幅度下降，呈低分泌状态，胰液的分泌量，胰液中的淀粉酶、脂肪酶、总蛋白、pH值、HCO3-的含量均较正常对照组明显降低，胰液中的主要阴离子Cl-、HCO3-的总和保持恒定，大致等于Na+和K+的总和。
AP时影响胰腺外分泌功能变化的因素是错综复杂的，但是AP时胰腺外分泌功能如何变化对治疗是至关重要的。本模型将有助于急性水肿型胰腺炎胰腺外分泌功能的研究。
【参考文献】
[1] Niederau C， Niederau M， Luthen R， et al. Pancreatic exocrine secretion in acute experimental pancreatitis[J]. Gastroenterology，1990，99(4)：1120-1127.
[2] Bielecki K， Wiedmann M， Meyer F， et al. Effect of 5-Fluorouracil on secretion and synthesis of pancreatic digestive enzymes：studies in isolated pancreatic acini and perfused pancreas derived from normal rats and from rats with acute necrotizing pancreatitis[J]. Pancreas，1994，9(4)：518-525.
[3] Symersky T， van Hoorn B， Masclee AA. The outcome of a long-term follow-up of pancreatic function after recovery from acute pancreatitis[J]. JOP，2006，7(5)：447-453.
[4] Sata N， Kimura W， Muto T， et al. Exocrine function of caerulein-induced acute pancreatitis in anesthetized rats[J]. J Gsatroenterol，1996，31(1)：94-99.
