RNAi抑制H157细胞Wnt5a表达
发表时间:2010-03-18 浏览次数:491次
Wnt5a H157 转染 表达
黄英
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知网,万方
目的 构建抑制大鼠Wnt5a基因表达的重组质粒,达到抑制H157细胞Wnt5a表达的目的。方法 根据大鼠Wnt5a的基因序列,设计合成含有发夹结构的2条寡核苷酸片段,经退火形成双链后克隆至PAVU6+27载体质粒中,对阳性重组子进行酶切和测序鉴定后转染正常H157细胞,并采用Western blot检测Wnt5a蛋白水平表达的变化。结果 重组质粒经双酶切后,有目的条带出现,提示Wnt5a干扰片断已克隆至PAVU6+27载体质粒中,DNA测序结果显示插入序列与预先设计完全一致。重组质粒转染H157细胞后经G