黄芪注射液对糖尿病肾病患者血小板活化功能的影响

　　作者：冉志成 作者单位：宁夏师范学院医疗系内科学教研室，宁夏 固原 756000

　　【摘要】目的：探讨糖尿病肾病(DN)患者血小板活化功能的变化及黄芪对其的影响。方法：23例肾病综合征患者随机分为两组，A组12例进行常规治疗;B组11例在常规治疗基础上给予黄芪注射液40 g(20 mL)/d静脉滴注，疗程为15 d。治疗前、后应用流式细胞仪测定外周血血小板CD62P及血小板膜Fg含量，并以10例健康人作对照。结果：糖尿病肾病患者血小板CD62P及血小板膜Fg含量均显著高于健康人(P<0.01);治疗后显著低于治疗前(P<0.01)，治疗后B组低于A组(P<0.01)。结论：糖尿病肾病患者血小板活化程度在其发病中起一定作用，黄芪注射液能有效降低糖尿病肾病患者血小板活化功能。

　　【关键词】 糖尿病肾病 血小板 纤维蛋白原 中草药

　　Effect of astragalus on platelet activation of diabetic nephropathy

　　RAN Zhicheng

　　Department of Internal Medicine, Faculty of Medicine, Ningxia Normal College Guyuan 756000, China

　　[ABSTRACT] Objective: To study the change of platelet activation of diabetic nephropathy(DN) and the effect of astragalus injection on it. Methods: Twentythree patients with nephropathy syndrome were randomly divided into two groups; patients in group A(n=12) was treated by conventional therapy; patients in group B(n=ll) was treated by conventional therapy and astragalus injection. The astragalus injection used for patients in group B was 40g (20 mL) daily, infused intravenously for 15 days. The therapeutic course in both groups were 15days. CD62P of platelet and Fg of platelet membrane in peripheral blood were examined using flow cytometric analysis before and after treatment respectively, which was compared with 10 healthy subjects as control. Results: CD62P and Fg in paitents with DN were higher significantly than those in control group(P<0.01); CD62P and Fg decreased markedly after treatment ,compared with before treatment, there was significant difference (P<0.01); CD62P and Fg in group B were significantly lower than those in group A after treatment(P<0.01). Conclusion: These results suggest that the level of activated platelet activation may be involved in the pathogenesis of DN and astragalus can decrease platelet activation of patients with DN effectivly.

　　[KEY WORDS] Diabetic nephropathy; Platelet; Fibrinogen; Chinese herbal medicine

　　糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)是10年以上糖尿病患者的首位死亡原因[1]。研究表明，其主要死因是心、脑血管动脉粥样硬化所致[1]。高凝状态又是加速硬化的主要根源[2]。而研究血小板功能变化及药物对其影响的报道还较少。作者检测了23例DN患者外周血血小板活化特异性标志物血小板CD62P和血小板膜Fg表达水平，并观察黄芪注射液治疗对其的影响，探讨它们在DN发病中的作用和意义。

　　1 资料和方法

　　1.1 病例选择

　　按WHO DN诊断标准[3]确诊的DN患者23例，男性16例，女性7例，年龄27～72岁，平均年龄56岁;对照组10例，均为健康体检者，无肾脏病史，年龄28～70岁，平均55岁。

　　1.2 临床资料

　　23例均为成人，将患者随机分为A、B两组，A组12例，给予胰岛素、糖适平、贝那普利、双密达莫等常规治疗，B组在常规治疗基础上，给予黄芪注射液(杭州亚大青春宝药业有限公司公产)静脉滴注，每天1次，每次40 mg(20 mL)，疗程均为15 d，治疗前、后抽肘静脉血检测CD62P和Fg。

　　测定方法： 抽空腹肘静脉血4 mL，EDTA抗凝，600～800 r/min离心5 min，分别取上清液100 μL加入4只试管，再分别加入鼠抗人CD62PFITC、阴性对照羊抗鼠IgGFITC、鼠抗人Fg(一抗)及阴性对照羊抗鼠IgGFITC。室温避光反应30 min，然后2 000 r/min离心5 min，去除上清液后再加入1 mL PBS，漂洗、离心2次，前2管各加入500 μL PBS用以检测CD62P含量，后2管各加入20 μL羊抗鼠IgGFITC(二抗)，室温避光反应30 min，同法离心，去除上清液，漂洗等过程，最后加入500 μL PBS用以检测Fg含量(试剂购自法国国际免疫公司)。用美国生产的FACScan型流式细胞仪进行检测，测完后在联想电脑上用Cell Qutest plot 软件分析数据。由HP1200c/ps打印结果。CD62P和Fg含量以及其阳性血小板用百分率表示，计算方法如下：

　　CD62P(或Fg)={CD62P(或Fg)阳性血小板数/[CD62P(或Fg)阳性血小板数+CD62P(或Fg)阴性血小板数]}×100%-非特异性结合血小板数(%)[4]。

