应用特异性噬菌体抗体克隆和筛选新的大肠癌抗原基因
发表时间:2010-06-18 浏览次数:382次
大肠癌;cDNA文库;抗原;噬菌体人抗体;基因克隆
李艳雯,李官成
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知网,万方
目的 构建人大肠癌细胞cDNA表达文库,用抗人大肠癌噬菌体抗体CH209筛选新的大肠癌抗原基因。方法 抽提人大肠癌细胞HRT18的总RNA后分离mRNA,利用SMART(Switching Mechanism at 5th end of RNA Transcript)技术合成cDNA,与λTripIEx2载体连接包装成cDNA文库。测定原始文库的滴度和文库重组率,鉴定插入片段的大小,测定扩增文库库容量并鉴定CH209筛选的阳性克隆。结果 原始文库滴度为6.5×106pfu/mL,重组率为97%;插入片段的