感冒软胶囊中葛根素的含量测定及其制剂分析

葛根具有解饥退热，生津、透疹，升阳止泄作用。在葛根中含有葛根素，是处方中的主要活性成分，故选择葛根素含量作为控制本品质量的指标成分，本标准参照有关文献，建立高效液相色谱法测定本品中葛根素的含量，具有分离效果好、灵敏、准确的特点。1　仪器与药品1.1　实验仪器电子分析天平　(北京赛多利斯天平有限公司)　DL-720A型超声波振荡器　(上海之信仪器有限公司)　Waters高效液相色谱仪　(美国戴安公司)　Waters 2996 Photodiode Array Detector　(美国戴安公司)　Waters 717plus AutoSampler　(美国戴安公司)　Waters 600 Controller　(美国戴安公司)　C18色谱柱　(美国戴安公司)　SHB-95 循环水真空泵　(郑州杜甫仪器厂)　量筒、试管、烧杯、滤纸、布氏漏斗，真空泵，玻璃棒、容量瓶、胶头滴管、0.45μm微孔滤膜(尼龙/纤维)。1.2　实验试剂与药品葛根素对照品　(中国药品生物制品检定所)　感冒软胶囊　(上海罗福太康药业有限公司)　甲醇(色谱纯)，其他试剂均为分析纯，水为超纯水;感冒软胶囊：上海罗福太康药业有限公司(批号：091208)。2　实验部分2.1　感冒软胶囊中葛根素的含量测定2.1.1　色谱条件及系统适应性试验检测波长的选择取葛根素对照品溶液1.0 ml置10 ml的容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，在200-400 nm波长范围内测定葛根素的紫外吸收入光谱，结果显示在250 nm处有最大吸收。流动相的选择以甲醇和水为流动相摸索最佳配比。比较二种比例，即甲醇-水(25：75);甲醇-水-0.1%醋酸(30：70)的分离效果。结果甲醇-水-0.1%醋酸(30：70)的出峰时间在12min左右，较早，葛根素能与其他成分很好分开，较为合理，故选甲醇-水-0.1%醋酸(30：70)为流动相。其它色谱条件色谱柱：美国戴安公司C18柱(4.6mm×150mm,5μm);流速：1.0mL/min;　　柱温：30℃。2.1.2　对照品溶液的制备取葛根素对照品1.0 ml，加甲醇(色谱纯)溶解至10ml容量瓶中，超声，待溶解后定容，制成每1ml含葛根素0.1mg的标准溶液。2.1.3　供试液制备取感冒软胶囊10粒，倾出内容物，混匀。取约0.36g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理15min，取出，冷至室温，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，得供试品溶液。2.1.4　标准曲线制备将已经准备好的标准品用0.45μm微孔滤膜过滤。按上述色谱条件分别进样 2.0,4.0,6.0,8.0,10.0,12.0,14.0μl测定，以峰面积(A)为纵坐标(Y)，进样量(μl)为横坐标(X)绘制工作曲线，得回归方程为y = 192235x + 26939，r=0.9978，线性范围为0.2-1.4μg，葛根素在0.2-1.4μg范围内与峰面积呈良好线性关系。　图2-1　葛根素标准曲线2.1.5　实验方法学考察精密度试验精密吸取葛根素对照品溶液在上述色谱条件下连续进样5次，每次进样5μL，记录，考察葛根素色谱峰的相对保留时间及相对峰面积的一致性。结果葛根素色谱峰峰面积RSD为1.54%(n=5)，表明本实验精密度较好。稳定性试验精密吸取葛根素对照品溶液，于0,2,4,6,8,12h进样，进样量5μL，考察葛根素色谱峰的相对保留时间及相对峰面积在12h内的稳定性。结果葛根素色谱峰峰面积的RSD为1.37%(n=6)，表明对照品溶液在12h内基本稳定。加样回收率试验精密称取已知含量同批样品(批号：091208，葛根素含量4.9499mg/g)六份，每份0.18g，分别精密加入葛根素对照品溶液(0.214mg/g)5ml,70%甲醇20ml，测定葛根素含量，平均回收率为102.0%，RSD为1.82%(n=6)结果见下表：表2-1　回收率试验结果2.1.6　供试品中葛根素含量测定取上述供试品经0.45μm微孔滤膜过滤后，分别精密吸取对照品溶液与样品溶液各5μl，按上述色谱条件测定，记录积分面积，以标准曲线计算供试品中葛根素含量，测定结果见表2-3，高效液相图谱见图2-3。表2-3　葛根素的含量测定结果2.1.7　感冒软胶囊的制剂分析装量差异：取供试品10粒，分别称定重量，倾出内容物(不得损失一壳)，软胶囊囊壳用乙醚等易挥发性溶剂洗净，置通风处使溶剂挥尽，再分别精密称定囊壳重量，求出每粒内容物的装量，每粒装量与平均装量比较。2.2　实验结果2.2.1　葛根素标准图谱在色谱条件为色谱柱：美国戴安公司C18柱(4.6mm×200mm,5μm);流速：1.0mL/min;柱温：30℃;检测波长250nm。出峰时间在12.944min，葛根素标准图谱见图2-4。图2-4　葛根素的标准品的色谱图图2-5　葛根素的样品色谱图2.2.2　感冒软胶囊中葛根素的含量表2-6　感冒软胶囊中葛根素含量2.2.3　感冒软胶囊制剂分析结果表2-7　感冒软胶囊制剂分析结果3　结论采用高效液相色谱法测定感冒软胶囊中葛根素的含量，经对供试品及对照品制备方法、测定条件、线性关系考察、精密度试验、重复性试验、回收率测定、稳定性试验等方法学考察，确定了含量测定方法。该方法精密度、重现性好，分离度符合规定，方法稳定，经对样品检测数据的考察，确定该含量测定方法具有可应用性。