CD184在急性早幼粒细胞白血病中的表达及预后意义

　　【摘要】目的探讨急性早幼粒细胞白血病(M3)患者CD184表达水平与预后关系。方法应用流式细胞术(FCM)检测43例初治M3患者CD184表达情况，并分析CD184表达与CR率，高白细胞例数，融合基因，髓外浸润，复发的相关性。结果　M3患者CD184表达水平为(45±20)%;CD184阳性组患者CR率低，高白细胞例数，髓外浸润，复发率均较CD184阴性组增高，差异有统计学意义(P<0.05)。结论　CD184高表达与M3 CR率低，高白细胞，髓外浸润，复发等不良预后有关。

　　【关键词】 急性早幼粒细胞白血病;CD184

　　趋化因子受体CD184，即CXCR4，是特异性的G蛋白偶联受体，是基质细胞衍生因子SDF-1(stromal cell-derived factor-1)的唯一受体，两者具有高度亲和性[1]。SDF-1，即CXCL12，属小分子多肽，是主要由骨髓基质细胞产生的趋化因子，与CD184特异结合，在造血调控中起重要作用[2]。越来越多的研究证实，CD184的固有表达在造血干细胞的表面，也表达于各型原代白血病细胞与白血病细胞株，并在白血病增殖、髓内外迁移、浸润、黏附、抵抗化疗药物作用形成等方面起重要作用[3]。我们通过对43例急性早幼粒细胞白血病(M3)患者骨髓CD184的检测，探讨M3中CD184表达及其预后意义。

　　1　资料与方法

　　1.1　一般资料

　　43例M3均为2005至2009年我院收治的初诊患者。男23例，女20例;年龄14～67岁，中位年龄33岁。所有患者治疗前查血常规，骨髓CD184表达及PML/RARa融合基因;给予亚砷酸、全反式维甲酸双诱导治疗。同时，检测我院初治其它类型急性髓细胞白血病(除M3外)骨髓CD184表达水平。

　　1.2　方法

　　采集患者骨髓1 ml加入乙二胺四乙酸(ED-TA)抗凝管，充分混匀，取50 μl置入流式细胞仪试管1和2，分别加入20 μl鼠抗人IgG1-FITC/IgG2-PE/CD45-PerC、/CD34-FITC/CD184-PE/CD45-PerCP(试剂购自美国BD公司)，涡旋器充分混匀，闭光孵育20～40 min后加入红细胞裂解液2 ml，闭光孵育，离心，洗涤，过滤后，加入PBS缓冲液300 μl上流式细胞仪检测。

　　1.3　仪器

　　所用流式细胞仪FACS Calibur购自美国BD公司，数据获取采用Cell Quest 3.2，应用鼠抗人IgG1-FITC/IgG2-PE/CD45-PerCP为对照设置样本非特异荧光，即阴性对照，调节流式细胞仪条件使阴性对照管IgG1 FITC/IgG 2PE101以内细胞达95%以上，应用淋巴细胞群的anti-CD4-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP调节各荧光的补偿值，然后进行细胞的测定及分析。每例获取10 000个细胞，以SSC及CD45设门于幼稚细胞群，检测荧光阳性细胞比例。

　　1.4　统计学分析

　　计量资料以x-±s表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

　　2　结果

　　2.1　M3患者与其他类型急性髓细胞白血病中CD184的表达

　　43例M3患者骨髓CD184表达水平为(45±20)%，与其他类型急性髓细胞白血病(除M3外)患者CD184表达水平(52±22)%比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

　　2.2　M3、CD184表达与预后因素

　　43例M3患者中CD184阳性表达25例，阳性率58.1%。M3、CD184表达与CR、WBC>10×109/L和髓外浸润相关(P<0.05)。见表1。表1　M3、CD184表达与预后因素

　　3　讨论

　　3.1　CD184在急性早幼粒细胞白血病中的表达

　　正常生理情况下，人体细胞可表达一定量的CD184，而病理情况下，细胞表面的CD184水平可出现不同程度的上调，可能为血液肿瘤细胞某种程序表达改变，导致CD184持续表达[4,5]，研究证实，CD184表达于各种血细胞和各种类型白血病原代细胞及白血病细胞株[6]。我们研究发现，M3患者CD184表达水平为(45±20)%，而其他类型AML(除M3外)表达水平为(52±22)%，本结果与国内杨桂玲等研究结果一致[7]。

　　目前，CD184表达与AML分型的关系尚不确定，Mohle等[4]报道CD184高表达于AML中的M3、M5、M4，而低表达于M0、M1、M2，而Voermans等[8]认为与AML分型无关。我们发现，M3患者中CD184表达水平与其它类型AML比较，差异无统计学意义(P>0.05)，M3中的表达并不高于其他类型，但此结果是否与其他类型AML中各型病例数有关，尚需大宗病例进一步证实。

