DNA疫苗的不同构象在体内外表达差异研究

发表时间：2014-08-05 浏览次数：1346次

引用：

赵晨燕1,2,,黄维金1,,刘强1,,王佑春1.DNA疫苗的不同构象在体内外表达差异研究.药物分析杂志.2013;33(8):1275-1279.

关键词：

拓扑形式构象超螺旋荧光素酶活体成像技术疫苗质量控制

作者：

赵晨燕1 2 黄维金1 刘强1 王佑春

作者单位：

1. 中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

出版年份：

2013

期刊页数：

收录者：

知网,万方

摘要：

目的:研究DNA疫苗构象对体内和体外表达的影响。方法: 分别构建绿色荧光蛋白表达质粒(pcDNA3.1-EGFP)和萤火虫荧光素酶表达质粒(pDRVISV1.0-Fluc),对其存在的3种拓扑形式(包括超螺旋、线性、闭环切刻等)和反复冻融状态对表达效率的影响进行分析,前者用脂质体介导转染293FT细胞,用流式细胞仪检测EGFP的表达情况;后者通过接种BALB/c小鼠,用活体成像技术监测荧光素酶的表达情况。结果: 对pcDNA3.1-EGFP质粒,流式细胞仪检测其转染293FT细胞48 h后显示,4种处理组的质粒表达EGFP的效率和荧光强度有所差异,依次为新鲜制备质粒(89.76%,2682.68)>反复冻融处理质粒(76.35%,2313.48)>闭环切刻质粒(68.45%,1245.95)>线性质粒(38.28%,929.5)。对pDRVISV1.0-Fluc质粒,采用小鼠活体成像技术持续观察接种后28 d的体内荧光素酶的荧光信号强度情况,结果显示:接种后0.2 d观察到荧光,之后强度持续开始增强,至第5 d达到平台期,维持至18 d。质粒各处理组的荧光强度组间有显著差异,依次为新鲜制备质粒(108.6)>反复冻融处理质粒(108.4)>线性质粒(108.3)>切刻质粒(108.0)。2种质粒不同构象的体内体外表达中,均是新鲜制备质粒的表达量最高,因其中超螺旋为其主要构象。结论: 质粒中超螺旋比例高时其转染效率及表达量最高,提高超螺旋比例是DNA疫苗质量控制的关键。

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