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腺病毒包装


一、 实验原理 


二、应用简介

腺病毒(Adenovirus)是一种没有包膜的直径为70~90 nm的病毒颗粒,为线状双链DNA分子,约含35000 bp,两端各有长约100 bp的反向重复序列。

实验平台的腺病毒为5型血清型腺病毒,缺失了腺病毒的早期表达基因序列E1区和E3区。E1是腺病毒复制所必须的,E1的缺失使其不能自身复制,只能依靠包装细胞如HEK293细胞提供的反式互补进行复制扩增,以此保证腺病毒的安全性。E3基因表达的蛋白能对抗宿主的抗病毒防御系统,E3区的去除能减少宿主的体内免疫反应。

腺病毒包装采用的是最新的AdMax系统,通过Cre-loxp重组酶,使共转染到HEK293细胞中的腺病毒载体穿梭质粒和骨架质粒(腺病毒基因组质粒)在重组酶的作用下产生重组腺病毒,获得的病毒滴度更高,其病毒滴度可以达到1×10^12pfu/ml 。

腺病毒载体有CMV、mCMV、CAG、PGK、UbC、EF1a、等多种启动子可供选择;而且还有EGFP、ZsGreen、tdTomato、mCherry、EYFP等多种荧光标记蛋白可供选择。


三、实验方法


四、样本送检要求


五、案例展示

 

过表达腺病毒感染原代大鼠神经元细胞图片


六、常见问题


七、服务流程

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