高效液相色谱法测定尿毒清胶囊中芍药苷的含量

尿毒清胶囊是尿毒清颗粒的改剂型品种，其主要成分为大黄、甘草、黄芪、白芍等，具有通腑降浊，健脾利湿，活血化瘀作用。用于慢性肾功能衰竭，氮质血症期和尿毒症早期等症。我们用高效液相色谱法对尿毒清胶囊中的白芍的主要活性成分芍药苷进行含量测定，该方法准确、方便、干扰少，可以作为尿毒清胶囊中芍药苷的质量控制标准。1　仪器与材料高效液相色谱仪(Agilent1200)。芍药苷对照品;尿毒清胶囊;乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。2　方法与结果2.1　色谱条件色谱柱：AgilentC18(4.6×250 mm);流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液(20：80);检测波长：230 nm;流速：1 mL/min。2.2　溶液制备对照品溶液的制备：精密称取80℃干燥至恒重的芍药苷对照品10 mg，置50 mL量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，精密量取5 mL，置25 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。(每1 mL含芍药苷O.04 mg)。供试品溶液的制备：取本品内容物，研细，精密称取细粉0.6 g，加70%乙醇30 mL，超声处理30 min，放冷，滤过，滤纸和滤渣用70%乙醇10 mL冲洗，合并洗液和滤液，蒸干，加水5 mL使溶解，加于干聚酰胺柱(3 g,30～60目、内径1.5 cm以内)上，用150 mL水冲洗，收集洗脱液，浓缩至10 mL左右，用水定容至25mL容量瓶中，摇匀，静置，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。2.3　精密度试验取对照品溶液，按正文条件，依法操作，每次进样10 μl，重复进样6次，测定峰面积，平均峰面积为288919.187，RSD为0.99%，本测定法的精密度良好。结果见表1。表1　精密度试验数据2.4　线性关系考察精密称取80℃干燥恒重的芍药苷对照品适量，加水制成浓度为0.2006 mg/mL的溶液，精密称取1、3、5、7、9 mL的对照品溶液，分别置25 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，分别精密量取10 μl注入液相色谱仪中。以峰面积Y为横坐标，芍药苷进样量(μg)为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：Y=696000X+6590(r=0.9998)，芍药苷在0.080μg-0.722μg范围内呈良好的线性关系。2.5　重现性试验分别取同一批号尿毒清胶囊6份，按含量测定项下方法，测定芍药苷含量，并计算样品的RSD值，见表1。　表1　重现性试验2.6　准确度试验取6份已知含量的样品约0.3 g，照样品溶液的制备，精密加入芍药苷对照品适量，按“样品含量测定”方法操作，回收率平均值为100.16%，RSD为0.67%，回收率良好。结果见表2。表2　回收率试验2.6　专属性试验在处方中去除白芍药材，按方中比例和制备工艺方法制成阴性制剂，用供试品溶液制备的方法，制成阴性对照溶液，用以上选定的测定条件进行吸收曲线绘制，在相同的保留时间处，无吸收峰，因此说明选定的条件测定无干扰，具有较强的专属性。2.7　稳定性试验取[含量测定]项制备供试品溶液，室温，密闭放置，于0、2、4、6、9、12 h，分别进样10 μl测定吸收峰面积，计算RSD，经测试，样品溶液平均峰面积为168409.5，RSD=0.76%，证明样品溶液在12小时内测试稳定。见表3。2.8　含量测定限度的确定按此方法进行了十批样品测定，结果见表4表3　稳定性试验表4　含量限度【参考文献】[1]　药典委员会.中国药典2010版一部附录[S].化学工业出版社.[2]　王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究[M].中国医药科技出版社，1994.