氧化苦参碱治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的作用机制

　　作者：梁建新 屈杏芬 曾文铤 朱科伦 张鹤 卫建筠 作者单位：广州医学院第一附属医院感染内科，广东 广州 510120

　　【摘要】目的 探讨氧化苦参碱在治疗慢性乙型肝炎(CHB)病情发展中抗纤维化的作用机制。方法 将80例CHB患者分为两组，在常规护肝及支持治疗基础上，治疗组40例用氧化苦参碱注射液150 mg静脉滴注，对照组40例以古拉定1.2 g静脉滴注，疗程8 w。治疗前后检测患者肝功能、肝纤维化指标及血清组织生长因子(TGF)β1、肿瘤坏死因子(TNF)α、白介素(IL)10变化。结果 治疗后两组肝功能均明显改善，两组间比较无统计学差异(P>0.05);肝纤维化指标透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CⅣ)治疗组明显低于对照组(均P<0.01);治疗组血清中TGFβ1、TNFα水平显著降低，IL10水平显著增高，与对照组对比均有显著性差异(P<0.05，P<0.01)。结论 氧化苦参碱治疗CHB通过降低血清细胞因子TGFβ1、TNFα水平，升高IL10水平，发挥抗肝纤维化作用。

　　【关键词】 慢性乙型肝炎;肝纤维化;氧化苦参碱;细胞因子

　　基础研究已证实氧化苦参碱(oxymatrine,Oxy)具有抗乙肝病毒和防治肝纤维化作用〔1，2〕，Oxy近年在慢性乙型肝炎(CHB)患者治疗中亦取得良好疗效〔3，4〕，但其作用机制未完全明确〔5〕。本研究从细胞因子水平进一步探讨Oxy在治疗CHB中抗纤维化的作用机制。

　　1 材料与方法

　　1.1 对象

　　根据2000年西安会议修订的病毒性肝炎防治方案诊断标准〔6〕，选择2006年2月至2008年12月在本院感染病科住院的CHB患者80例。具体入选条件为：①CHD患者;②乙型肝炎病毒复制指标HBV DNA(+)和(或)HBeAg(+);③治疗前3个月未用其他抗病毒药物及抗肝纤维化药物。所有患者排除甲、丙、丁、戊型肝炎病毒感染及自身免疫性肝炎。

　　1.2 分组

　　80例CHB患者随机分为治疗组与对照组。治疗组40例，男36例，女4例，年龄24～53岁，平均(37.6±10.2)岁;对照组40例，男37例，女3例，年龄23～55岁，平均(38.4±10.4)岁。两组病例在年龄、性别分布、治疗前肝功能和乙型肝炎病毒复制情况等方面经统计学处理无显著差异，有可比性。

　　1.3 治疗方法

　　两组患者均给予甘利欣、维生素等常规护肝及支持等一般治疗;治疗组在一般治疗的基础上用氧化苦参碱注射液150 mg加入生理盐水250 ml静脉滴注，1次/d，疗程8 w。对照组仅在一般治疗的基础上加用还原型谷胱甘肽(古拉定,意大利斯德大药厂生产)1.2 g加入10%萄糖注射液250 ml静脉滴注，1次/d。疗程8 w。治疗期间均不加用其他抗病毒及抗纤维化等药物。

　　1.4 观察指标

　　1.4.1 肝功能指标

　　全自动生化检测仪检测丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TB)、白蛋白(ALB)。

　　1.4.2 血清肝纤维化指标

　　检测透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CⅣ)，应用放射免疫法，试剂盒购自上海海军医学研究所。

　　1.4.3 细胞因子检测

　　血清组织生长因子(TGF)β1、白介素(IL)10应用ELISA法检测，试剂盒购自深圳晶美生物工程有限公司(美国Genzyme公司产品分装);肿瘤坏死因子(TNF)α试剂盒购自第四军医大学免疫室，采用双抗体夹心ELISA法检测。

　　1.5 统计学分析

　　所有数据均采用SPSS13.0软件分析。计量资料比较采用t检验，计数资料比较采用χ2检验。

　　2 结 果

　　2.1 两组治疗前后肝功能变化

　　两组治疗8 w后ALT、AST、TB水平较治疗前明显下降(P<0.01)，ALB水平较治疗前明显升高(P<0.05);但两组治疗后ALT、AST、TB、ALB水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。表1 两组治疗前后肝功能指标比较(略)

　　2.2 两组治疗前后血清肝纤维化指标变化

　　治疗组治疗后HA、LN、PCⅢ、CⅣ水平较治疗前明显下降(P<0.01)，而对照组HA、LN、PCⅢ、CⅣ水平治疗前后比较差异均无统计学意义(P>0.05);治疗组治疗后HA、LN、PCⅢ、CⅣ水平明显低于对照组(P<0.01)。见表2。表2 两组治疗前后血清肝纤维化指标比较(略)

