枸杞多糖对衰老小鼠肾小球形态学指标的影响

　　作者：刘晓梅,陈尚　　作者单位：苏州卫生职业技术学院护理系，江苏 苏州 215009

　　【摘要】 目的 探讨枸杞多糖(Lycium Barbarum Polysaccharides,LBP)抗肾脏衰老的作用。方法 建立小鼠衰老模型，以LBP连续灌胃6 w，采用光镜，透射电镜，组织化学方法对小鼠肾小球各项形态学指标进行定量分析。结果 LBP组肾小球形态，肾小球硬化率，肾小球平均细胞数，肾小球内微血管指标，肾小球基底膜厚度均较老年对照组有显著差异(P<0.05或P<0.01)。结论 枸杞多糖具有较好的预防或延缓小鼠肾脏衰老的作用。

　　【关键词】 枸杞多糖;抗衰老;肾小球;滤过屏障

　　枸杞属茄科植物，是一种价廉常用的中草药，具有滋补肝肾，益精明目及强身的功能。中医的一些长寿名方中都有其配伍，如龟龄集﹑格氏还少丹﹑八味丸等。枸杞多糖(Lycium Barbarum Polysaccharides,LBP)是枸杞子的主要功能成分之一,具有多种药理作用和生物活性功能〔1〕。本文从形态学角度研究LBP对衰老小鼠肾小球的作用，为中草药的临床应用和推广提供理论依据。

　　1 材料与方法

　　1.1 实验动物及分组 昆明种健康小白鼠60只，3月龄，体重(20±5)g，雌雄各半。由佳木斯大学实验动物中心提供。小白鼠每日背部皮下注射D半乳糖，按每只小鼠100 mg/kg体重的剂量给药，连续6 w，形成糖代谢紊乱所致的亚急性衰老模型。随机分为3组,每组各20只。LBP组：每日在注射D半乳糖的同时给予LBP 100 mg•kg-1•d-1，用生理盐水稀释，按0.2 ml/10 g灌胃连续6 w。正常对照组及衰老模型组每日生理盐水0.2 ml/10 g体重灌胃1次。

　　1.2 实验药品及设备 LBP由佳木斯大学药剂研究室从宁夏枸杞中分离提纯，纯度99.8%。D半乳糖为上海试剂二厂产品。Olympus生物显微镜(BH2型,日本)，电镜1200EX(KCQⅠ型,上海)，BI2000病理图像分析系统(成都)。

　　1.3 实验方法 于最后1次灌胃后4 h断头处死动物,迅速取出双肾。光镜标本：常规石蜡切片3 μm厚。①HE染色,每个肾组织块随机取1张切片,观察肾小球,肾小管的形态变化,100倍视野下计数肾小体数目、硬化肾小体数并计算硬化肾小体的比例。400倍视野下每片选取20个最大肾小球,测量肾小体直径,肾小囊宽,计数肾小球平均细胞数。②PAS染色,更好地显示血管基底膜观察肾组织内微血管变化。400倍视野下随机选取20个肾小球,采用BI2000图像分析系统测定肾小球面积、毛细血管袢腔面积占丝球体面积的百分比及肾小管周毛细血管数。电镜标本：用JEM1200EX透射电镜观察。光学放大至20 000倍电镜照片测基底膜厚度，裂孔隙宽度和毛细血管内皮窗孔大小(每隔2 cm测一个数据)。

　　1.4 统计学处理 数据以x±s表示，一般资料组间比较用秩和检验，硬化肾小体百分率用U检验，肾小球细胞数用Poisson分布检验。

　　2 结 果

　　2.1 各组小鼠肾小体观察结果 衰老模型组小鼠肾小体体积增大，局灶节段性肾小体硬化，灶状肾小管萎缩，间质纤维化，少量单核细胞浸润。衰老模型组肾小体与正常对照组相比体积增大，数量减少，硬化肾小体比例显著增加，肾小囊腔增宽，基底膜增厚且不均匀，足细胞裂孔隙变小，内皮窗孔增大。LBP组与衰老模型组肾小体形态和数量有明显差异(见表1)。