　　3.2　CD184与急性早幼粒细胞白血病预后

　　Rombouts等[9]研究发现，FLT3/IID AML中CD+34细胞CD184表达较FLT3/wtAML高，提示AML患者CD+34细胞的CD184高表达预后差;Konoplev等[10]多变量分析证实CD184的表达与未突变的FLT3基因AML患者预后不良有关;而Spoo等[11]分析认为，在AML细胞低CD184表达预后好，长期无复发和总体生存数高。以上均提示CD184高表达与急性髓细胞白血病不良预后有关。

　　我们通过研究急性髓细胞中一个特殊类型，M3患者CD184表达与其它预后指标关系发现，CD184阳性患者完全缓解率较阴性组低，高白细胞例数多，且发生肝、脾、淋巴结、中枢神经系统等髓外浸润病例数明显增多(P<0.05)，上述指标为M3的重要预后因素，故CD184阳性表达提示预后不良。其原因可能为：有学者对急慢性白血病的肿瘤动力学研究表明，由于基质细胞表达的SDF-1，可以促使高表达CD184的白血病细胞迅速向其移动，以躲避各种化疗药物对其杀伤作用[12,13]。这表明CD184及其配体可以对白血病细胞耐药的生物学特性的形成具有一定的作用。魏立等[12]通过观察抗CD184对HL60细胞黏附与Bcl-2.Fas蛋白表达的影响发现，此抗体显着降低HL-60细胞的黏附，并下调Bcl-2的表达，上调Fas表达，支持CD184可抑制细胞凋亡。

　　此外，CD184阳性组14例完全缓解后复发3例，而CD184阴性组16例无复发，提示CD184可能与M3复发相关，但因病例数所限，未做统计学处理。

　　同时，我们也比较了CD184阳性表达与阴性表达组的PML/RARα融合基因阳性率，结果显示2组患者该融合基因阳性率无明显差异，提示CD184表达及其对预后影响与PML/RARα融合基因无关。

　　综上所述，我们认为CD184高表达与M3完全缓解率低，高白细胞，髓外浸润率增加，复发率高等不良预后有关，提示预后不良。但CD184是否为M3独立预后因子，尚需大宗病例进一步证实。

　　【参考文献】

　　1　Kijowski J，Baj-Krzyworzeka M，Majka M，et al.The SDF-1-CX-CR4 axis stimulates VEGF secretionand activates integrins but does not affect proliferation ang survival in lymphohemato-poietic cells.Saem Cell,2001,19：453-466.

　　2　Nagasawa T，Hirota S，Tachibana K，et al.Detects of B-cell lymphopoiesis and bone-marrow myelopoiesis in mice lacking the CXC chemokine PBSF/SDF-1 Nature,1996,382：635-638.

　　3　Mohle R，Schittenhelm M，Failenchmid C，et al.Functional re sponse of leukaemic blasts to stromal cell-derived factor-1 correlates with preferential expression of the chemokine receptor CXCR4 in acute myelomonocytic and lymphoblastic leudaemia.Br J Haematol,2000,110：563-572.

　　4　Durig J，Schmucker U，Duhrsen U.Differential expression of chemokine receptors in B cell malignancies.Leukemia,2001,15：752-756.

　　5　Ishibe N，Albitar M，Jilani IB，et al.CXCR4 expression is associated with survival in familial chronic lymphocytic leukemia，but CD38 expression is not.Blood,2002,100：1100-1101.

　　6　Tavor S，Pelit I，Porozov S，et al.CXCR4 regulates migration and development of human myelogenous leukemia stem cells in transplanted NOD/SCID mice.Cancer Res,2004,64：2817-2824.

　　7　杨桂玲，金北平，杨碧云，等.CXC亚家族趋化因子受体-4在急性白血病中的表达及临床意义.中国综合临床，2007,23：610-612.

　　8　李晟，陈子兴，王玮，等.CXCR4 在急性白血病细胞中的表达及其对髓外浸润的意义.中华血液学杂志，2004,25：405-408.

　　9　Rombouts EJ，Pavic B，Lowenberg B，et al.Relation between CXCR4 expression，Flt3 mutations，and unfavorable prognosis of adult acute myeloid leukemia.Blood,2004,104：550-557.

　　10　Konoplev S，Rassidakis GZ，Estey E，et al.Overexpression of CXCR4 predicts adverse overall and event-free survival in patients with ummutated FLT3 acute myeloid leukemia with normal karyotype.Cancer,2007,109：1152-1156.

　　11　Spoo AC，Lubbert M，Wierda WG，et al.CXCR4 is a prognostic marker in acute myelogenous leukemia.Blood,2007,109：786-789.

　　12　魏立，孔佩艳，陈幸华，等.抗CXCR4单克隆抗体对HL-60细胞黏附性及BCL-2，Fas 蛋白表达的影响.中华实验血液学杂志，2004,2：436-468.

　　13　Dunussi-Joannopoulos K，Zuberek K，Runyon K，et al.Efficacious immunomodulatory activity of the chemokine stromal cellderived factor 1(SDF-1)：local secretion of SDF-1 at the tumorsite serves as T-cell chemoattractnt and mediates T-cell-dependent antitumor responses.Blood,2002,100：1551-1558.