细菌内毒素对糖尿病足溃疡成纤维细胞凋亡的影响

最新流行病学调查显示，我国20岁以上的成年人糖尿病患病率为9.7%，成人糖尿病患者总数达9 240万[1] 。糖尿病足溃疡(Diabetic foot uclers，DFUs)累及约15%的糖尿病人群，足溃疡病史可使截肢率增加5～10倍。革兰阴性细菌是DFUs细菌感染的常见菌种，在繁殖过程中以及被杀灭后大量内毒素释放至创面表面。本研究拟从体外试验探讨细菌内毒素对糖尿病足溃疡成纤维细胞凋亡的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料：入选2型糖尿病DFUs截肢患者共计15例，男8例，女7例，平均年龄(55±8.5)岁，平均病程(10.2±6.2)年， DFUs病程(29±9)d，糖化血红蛋白(8.9±1.1)%。正常对照者15例，取自年龄、性别等相匹配的非糖尿病外伤及骨科截肢患者的手术切口。

1.2 研究方法：组织块法培养Fbs，经免疫组化抗波形蛋白和抗角蛋白染色证实为Fbs。DFUs组加入细菌内毒素(LPS)(0.000 μg/ml、0.050 μg/ml、0.100 μg/ml、0.200 μg/ml、0.500 μg/ml、 1.000 μg/ml、2.000 μg/ml)培养48 h。AnnexinV/PI双染法和流式细胞仪检测各组Fbs的凋亡率。

1.3 统计学处理：使用SPSS 13.0对各项资料进行统计、分析，各项参数以均数±标准差( s x ± )表示，采用t和χ2 检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Fbs培养结果：DFUs组Fbs细胞排列不规则，体积较大，胞质突起多而大，胞内出现颗粒和空泡，边界不清，形态不规则。正常对照组Fbs细胞排列紧密，胞质透明，突起短小，胞内颗粒少或未见，无空泡，胞膜清晰。 2.2 LPS对Fbs凋亡的影响：见表1，DFUs各组Fbs的凋亡率显著高于正常对照组(P<0.05)。LPS浓度≤0.500 μg/ml时Fbs的凋亡随浓度增加无明显增加，与DFUs对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);LPS浓度≥1.000 μg/ml时Fbs的凋亡随浓度增加显著增加，与DFUs对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。

3 讨论

本研究发现糖尿病足溃疡成纤维细胞形态异常，有研究表明，在高糖状态下，皮肤糖含量与炎性反应介质水平及糖基化终末产物(AGEs)的表达异常升高，高糖环境和AGEs蓄积导致真皮成纤维细胞的生长抑制和凋亡细胞百分率显著升高[2] 。以往研究已发现许多细菌感染能触发或抑制细胞凋亡，金黄色葡萄球菌可诱导T淋巴细胞和上皮细胞的凋亡[3] 。艰难梭菌产生A型和B型毒素，A型毒素可诱导T细胞凋亡，而B型毒素可诱导培养的肠细胞凋亡[4] 。本研究结果提示在临床工作中，减少糖尿病足溃疡局部内毒素浓度可能有促进伤口愈合的作用。但因为体内与体外的环境不同，临床应用疗效如何，还应更深入研究。

4 参考文献

[1] 中华医学会糖尿病学分会.中国2型糖尿病防治指南2010年版 [M].北京:北京大学医学出版社,2011:1.

[2] Singh R,Barden A,Mori T,et al.Advanced glycation end-products:a review[J].Diabetologia,2001,44(1):129.

[3] Wesson CA,Liou LE,Todd KM,et al.Staphylococcus aureus Agr and Sar global regulators influence internalization and induction of apoptosis[J].Infect Immun,1998,66(11):5238.

[4] Iorentini C,Fabbri A,Falzano L,et al.Clostridium difficile toxin B induces apoptosis in intestinal cultured cells[J].Infect Immun,1998,16(15):2660.

[收稿日期：2013-03-26 编校：苏建东]