　　2.2 各组小鼠肾组织内微血管观察结果 衰老模型组肾脏中微血管数目和肾小体血管袢面积/丝球体面积(%)明显降低，LBP组血管数目增多,肾小体体积面积减小。 各组小鼠光镜下每个视野肾小体、硬化肾小体计数及测量结果与正常对照组比较:1)P<0.01,2)P<0.05;与衰老模型组比较:3)P<0.05

　　2.3 各组小鼠透射电镜观察肾小体滤过屏障结果 衰老模型组基底膜增厚，裂孔隙变小，LBP能修复受损的滤过屏障。各组小鼠肾组织内微血管变化与正常对照组比较：1)P<0.01;与衰老模型组比较：2)P<0.05，电镜肾小体滤过屏障定量结果

　　3 讨 论

　　本研究显示衰老模型组与正常对照组相比肾小球体积增大，局灶节段性肾小球硬化，硬化肾小球比例显著增加，灶状肾小管萎缩，间质纤维化，电镜见肾小囊腔增宽，基底膜增厚且不均匀，足细胞裂孔隙变小，内皮窗孔增大。肾小体硬化与血流动力学改变因素有关。本实验还显示衰老模型组肾组织内微血管变化，肾小球和肾小管周围毛细血管含量明显减少。这可能是因为衰老小鼠肾脏中微血管内皮细胞适应性生存能力减退，随增龄肾脏出现血管生成障碍。肾小球内皮细胞减少导致基底膜暴露、激活凝血系统、继而形成血管壁塌陷、节段硬化〔2〕。肾小球内VEGF表达代偿性增加很可能参与肾小球硬化的过程〔3〕。肾小球内平均细胞数各组结果无明显差异，可能因为内皮细胞减少的同时有系膜细胞的代偿性增生。系膜细胞分泌基质成分增多以及血浆蛋白的沉积等因素与基底膜增厚密切相关〔4〕。

　　LBP组的各项指标与衰老模型组相比有显著差异，趋向于正常对照组。目前有关衰老的学说几乎都与自由基有关。衰老就是身体内自由基的产生与清除的动态平衡受到破坏，过剩的自由基使基因突变，代谢异常而导致的。枸杞中的多种成分被证实具有很强的清除自由基、抗氧化的作用〔5〕。其中LBP还具有明显的免疫促进作用，胡萝卜素是天然的非酶系统自由基清除剂，且无维生素E那样的毒性。枸杞可能主要通过上述途径抗肾衰老。本实验证明LBP还可能通过改善肾微循环延缓肾脏衰老改善肾结构，能显著改善衰老肾脏血液循环和肾组织形态。本实验从形态学角度证实LBP具有强大的可靠的预防和延缓肾衰老作用，是一种值得推广的新型中草药。

　　【参考文献】

　　1 王浴生.中药药理与应用〔M〕.北京：人民卫生出版社，1983：7413.

　　2 张雪光，陈香美，张 利.血管内皮生长因子及其受体随增龄在大鼠肾组织内表达的研究〔J〕.中华老年医学杂志，2003;22 (1)：259.

　　3 Kitamura H,Shimizu A,Masuda Y,et al.Apoptosis in glomerular endothelial cells during the development of glomerulosclerosis in the remnant kidney model〔J〕.Exp Nephrol,1998;6：32836.

　　4 Shimizu A,Kitsmura H,Masuda Y,et al.Rare glomerular capillary regeneration and subsequent capillary regression with endorhelial cell apoptosis in progressive glomerulonephritis〔J〕.Am J Parhol,2007;151：12319.

　　5 李贵荣.枸杞多糖的提取及其对活性氧自由基的清除作用〔J〕.中国现代应用药学，2002;19(2)：946.