HPLC法测定柴胡片中柴胡皂苷a的含量

柴胡片由柴胡、甘草、枳实、白芍等药味组成，具有解表散热，疏肝和胃等功效。为了控制产品质量，本文用HPLC法对本品中所含柴胡皂苷a进行了含量测定。1　仪器与试药Agilent1100高效液相色谱仪，包括G1379A脱气机，G1311A四元泵，G1316A柱温箱，G1316A可变波长检测器，G2170AA色谱工作站，UV-2450型紫外可见分光光度计(日本岛津)。柴胡皂苷a对照品(中国生物制品检定所，0715-9909)，甲醇为色谱纯，水为蒸馏水，柴胡片(自制)。2　方法与结果2.1　色谱条件Alltima-C18(5μm,4.6mm×250mm);乙腈-水(35∶65)为流动相;检测波长为208nm;流速1.0mL/min;理论板数按柴胡皂苷a峰计不低于4000。2.2　对照品溶液的制备精密称取柴胡皂苷a对照品适量，加甲醇适量制成每1ml含40μg的溶液，即得。2.3　供试品溶液的制备取重量差异下的本品10片，精密称定，研细，取约0.8g，精密称定，置100ml容量瓶中，加入适量70%甲醇，超声处理(250W,33kHz)30分钟，放冷，用70%甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml，置25ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，以0.45μm微孔滤膜滤过，即得。2.4　阴性溶液的制备取相当于供试品量的药材(除柴胡药材)，粉碎成细粉，按供试品溶液制备方法制备阴性液。2.5　测定方法与结果分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性液各10μl，注入高效液相色谱仪，如法测定。2.6　方法考察2.6.1　标准曲线精密称取柴胡皂苷a对照品10.05mg，置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含柴胡皂苷0.1005mg的溶液。精密吸取上述对照品溶液各1.0、3.0、5.0、7.0、9.0ml，分别置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。分别精密吸取上述溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为y= 4019.18977x+61.61624(r=0.99964)线性范围在1.005～9.045μg间呈良好的线性关系。见下图1图12.6.2　加样回收试验精密称取已知含量的样品共6份，分别加入不同量的柴胡皂苷a对照品4.7、4.6、5.0、4.8、4.9、4.6mg，按照供试品制备方法配制成供试品溶液。吸取供试品溶液及对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。结果见表1。表1　柴胡片中柴胡皂苷a含量测定与加样回收率结果2.6.3　精密度试验精密吸取上述40.18μg/ mL浓度的对照品溶液10μL注入液相色谱仪，重复进样6次，计算峰面积RSD=0.66%。见表2。表2　精密度试验2.6.4　重复性试验取同一批号的柴胡片，按2.3供试品溶液制备方法制备六份样品，色谱条件如上所述，计算RSD=1.72%，说明重复性较好。见表3。表3　重复性试验2.6.5　稳定性试验取同一供试溶液，每隔2h测定一次，结果表明在10h稳定性良好。见表4。表4　稳定性试验2.6.6　样品测定按上述方法测定6批样品中黄芩苷的含量，测定结果见表5。表5　六批样品测定结果3　讨论3.1　检测波长的选择：柴胡皂苷对照品溶液在(190～400)nm波长范围内，最大吸收波长为208nm，故本试验选择208mn作为检测波长。3.2　提取方法的选择：本试验分别采用了甲醇超声处理20min、30min、45min3种方法的比较试验，结果表明甲醇超声处理30min的提取效果最好。 本方法可用于柴胡片中柴胡皂苷的测定。【参考文献】[1]　国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京：化学工业出版社，2010：198.[2]　国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京：化学工业出版社，2010：317.[3]　罗燕燕，张绍青，林明美.柴胡药材中皂苷a，b的HPLC测定[J].中国药学杂志，1992,27(4)：215.