　　2.3 两组治疗前后血清TGFβ1、TNFα、IL10水平变化

　　治疗组治疗后TGFβ1、TNFα水平较治疗前显著下降(P<0.01)， IL10水平明显增高(P<0.05);治疗组治疗后TGFβ1、TNFα水平明显低于对照组(P<0.01)，IL10水平明显高于对照组(P<0.05)。而对照组TGFβ1、TNFα、IL10水平治疗前后比较均无显著差异(P>0.05)。见表3。表3 两组治疗前后血清TGFβ1、TNFα、IL10水平变化比较(略)

　　3 讨 论

　　目前国内外对治疗肝纤维化未能取得突破性进展，近年发现中药能调控某些细胞因子及其受体，从而影响其入核及其下游相关的信号传导，最终阻止肝纤维化的发展。中药氧化苦参碱是一类具有苦参次碱15酮基本结构的化合物，具有护肝、降酶、退黄、抗纤维化、抗病毒等药理作用，并广泛应用于临床〔3，4〕。本研究表明治疗组与对照组治疗前后肝功能差异均有统计学意义，治疗组细胞因子水平及血清肝纤维化指标治疗前后比较差异均有统计学意义，而对照组细胞因子水平及血清肝纤维化指标治疗前后比较差异无统计学意义，说明氧化苦参碱能更好地减轻肝脏炎性活动，改善肝功能，降低患者血清肝纤维化指标，具有较好的抗肝纤维化作用。

　　氧化苦参碱抗纤维化机制可能是：(1)降低TGFβ1水平。肝纤维化发病机制的研究表明，肝星状细胞(hepatic stellate cells，HSCs)激活与转化是肝纤维化形成的关键，其激活与许多细胞因子有关，其中TGFβ1尤为重要。细胞因子TGFβ1的激活不仅是肝细胞再生终止信号，而且是最有力的致纤维化因子， 其调控肝内细胞外基质的合成与降解〔7〕。在慢性肝炎或肝纤维化形成过程中，肝间质细胞(枯否s细胞、HSCs、上皮细胞)对TGFβ1表达增加，且实质细胞对其的表达也被启动。HSC被大量激活使其表型变化转化为肌纤维母细胞，合成、分泌TGFβ1增加;可促进肝间质细胞合成多种胶原蛋白(Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ等胶原蛋白)、非胶原蛋白(纤维连接素、层黏连蛋白等)和蛋白多糖(透明质酸等)等多种肝内细胞外基质成分，并抑制胶原酶及基质金属蛋白酶使胶原降解减少，从而导致肝组织纤维化。本研究结果显示，氧化苦参碱能显著降低CHB患者血清TGFβ1水平，通过抑制肝星状细胞活化分泌细胞外基质(ECM)，发挥抗纤维化作用。(2)降低TNFα水平。血清TNF α水平与肝脏炎症及纤维化程度呈正相关，并且对TGFβ1促进ECM成分的合成有抑制作用。本研究结果显示，氧化苦参碱治疗后CHB患者血清TNFα水平及TGFβ1水平均降低，抑制肝星状细胞活化，减少释放ECM，从而具有抗纤维化作用。(3)增加IL10水平。研究发现IL10有抑制Ⅰ型胶原表达、促进胶原酶合成影响ECM沉积，延缓肝纤维化进程〔8〕。本研究结果显示，治疗组治疗后CHB患者血清IL10水平明显增高。而与对照组治疗后比较，IL10水平亦明显增高，IL10可能通过细胞因子间的网络调节起抗纤维化作用。

　　【参考文献】

　　1 李继强,陈萦晅,曾民德,等.氧化苦参碱抗乙型肝炎病毒的体外实验研究〔J〕.中华消化杂志,2001;21(9)：5502.

　　2 陈从新,顾月华,刘 波,等.氧化苦参碱对大鼠贮脂细胞增殖和胶原合成的抑制作用〔J〕.肝脏,2000;5(4)：21920.

　　3 陈所贤,贾 杰,邱 平.苦参碱治疗慢性乙型肝炎疗效观察〔J〕.中国热带医学杂志,2001;1(3):2279.

　　4 王俊学,王国俊.苦参碱及氧化苦参碱的药理作用及临床应用〔J〕.肝脏,2000;5(2):1167.

　　5 李湘平,尹 桃,侯周华.氧化苦参碱治疗慢性重度乙型肝炎的临床研究〔J〕.医学临床研究,2008;25(3):4424.

　　6 中华医学会传染病与寄生虫学分会、肝病学分会.病毒性肝炎防治方案〔J〕.中华肝脏病杂志,2000;8(6):3249.

　　7 Mao YM，Zeng MD,Lu LD,et al.Capsule oxymatrine in treatment of hepatic fibrosis due to chronic virus hepatitis: a randomized doubleblind placebocontrolled multicenter clinical study〔J〕.World J Gastroenterol，2004;10(22):326973.

　　8 Wang SC,Ohata M,Schrum L,et al.Expression of interleukin10 by in vitro and in vivo activated hepatic stelmate cells〔J〕.J Biol Chem,1998;273(1):3028.