Bel亚型鉴定及家系调查

　　作者：别立莉　　作者单位：河南省血液中心，郑州 450012

　　【摘要】为了研究Bel亚型的血清学特征和遗传背景，采用红细胞凝集试验检测先证者及其家庭成员红细胞上的A、B、H抗原和血清中的抗A抗体、抗B抗体，用凝集抑制试验检测唾液中的A、B、H血型物质。结果表明：先证者与其母、女儿3人确定为Bel亚型;先证者的2个妹妹确定为ABel亚型;先证者的父亲、儿子和配偶分别为A、B和B型。结论：我国人群中Bel亚型是家族遗传。

　　【关键词】 ABO血型,弱B抗原,Bel亚型 家系调查

　　Abstract In order to study the serological characteristics and genetic background of Bel subtypes, A, B and H antigens on the surface of red blood cells of the proband as well as his family and the antiA, antiB antibodies in their serum samples were detected by hemagglutination test; the A，B，H substances in saliva were determined by inhibitory agglutination test. The results indicatad that the proband, his mother and his daughter all were identified to be Bel phenotype; his two sisters were identified to be ABel phenotype; his father, son and spouse were identified to be A, B and B phenotype respectively. It is concluded that the Bel subtype exists as family genetic characteristics in China.

　　Key words ABO system; weak B antigen;Bel subtype; domestic investigation

　　J Exp Hematol 2007; 15(1):188-190

　　B亚型较A亚型少见。凡红细胞上显示较弱的B特异性者，统称B亚型(或弱B)。B亚型的分类，基本上与A亚型平行[1]。国外报道有B3、Bx、Bm及Bel[4]，国内也有Bint、B3、Bx、Bm及B2亚型的报道，但国内很少有Bel的报道，我们最近在无偿献血者中发现1例B亚型的血清学实验结果符合Bel的特性，并对其进行了家系调查，现报道如下。

　　材料和方法

　　检测对象

　　先证者 无偿献血者，男，36岁，汉族，身体健康。ABO血型鉴定：正定为O型，反定为B型，正反定型不符。

　　家庭成员 先证者的父母、同胞妹妹1、同胞妹妹2、配偶、1个儿子和1个女儿。

　　试剂

　　抗A、抗B、抗AB、抗A1单克隆抗体(单克隆抗体试剂，为美国Dominion公司产品);抗H抗体(植物凝集素为美国Dominion公司产品);人源抗B血清由本实验室自制，效价为1∶128;试剂红细胞Ac、Bc、Oc购自上海血液中心。

　　试管法正反定型

　　正定型 取试管6支，分别加抗A、抗A1、抗B、人源抗B、抗AB、抗H抗体各100 μl，每管加被检者经生理盐水洗涤3次制备的5%红细胞悬液50 μl，混匀离心后观察结果。

　　反定型 取3支试管，各加100μl被检者血清，再分别加入50 μl Ac、Bc、Oc试剂，红细胞混匀离心，观察结果。

　　吸收放散试验[2]

　　第一步采集被检者静脉全血8 ml(EDTA抗凝)生理盐水洗涤5次，离心后弃去上清，取压积红细胞3-4 ml;第二步抗B单克隆抗体和人源抗B血清做平行试验;第三步将等体积抗B单克隆抗体加入压积红细胞中混合，4℃孵育1小时，每隔15分钟混匀1次;第四步用4℃生理盐水洗涤孵育后的压积红细胞6次,保留末次洗涤液, 再加入压积红细胞1/2体积的生理盐水;第五步56℃水浴10分钟，每分钟轻轻震荡1次，立即离心获得上清即为放散液;第六步用试剂红细胞检测放散液有无放散出来的抗B抗体, 同时用末次洗涤液进行平行实验作为阴性对照。

