nm23基因与鼻咽癌的转移及预后的相关性

作者              单位

杨志诚　　广东医学院附属医院,广东湛江524000

鼻咽癌(NPC) 患者的死亡原因主要是转移和(或) 复发。探讨鼻咽癌的转移复发机制,了解NPC复发、转移倾向,对提高NPC 患者生存率具有重要意义。nm23-H1是一种肿瘤转移抑制基因,本研究应用免疫组化S-P法研究nm23-H1在鼻咽癌与淋巴结转移及预后的关系

1 资料与方法

1.1 一般资料：2005年7月～2007年7月广东医学院附属医院肿瘤科的住院的180例鼻咽癌患者(经病理确诊的),根据nm23-H1表达情况，分为nm23-H1表达阳性组和nm23-H1表达阴性组，其中男103例,女77例,年龄16～75岁,平均年龄46岁。所有患者均尚未接受化疗或放疗。根据WHO进行病理分级Ⅰ级88例，Ⅱ级和Ⅲ级92例。按TNM 标准临床分期分为：T1期、T2期肿瘤64例，T3期、T4期肿瘤116例。

1.2 方法：所有标本经10%的甲醛固定,常规脱水,石蜡包埋,4 μm厚度切片。采用免疫组织化学链霉菌亲生物素蛋白-过氧化物酶法(S-P法)，石蜡包埋组织切片于60℃烤箱中烘烤2 h,二甲苯脱蜡,梯度乙醇水化,0.1 %胰蛋白酶消化抗原修复,过氧化物酶阻断剂10 min，以去除内源性过氧化物酶,正常非免疫动物血清室温封闭10 min，加第一抗体于4℃冰箱过夜;加生物素标记第二抗体室温下作用10 min,加链霉菌素亲生物素蛋白-过氧化物酶溶液,室温下作用10 min。DAB显色,自来水冲洗后苏木精复染,脱水、透明中性树胶封固。PBS代替第一抗体作为阴性对照;用已知的阳性组织切片,在相同条件下染色,作为阳性对照。

1.3 结果判定：nm23-H1蛋白定位于细胞的胞浆或核周,呈棕黄色。根据阳性细胞数和显色强弱分为:①阴性(-):nm23-H1阳性细胞<10 %;②阳性( + )：nm23-H1阳性细胞11 %～29%;③阳性(+ +)：nm23-H1阳性细胞30 %～59 %;④阳性( + + + )：nm23-H1阳性细胞>60% 。

1.4 统计学处理：应用SAS(8.0) 统计软件,采用χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 鼻咽癌组织中nm23蛋白的表达：180例鼻咽癌患者病变组织中nm23蛋白的阳性表达率为73.3%(132/180);50例慢性鼻咽炎患者病变组织中nm23蛋白的阳性表达率为84.0%(42/50)，而且都是强阳性表达,二者比较差异无统计学意义(χ2=2.42,P>0.05)。

2.2 nm23蛋白和鼻咽癌颈淋巴结转移及预后的关系：伴颈淋巴结转移者的nm23蛋白的阳性表达率为49.8%,无颈淋巴结转移者的nm23蛋白的阳性表达率为88.6%,二者比较差异无统计学意义(χ2=6.68,P<0.01) 。生存期≥2年者的nm23蛋白的阳性表达率为80%,生存期<2年者的nm23蛋白的阳性表达率为38.7%,二者比较差异有统计学意义(χ2=7.40,P<0.01) 。

2.3 nm23-H1蛋白表达与性别、年龄的关系：在103例男性中阳性表达率为49.5%(51/103)，在77例女性中阳性表达率为59.7 %(46/77)，两组比较差异无统计学意义(P>0.05) 。以10年为一年龄段,16～75岁各年龄段内阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05) 。

3 讨论

目前，nm23基因是研究最多的肿瘤抑制基因，它最先是从鼠黑色素瘤细胞系cDNA基因文库中分离鉴定出来的。它能够调节细胞增殖、分化、迁移和凋亡,并影响胚胎的早期发育，这些功能可能影响了癌症的发展，但nm23-H1似乎更多地参与了肿瘤转移的调节[1]。Leone认为[2]，nm23等位基因的丢失与病情恶化、广泛转移、复发及死亡关系密切。nm23基因的点突变、等位基因丢失均可使nm23蛋白减少，进而丧失对肿瘤转移的抑制功能。nm23表达降低与肿瘤的转移复发及低生存率等显著相关,低nm23表达提示预后不佳。已有研究表明[3],在人类多种肿瘤如肝癌、肺癌、大肠癌、卵巢癌中,nm23-H1蛋白的表达与肿瘤的转移及临床预后呈负相关。

本研究结果显示，鼻咽癌组织中nm23 蛋白的阳性表达率与慢性鼻咽炎比较差异无统计学意义(P>0.05)，伴颈淋巴结转移者的nm23 蛋白的阳性表达率显著低于无颈淋巴结转移者，生存期<2年者的nm23 蛋白的阳性表达率显著低于生存期≥2年者，提示nm23 蛋白的表达与鼻咽癌的发生无关，但与癌细胞颈淋巴结转移和预后有关，低表达者易转移、生存期短，且nm23 蛋白的阳性表达率与患者的年龄和性别无关。以上的结果和Guo X等的报道是相符的[4],报道指出nm23蛋白的表达与鼻咽癌转移能力呈负相关,伴有淋巴结转移者的nm23 蛋白的阳性表达率下降。我国陈善义等学者也有相似的结论[5]。nm23表达影响鼻咽癌的预后可能通过如下功能实现:①nm23蛋白具有NDPK活性;②nm23的表达产物有一种c-myc基因转录高度同源抑制基因活性;③nm23基因参与细胞发育及生化作用。

因此,研究鼻咽癌患者活检标本中转移抑制基因nm23的表达情况,对于预测颈淋巴结转移的出现趋势、临床的预后评估及将来可能进行的基因治疗有指导作用和实用意义。

【参考文献】

[1]Suzuki E，Ota T，Tsukuda K，et al.nm23-H1 reduces in vitro cell migration and the liver metastatic potential of colon cancer cells by regulating myosin light chain phosphorylation[J].Int J Cancer，2004，108(2)：

[2]Leone.Somatic allelic deletion of nm23 in human cancer[J].Ganger Res，1991，51(9)：

[3]施更生，甘梅富，陈葆国.头颈部鳞癌抑癌基因nm23-H1的表达、DNA陪体与淋巴结转移的关系[J].实用口腔医学杂志,2003，19 (5)：

[4]Guo X，Min HQ，Zeng MS，et al.nm23- H1 expression in nasopharyngeal carcinoma：correlation with clinical outcome[J]. Int J Cancer，1998,79(6)：

[5]陈善义，王秀清，李先明，等.鼻咽癌P16 和nm23- H1 基因表达的意义[J].中国中西医结合耳鼻咽喉科杂志，2005，13( 3).