汇集冰冻血小板的质量探讨
发表时间：2011-08-26 浏览次数：427次
作者：张义兵,沈莉,王慧茹,李建民,李晓玉 作者单位：050071 石家庄市， 河北省血液中心
【关键词】 冰冻血小板;质量
为节约血液资源和保证安全输血的目的，我们借鉴国外先进经验和技术，采用单一血浆悬浮白膜来制备汇集血小板，并在24 h内向汇集后血小板中加入二甲基亚砜(DSMO)来制备冰冻血小板，现就制备的汇集冰冻血小板12例的质量情况报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料 400 ml采血四联袋(山东威高医疗用品有限公司)，KR4i 型离心机(法国制造)、r=25 cm，TSCD 201A无菌导管连接器(日本制造)，Beckman counter AC.T5.diff2血细胞计数仪(美国制造)，PF型白细胞过滤器(南京双威生物制品有限公司)，Nagotte Chember白细胞计数板，DSMO(美国Cleveland)。CFCFREE 型低温冰箱(日本三洋制造)。
1.2 方法 (1)白膜的提取方法：将四联袋采集的新鲜400 ml全血以2 918 g，14 min，22℃为离心条件进行离心，离心毕取出置于血浆挤压器中，将上层血浆全部分入第一个转移袋中并用止血钳夹好;将白膜及相邻的红细胞约25～35 g挤入第二个转移袋中并用止血钳夹;好将红细胞保存添加剂加入母袋中并用止血钳夹好;分别热合后余下白膜袋备用。 (2)白膜的汇集及悬浮方法：将检验合格后同血型备用白膜6份通过无菌导管连接汇集于容量为450～500 ml的三联袋(含血小板型过滤器、转移袋及其附件)中，取单一血浆(检验合格且与白膜血型相同)亦通过无菌连接加入汇集有白膜的袋子中，轻轻混匀后在室温下静置2 h。(3)浓缩血小板的分离及过滤方法：将静置后含有混悬液的二联袋再次混匀后以260 g，10 min，22℃为离心条件进行离心，离心毕取出置于血浆挤压器中，将上层血浆(除留样外)经过滤器全部压入另一个转移袋中并用止血钳夹好，热合下含有血小板的袋子，此即为制备的浓缩血小板制剂。(4)血小板计数及红细胞混入量的检测方法：将制备的浓缩血小板混匀后取样，按Beckman counter血细胞计数仪说明书提供的方法进行检测。(5)白细胞污染量的检测方法：未经过滤血小板的白细胞污染量用Beckman counter血细胞计数仪进行检测，过滤后血小板中的白细胞污染量按文献[2]的方法进行检测。(6)汇集冰冻血小板的制备方法及融化方法：向制备后的汇集血小板中边摇动边加入DSMO(浓度控制在1%以内)直至加毕并封口，置速冻冰箱内冰冻保存。(7)融化方法：将冰冻保存的血小板置42℃水浴箱中边摇动边融化直至完全融化后取出并进行留样检测。
1.3 统计学分析 计量资料以±s表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，P<0.05为差异有经计学意义。
2 结果
把用美国血液技术公司(MCS+)采集的血小板30例作为对照组(机采法)，冰冻前制备的浓缩血小板(汇集法)12例与机采法30例比较，见表1;冰融后本实验及单采法制备的冰冻血小板质量比较，见表2。表1 冰冻前浓缩血小板质量及与对照组比较 注：与机采法比较，P<0.05，#P<0.01表2 冰融后2种方法制备的冰冻血小板质量比较注：与机采法比较，P<0.01
3 讨论
本实验中，2种方法制备的血小板均可达到单采血小板国家质量标准，其中白细胞污染量上本实验方法明显优于机采法(P<0.01)，这主要是由于汇集法对血小板进行过滤所致，且血小板中白细胞残留量可达到用于预防CMV感染或HLA同种免疫的要求。从表2可见，2种方法制备的冰冻血小板，经冻融后均可导致不同程度的血小板损失，但血小板损失量不影响治疗量(2.3×1011)的要求。尽管本实验方法制备的冰冻血小板无纤维蛋白原析出，但笔者认为，这可能与目前制备的数量较少有一定的关系，且不排除出现析出的可能。与液体保存的血小板相比，冰冻后血小板恢复率和功能均降低，这也是临床使用冰冻血小板范围受限的重要原因。在目前情况下，供血机构要保证全天候满足临床对液体血小板的需求确实存在诸多困难，临床使用冰冻血小板大都出于应急输注，而供血机构向临床提供冰冻血小板(满足应急输注)则出于无奈。可见，仅就应急输注血小板而言，冰冻血小板仍有其存在的必然性，本实验不失为一种可行的方法。且如何进一步提高和保证汇集冰冻血小板的质量，值得进一步研究。