　　唾液血型物质的检查

　　Bel亚型鉴定及家系调查血型物质准备 取被检者唾液1-2 ml，沸水煮10分钟，离心后取上清。

　　最适稀释度标准血清的制备 抗A、抗B单克隆抗体试剂用生理盐水稀释至其效价为1∶16，抗H抗体不用稀释。

　　中和 分别将100 μl血型物质与制备后的试剂100 μl等体积混合，室温放置10分钟。

　　检测 用Ac检测中和后的抗A抗体，Bc检测中和后的抗B抗体，Oc检测中和后的抗H抗体。

　　结果判断 与Ac、Bc、Oc凝集表示唾液中没有A、B、H物质，不凝集或凝集减弱表示唾液中有A、B、H物质。

　　结 果

　　先证者及其家庭成员血清学检查结果

　　先证者一家血型及唾液血型物质检测结果见附表。根据血清学结果(符合放散型B亚型的血清学特征)，判定先证者为Bel亚型，其母和其女血型也为Bel亚型，其2个妹妹血型均为ABel亚型，妹妹2血清中有抗B抗体，其父亲、配偶和儿子分别为正常A、B和B型。

　　家系调查的结果分析

　　母亲表型为Bel，其子女均带有Bel抗原,推测母亲基因型很可能为Bel/Bel或Bel基因,具有遗传优势;其子女的Bel基因均继承自母亲，2姐妹基因型只能为A/Bel，先证者基因型只能为O/Bel，根据子女血型推测父亲基因型为O/A;先证者女儿为O/Bel，妹妹2 ABel型血清中有意外抗B抗体，而其它Bel型血清中均无抗B抗体。家族内Bel抗原特征血清学基本一致，Bel抗原强弱及吸收放散能力没有明显差异。

　　讨 论

　　在血型血清学实验中，ABO亚型是导致正反定型不一致的主要原因之一。目前B亚型尚没有特异性的诊断血清来鉴定，区别B亚型的标准有：①红细胞与抗B、抗AB及抗H抗体的凝集反应强弱程度唾液中有无B物质和H物质的存在[1]。

　　B亚型在国内并不太少见，较常见的是B2、B3、Bm，但Bel很少见有报道。B3、Bx对抗B抗体、抗AB抗体可出现弱凝集反应，根据凝集反应和吸收放散能力的强弱可区分B3、Bx。而Bm、Bel的红细胞对抗B抗体、抗AB抗体均不发生凝集反应[3]，弱B抗原的存在只能通过对抗B抗体的吸收和放散实验来证实[4]。有文献报告，少数Bel个体血清中有不规则的抗B抗体存在[5]。区别Bm与Bel的依据是唾液中是否存在B血型物质，分泌型Bm的唾液中有B和H物质，而Bel只有很强的H物质，没有B物质。

　　此次家系调查中有5例通过吸收放散试验检测到B抗原，Bel与ABel个体的放散能力没有明显差异，B抗原血清学特征在遗传过程中没有发生明显变化，遗传性状稳定，均为B抗原弱表达;唾液中没有B物质只有H物质或A物质，符合Bel亚型的血清学特性。其中4例血清中没有不规则的抗B抗体，只有妹妹2有不规则的抗B抗体存在。Lin等[6]报告了台湾7例Bel的血清学特征，Bel、ABel血清中均存在意外抗B抗体。本报告中仅1例ABel血清中有抗B抗体，显示中国大陆人群中Bel血型的血清学特征与台湾地区有差异。

　　分子生物学检测手段是鉴定B亚型更可靠的方法。Sun等[6]利用PCR技术对6位台湾非亲缘个体的ABO基因6-7外显子进行扩增，发现Bel亚型的第7外显子502位置上C>T发生突变，而对照组正常B型不发生突变。

　　【参考文献】

　　1SchenkelBrunner H. Human blood groups. SpingerVerlag Wien New York,1995: 112-114

　　2李勇，杨贵贞主编.人类红细胞血型实用理论与实验技术. 北京：中国科学技术出版社，1990: 267-268

　　3Wallace ME,Gibbs FL. Blood group systems:ABH and Lewis.Bethesda:American Association of Blood Bank.1986：274-275

　　4Heier HE, Kornstad L. Expreession of B and H antigens on erthrocytes of a week B individual. Immun Hematol, 1992; 8: 94-99

　　5Lin PH,Li L, Lin Tsai SJ. A uniqiue 502C>T mutation in exon 7 of ABO gene associated with the Bel phenotype in Taiwan. Transfusion, 2003; 43:1254-1259

　　6Sun CF, Chen DP, Lin KT, et al. Molecular genetic analysis of the Bel phenotype. Vox Sang, 2003; 85: 213-220