　　1.3 统计学分析

　　数据以(±s)表示，采用t检验。

　　2 结果

　　各组外周血血小板CD62P及血小板膜Fg含量见表1。表1 糖尿病肾病组患者血小板CD62P及血小板膜Fg含量(%)(略) 注:与对照组比较*P<0.01;与治疗前比较△P<0.01;与A组比较**P<0.01。

　　3 讨论

　　糖尿病肾病(DN)时，血液呈高凝状态，血液的凝固性增高有利于血栓的形成[2，5]。高凝状态时血小板功能亢进，体内抗凝系统功能失调，血小板聚集功能增强。

　　血小板P选择素，又称血小板CD62P，是目前具有特征的血小板活化的分子标志物[6]。P选择素具有介导活化血小板或内皮细胞与中性粒细胞及单核细胞黏附的功能，可使血小板与中性粒细胞黏附、聚集，形成血栓，故血小板活化在启动及扩大血栓形成中具有重要意义[7]。血小板活化时，血小板内及隐蔽状态的GPⅡ、Ⅲa复合物在膜表面得以暴露，其周围微环境或其构型发生改变，产生受体活性，能与多种黏附蛋白结合，其中由于血小板膜Fg具有对称重复结构，可作为2个血小板之间的“桥梁”，所以，活化血小板与纤维蛋白原的结合为血小板聚集的重要基础[8]。我们研究发现，DN患者外周血血小板CD62P及血小板膜Fg含量显著高于正常人(P<0.01)，说明DN患者血小板活化程度增强，血小板聚集增强。可能在血栓形成和肾性高血压中发挥重要作用，是DN发病机制的重要组成部分。低蛋白血症是导致血小板功能异常的重要原因之一，低蛋白血症，高度浮肿，肾缺血、缺氧，感染等因素，使血管内皮细胞受损，内源性ADP释放增多，则血小板易活化，聚集性增强。内毒素等可激活凝血酶及单核吞噬细胞释放血小板活化因子，可加重血小板活化。我们经过常规治疗，患者病情缓解或减轻，血小板CD62P、血小板膜Fg显著降低，与病情变化一致。

　　黄芪注射液为传统中药黄芪的提取物的灭菌水溶液。其主要成分为黄芪(每10 mL相当于原药材20 g)，内含有微量元素、黄酮、黄芪皂甙、多糖等。黄芪有益气养元、扶正祛邪、养心通脉、健脾利湿之功效。主要用于心气虚损、血脉瘀阻之病毒性心肌炎、心功能不全，可扩张外周血管、冠状血管、脑血管及改善微循环，有一定的降压作用，也可促进红、白细胞生成、发育和成熟，有一定抗病毒作用及调节免疫功能，可增强巨嗜细胞吞噬功能等。目前对黄芪的研究已涉及很多方面，但对血小板活化功能的研究，文献尚未有系统报道。我们通过研究发现，应用黄芪注射液治疗后，患者外周血血小板CD62P及血小板膜Fg含量显著低于治疗前(P<0.01)，也显著低于常规治疗组(P<0.01)。说明黄芪能有效地降低血小板活化程度，抑制血小板P选择素的合成，抑制血小板内5羟色胺的合成和释放[9]。降低血小板的聚集性，从而减少血栓形成，改善血液高凝状态，达到抗凝、减少尿蛋白的排出。DN患者长期应用黄芪注射液治疗，对于预防及减少血栓、缓解病情具有较好的效果，值得临床应用。

　　【参考文献】

　　1 王吉耀.内科学[M].第2版(上册).北京:人民卫生出版社,2006.979981.

　　2 刘泽霖，贺石林，李家增.血栓性疾病的诊断与治疗[M].北京:人民卫生出版社,2000.248251.

　　3 叶任高.内科学[M].第5版.北京：人民卫生出版社，2001.80713.

　　4 尹格平.老年癌症患者手术前后血小板状态检测的临床意义[J].中国肿瘤临床与康复,1998,5(1):26.

　　5 Bauer KA, Rosenberg RD. The pathophysiology of the prethombolic state in humen insishts gained from studies using markers of hemestalic system activiation[J]. Blood,1987,70(2):343.

　　6 戴云,李进.血小板颗粒膜蛋白[J].国外医学(输血与血液学分册),1992,15(4):199.

　　7 宋玉强.颗粒膜蛋白与脑缺血[J].国外医学(脑血管疾病分册)，1997,5(2):78.

　　8 吴新国.血小板活化过程中膜蛋白的变化[J].国外医学(输血与血液学分册),1991,14(1):20.

　　9 樊瑞芬.黄芪改善肾病综合征患者血液高凝状态的观察[J].中国中西医结合肾病杂志,2001,2(11):673.