健康人25例外周静脉血CD34+细胞的测定及意义

　　作者：张德杰,向阳,黄世林　　作者单位：116021 辽宁大连，解放军第210医院中医血液科

　　【摘要】 目的 检测正常健康志愿者外周血CD34+、CD34+ CD38-细胞的绝对值及相对值，阐述其检测意义。方法 用流式细胞仪进行测定。结果 健康志愿者外周血CD34+细胞绝对值(1.06±0.51)×107/L ，CD34+细胞占白细胞总数的(0.16±0.05)%;CD34+CD38-细胞绝对值(0.46±0.31)×107/L，CD34+CD38-细胞占白细胞总数的(0.07±0.04)%。结论 外周血CD34+细胞、CD34+ CD38-细胞测定，会为临床多种血液病的诊断及预后判断提供很重要的参考价值。

　　【关键词】 流式细胞仪,造血干细胞

　　【Abstract】 Objective To test the expression of CD34+、CD34+and CD38- cells in peripheral blood of healthy volunteers, and to discuss the clinical significance. Methods The expression was assayed by flow cytometry.Results The absolute value of CD34+ cells was(1.06±0.51)×107/L， occupied(0.16±0.05)% of white blood cell;That of CD34+CD38- cells was(0.46±0.31)×107/ L occupied(0.07±0.04)% of white blood cell.Conclusion The determination of CD34+ and CD34+ CD38- cells in peripheral blood will provide important reference value for the diagnosis and prognosis of many kinds of hematology diseases.

　　【Key words】 flow cytometry ; hematopoietic stem cell

　　CD34抗原主要在造血干细胞表面呈高度表达，其表达强弱具有明显阶段性，在干细胞和最早祖细胞阶段表达最强。我们抽取了25例健康志愿者的外周血，对其CD34阳性细胞的百分比及绝对值进行了检测。对其检测意义进行了分析。

　　1 对象与方法

　　1.1 研究对象 25例18～24岁健康志愿者，均为男性。

　　1.2 主要试剂 PE标记的IgG1和CD34，FITC标记的IgG1和CD38单克隆抗体，溶血素A、B、C液均购自Immunotech公司。

　　1.3 标本采集及处理 取健康志愿者静脉血1ml，置于EDTA抗凝管中混匀。

　　1.4 CD34+细胞及CD34+CD38-细胞的测定 分别取100μl静脉血加入两个试管中(其中一管为试验管，另一管为对照管)。在对照管中分别加入20μl IgG1-PE和20μl IgG1-FITC，在试验管中分别加入20μl CD34-PE和20μl CD38-FITC，轻轻混匀，室温、避光放置20min。用A、B、C液溶血素溶血后，上流式细胞仪进行测定分析。

　　CD34+细胞及CD34+CD38-细胞绝对值的测定，采用双平台法。

　　1.5 统计学处理 数据采用SPSS10.0软件分析，所得数据以(x±s)表示。

　　2 结果

　　检测结果

　　3 讨论

　　目前普遍认为，用FCM和单克隆抗体技术直接检测CD34+细胞是一种简单、准确、快捷的检测造血干细胞(HSC)的方法，可用于临床进行常规检查[1]。有学者认为CD34+CD38-更接近于造血干祖细胞。外周静脉血检测CD34阳性细胞，其特点为取材方便，细胞成分单一，测定误差较小，本实验通过对25例男性健康志愿者外周血进行CD34阳性细胞的检测，得到一组正常参考值。外周血CD34+细胞检测除用于干细胞移植时，对造血干细胞进行计数外，临床上如果能对患者外周血CD34+细胞、CD34+ CD38-细胞进行准确测定，或用CD34结合其他单克隆抗体对血液细胞进行测定，这会为临床多种血液病的诊断及预后判断提供很重要的参考价值。比如再生障碍性贫血、慢性粒细胞白血病、骨髓增生异常综合征等等。

　　再生障碍性贫血(AA)是一类T淋巴细胞功能亢进引起的造血功能衰竭性自身免疫性疾病。 石淑文[2]等曾检测了34例初治AA患儿骨髓CD34+细胞百分率，发现其明显低于对照组，且CD34+CD38+细胞和CD34+CD38-细胞同时相应减少，AA患者HSC损伤是全面的，无阶段性差异，SAA患者比CAA患者骨髓CD34+细胞减少更加明显。

　　慢性粒细胞白血病(CML)是一种克隆性造血干细胞的恶性增殖性疾病，在CML患者体内存在具有CD34抗原标志伴bcr/abl融合基因阳性的干细胞。有证据表明，bcr/abl+-CD34+细胞是导致CML耐药及复发的重要原因之一。对CML患者进行CD34+细胞的检测为疾病的发展和预后可提供参考[3]。

　　骨髓增生异常综合征(MDS)是一组以髓系(粒系、红系、巨核系)细胞发育异常而致骨髓衰竭为特征的髓系肿瘤，表现为粒系、红系、巨核系一系或多系形态学异常和外周血细胞减少。MDS的诊断，特别是对那些原始细胞比例增高不明显且无克隆性染色体核型异常的患者，基本上是靠排除性诊断[4]。Kiyoyuki Ogata等[5]对这些原始细胞比例增高不明显且无克隆性染色体核型异常的MDS患者进行了CD34的检测，发现其表达异常，其对MDS的诊断具有十分重要的诊断价值。

　　近年来，有较多的学者利用流式细胞术(FCM)检测急性髓系白血病(AML)的微小残留病变(MRD)。其原理主要以初治时白血病细胞所表达的白血病相关免疫表型(LAIP)为依据。由于AML免疫表型的多样性和复杂性，给MRD的检测带来一定的困难。同时，目前的观点认为白血病细胞来源于白血病干细胞(LSC)，白血病细胞群体也是一个异质性的群体。大家普遍认为LSC存在于CD34+CD38-Lin-细胞亚群中。因此，对白血病患者骨髓或外周血进行CD34、CD38结合初治时白血病细胞的免疫表型分析进行MRD的检测也已成为学者们探讨的课题[6]。

　　【参考文献】

　　1 尉达民，赵昕，祝阳，等.CD34阳性细胞测定在造血干细胞测定中的应用.北京医科大学学报，1995，27：204-206.

　　2 石淑文，宋华，汤永民，等.34例小儿再生障碍性贫血骨髓CD34+细胞的检测.中华血液学杂志，2002，23：267-268.

　　3 李澄宇，孟凡义，孙启鑫，等.G-CSF对慢性粒细胞白血病患者bcr/abl+-CD34+细胞增殖、分化的影响. 中华血液学杂志，2007，11：762-765.

　　4 肖志坚，郝玉书.规范我国骨髓增生异常综合征的实验室检查和诊断. 中华血液学杂志，2008，1：1-2.

　　5 Ogata K, Kishikawa Y, Satoh C,et al.Diagnostic application of flow cytometric characteristics of CD34+ cells in low-grade myelodysplastic syndromes. Blood,2006, 108:1037-1044.

　　6 曹晖，王亚哲，吴红红，等.CD7和(或)CD56阳性急性髓系白血病患者干细胞表型分析及在微量残留病检测中的意义. 中华血液学杂志，2008，1：23-28.