程氏分清方改善大鼠肾病综合征高凝状态的实验研究

程根群教授研制的程氏分清方具有补脾益肾、活血化瘀、清热利湿、益气温阳等作用,对肾病综合征(Ns)具有良好的疗效。本研究以血浆血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列腺素(6-KETO-PGF1a)以及组织病理变化等为主要观察指标,旨在探讨程氏分清方改善大鼠血液高凝状态的作用机制,为治疗NS提供理论依据。

1 实验资料

1.1 动物 SD健康雄性大鼠,购自河北省实验动物中心,体质量180-220g。

1.2 主要药品及试剂 注射用盐酸多柔比星(阿霉素)10mg/瓶,浙江海正药业股份有限公司,生产批号:O80501A;泼尼松5mg/片,浙江仙居制药有限公司,批号:970356;程氏分清方由黄芪、生地、当归、白芍、桃仁、红花、益母草、炒白术、茯苓、杜仲、炙附子、桂枝等组成,水煎200mL,浓缩至100mL,含生药1.2g/L。TXB2和6-KETO-PGF1a试剂盒购自中国人民解放军总医院科技开发中心放免研究所。

1.3 实验方法

1.3.1 造模与分组 取健康SD大鼠40只,自由饮食适应性喂养1周后,按简单随机化原则,分成正常对照组(A组)、模型对照组(B组)、程氏分清方治疗组(C组)、程氏分清方加激素治疗组(D组),每组各10只。所有大鼠在实验前尿蛋白定性均为阴性。B、C、D3组参照文献[1]造模,经大鼠尾静脉一次性注射盐酸多柔比星(5.5mg/kg),诱导大鼠NS的肾病模型;A组大鼠则按上述方法在尾静脉注射等量生理盐水。造模后14d,收集24h尿液,检测尿蛋白。

1.3.2 给药方法 造模成功后,每组大鼠于造模后第15天起开始灌胃,分别给予程氏分清方液(C组),程氏分清方和泼尼松(D组),A组和B组则以等容积的生理盐水代替,每日2次灌胃。程氏分清方每日6.0mg/炖计量,泼尼松按每日5.5mg/kg计量,每组连续灌胃28d。

1.4 观察指标

1.4.1 24h尿蛋白定量于注射盐酸阿霉素第14天,治疗后第14天和第28天将大鼠单独喂养在代谢笼中,收集24h尿液,记录尿量,检测尿蛋白。

1.4.2 血液生化指标 于治疗后第28d(即实验结束时)全部大鼠眼眶取血2管,一管离心后用于测定血清白蛋白(川b)、尿素氮(BUN)、血清肌酐(Cr)、三酰甘油(TG)、胆固醇(CH);另一管抗凝,离心后采用放射免疫法测定血浆TⅩB2和6-ΚETO-PGF1a水平。

1.4.3 肾组织病理形态学观察全部大鼠眼眶放血的同时,处死上述动物,各组随机选3只大鼠,取部分新鲜肾组织分别行光镜和电镜观察。

1.5 统计学处理 所有数据均用SPSS11.0统计软件,计量资料用x±s表示,采用方差分析,各组均数间的两两比较采用LSD-t检验。检验水准α=0.O5。

2 结果

2.1 尿蛋白测定结果见表1。

2.2 血清生化指标 见表2。

2.3 TⅩB2和6-ΚETO-PGF1a水平 见表3。

2.4 形态学观察结果

2.4.1 光镜观察 B组可见肾小球体积增大,明显充血,肾小囊变窄,病变肾小球周围的近曲小管上皮细胞变性肿胀,管腔变小,部分小管腔内可见蛋白管型。见图1。C组可见肾小球肿大不明显,无明显充血,肾小囊及肾小管恢复正常见图2。

2.4.2 电镜观察 B组可见足突细胞的足突广泛融合,足突间隙消失,基底膜薄厚不均,毛细血管腔内有红细胞淤积和一些蛋白类物质,内皮细胞肿胀。见图3。C组可见量融合,基底膜基本正常,未见毛细血管腔内淤血,形态基本正常。见图4。

3 讨论

本实验大鼠肾病综合征模型的病理改变类似于人的微小病变型肾病,其临床表现和实验指标的改变类似中医的“肾虚血瘀”[1]。近年来研究表明,原发性肾病综合征(INS)患儿多伴有明显的高黏滞血症,血液呈高凝状态。这种高凝状态参与了小儿INs的发生发展,是其复发的因素之一,而且易导致血栓形成[2]。TXB2和6-KETo-PGF1n与“血瘀症”密切相关,本实验表明,程氏分清方可显著降低异常TXB2的水平,提高6-KETO-PGF1a的水平,改善肾病大鼠血液的高凝状态,促进微循环,消除血栓,促使毛细血管通畅,从而减轻肾组织的损害。

本实验病理形态学也证实:治疗组可明显减轻毛细血管充血状态,血管腔未见阻塞,内皮细胞和基底膜基本恢复正常,足突融合明显改善,提示程氏分清方对肾病大鼠的肾组织及功能具有保护作用。

现代药理学研究表明,黄芪具有消除尿蛋自,增强肾血流量,对机体有免疫调节作用,可提高非特异性免疫功能,是一类无毒的免疫促进剂[3];同时可降低血小板的活化程度,改善高脂血症引起的高凝状态,减少蛋白尿的排出[4]。生地、当归、白芍、桃仁、红花、益母草具有养血活血、活血化淤、利尿消肿之功效;益母草具有抑制血小板聚集和抗凝之作用[5];杜仲、炙附子、桂枝具有补肾升阳,通阳活血之功效,通过改善微循环,调节组织的修复与再生,增加肾血流量,提高肾小球滤过率,降低肾小球内压,从而改善肾功能,降低尿蛋自[6]。方剂中诸药并用,能改善大鼠肾病综合征的症状,能显著改善高凝状态,促进微循环,减轻肾脏病理损害,减少尿蛋白的排泄量。

[参考文献]

[1]郑健,吴群励,廖国华.益肾活血法治疗阿霉素肾病大鼠的实验研究[J].中国中西医结合杂志,2004,(z1):124-128.

[2]叶凤,张琦.肾乐方对阿霉素肾病大鼠高凝状态的实验研究[J].浙江中医杂志,2001,(08):362-363.

[3]王彩丽,郭春林,邓利荣.黄芪对肾病综合征治疗作用的研究[J].中国中西医结合肾病杂志,2001,(12):697.

[4]徐巨海,周蓉,杜丽娟.黄芪注射液对肾病综合征患者血小板活化功能的影响[J].中国中西医结合肾病杂志,2002,(04):225.

[5]骆和生,罗鼎辉.免疫中药学--中药免疫药理与临床[M].北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社,1999.90-97.

[6]徐巨海,刘勇宏,赵玉萍.黄金固肾冲剂对实验性肾病综合征大鼠的实验研究[J].深圳中西医结合杂志,2005,(02):65-68.