全自动血培养系统对血液和体液标本中细菌的检测分析

　　作者：崔峰 任炜 李采青 刘金禄 作者单位：1.河北北方学院附属第一医院，河北 张家口 075000;2.张家口教育学院，河北 张家口 075000

　　【摘要】 目的：了解全自动血培养系统临床应用及影响检测因素。方法：应用BACTEC9120系统检测343份体液标本，分析阳性率、假阳性、假阴性和阳性出现时间及影响阳性的因素。结果：343份体液标本分离到56株细菌，阳性率为16.33%，阳性最早出现时间为2.33h，12 h内检出率为25.00%(14株)，24h内检出率为67.86%(38株)，36h内检出率为87.5%(49株)。假阳性2例，假阳性率为0.58%，假阴性1例，假阴性率0.29%。结论：全自动血培养系统的临床应用提高了细菌的检出率，缩短了检测时间，为败血症及严重感染的诊断和治疗提供了快速准确的报告，临床一定要按要求留取标本，以免出现假阳性、假阴性。

　　【关键词】 血液;体液;细菌;BACTEC9120系统

　　Analysis on Bacteria by Bactec 9120 Blood Culture System

　　CUI Feng1,REN Wei2,LI Caiqing1,et al

　　1.Department of Clinical Microbiology,The First Affiliated Hospital,Hebei North University,

　　Zhangjiakou,075000,Hebei,China;2.Zhangjiakou Education College,Zhangjiakou,075000,Hebei,China

　　【ABSTRACT】 Objective：To evaluate clinical function and the factors affecting blood culture by Bactec 9120.Methods:343 specimens were detected by Bactec 9120.The positive rates,false positive rates,flase negative speed and the ability to detect the bacteria were analyzed.Results:In a total of 343 specimens,56 cases and obtained positive and evaluated.For the time of 56 strains the fastest isolation time of bacteria was 2.33 hour,25.0% was found positive in less than 12 hours,68.7% positive in less than 24 hours,87.5% positive in less than 36 hours.Among the 56 strains 0.58% was false positive and 0.29% false negative.Conclusion:Bactec 9120 blood culture system should shorten the timetodetect and enhance the positive percentage,provide diagnosis and therapy for clinic.The specimens should be aquired according to the requirements to avoid false positive and false negative.

　　【KEY WORDS】 Blood,Body Fluids,Bacteria,BACTEC9120 System

　　现代医学的迅猛发展及广谱、超广谱抗生素的广泛使用，使细菌耐药性不断增强，细菌培养难度增加。这迫使细菌培养方法不断改进，自动化血液/体液培养仪广泛在临床中应用，为临床感染性疾病的快速和准确诊断提高了科学依据。现将我院一年来全自动血培养系统使用情况分析如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 标本 来自我院200801—200812月间临床送检的血培养、关节液、脑脊液、胸腹水等体液。

　　1.2 BD Bactec 9120系统全自动血培养系统，BD Phoenix100全自动微生物鉴定药敏系统，成人需氧、厌氧树脂瓶，儿童树脂培养瓶均为美国BD公司。

　　1.3 标准菌株 大肠埃希菌(ATCC25922)、金黄色葡萄球菌(ATCC25923)、铜绿假单胞菌(ATCC27853)购自杭州天和生物有限公司。肺炎链球菌、白假丝酵母菌为临床株。

　　1.4 标本采集 血液：发热病人在发热初期或高峰期，最好在使用抗生素之前，对已经使用抗生素的，应在下一次用药之前。采血量成人每瓶8～10mL，分别注入厌氧和需氧树脂瓶，儿童3～5mL注入儿童树脂瓶中。无菌采集的体液3～5mL注入儿童树脂瓶中。立即放入Bactec9120系统孵育。

　　1.5 阳性瓶处理 系统报告为阳性瓶时，应从菜单扩展功能项进入观察生长曲线，记录报阳时间，常规卸瓶，并及时转种血琼脂、巧克力琼脂和麦康凯，将血琼脂和巧克力琼脂放于5%～8% CO2孵箱培养，每一项阳性培养瓶必须做涂片、革兰染色，并将涂片结果通知临床。

　　1.6 阴性瓶处理 常规培养5d后系统报告阴性，常规卸瓶，培养瓶全部涂片、转种血琼脂、巧克力琼脂和麦康凯。仍无细菌生长为阴性。

　　1.7 菌株鉴定 使用BD公司的Phoenix100全自动微生物鉴定药敏系统进行鉴定，部分阳性细菌使用SS1000阳光微生物鉴定系统鉴定(广东省惠州市阳光生物科技有限公司)。

　　1.8 不同浓度细菌检测报阳时间 分别用标准菌株大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和临床株肺炎链球菌、白假丝酵母菌5种不同菌株接种于树脂培养瓶，使菌含量为106cfu/mL、104cfu/mL、102cfu/mL、101cfu/mL。

　　2009年6月崔 峰等：全自动血培养系统对血液和体液标本中细菌的检测分析第3期2009年6月河北北方学院学报(医学版)第3期

　　2 结果

　　2.1 从343例标本分离出56株细菌，阳性率为16.33%，其中血液标本207例，分离出36株菌(1例厌氧菌)，阳性率为17.39%，体液标本136例，分离出20株菌，阳性率为14.71%。阳性最早出现时间为2.33h，12h内检出率为25.00%(14株)，24h内检出率为67.86%(38株)，36h内检出率为87.50%(49株)。来自血液的35株需氧菌：G-杆菌报阳时间为14.87h(13株)，G+球菌报阳时间为30.94h(19株)，总体报阳时间小于12h占20.00%(7/35)，12～24h 内检出占48.57%(17/35)，24～36h内检出占(17.14%)6/35。

　　2.2 所分离的病原菌中凝固酶阴性的葡萄球菌最高19/56;大肠埃希菌7/56;肺炎链球菌6/56;金黄色葡萄球菌4/56;铜绿假单胞菌4/56。肺炎链球菌和嗜血杆菌等苛氧细菌均获阳性结果。细菌检出科室主要分布于儿科(16株)，血液科(6株)、神经外科(6株)、神经内科(5株)、内分泌科(4株)。检出56株细菌结果见表1。

　　2.3 9120系统对四种不同浓度的细菌及真菌的检出结果见表2。

　　3 讨论

　　3.1 本系统采用了荧光增强技术，当培养瓶内有微生物生长时，释放出CO2与含有荧光染料的感应器作用，促使感应器内的荧光物质吸收后发出荧光，仪器中探测器将每10min一次连续检测培养瓶中的荧光强度，并转入计算机，计算机再进行分析计算，绘出微生物生长曲线，一旦培养瓶内达到一定量的荧光，仪器发出阳性提示，并据此确定为阳性瓶。本系统采用了自动检测技术以及各种有利于细菌生长的因素：树脂能够吸附抗生素、振摇，血液标本由过去的4%提高到现在的17.39%左右，体液由过去的8%提高到现在的14.71%，提高了阳性率，使肺炎链球菌、嗜血杆菌等苛氧细菌均获阳性结果。

　　3.2 343份培养标本中2例假阳性，涂片和培养均未见细菌生长，假阳性率为0.58%。后证实一例为糖尿病病人，一例为白血病病人。原因可能为：糖尿病病人代谢旺盛;血液病病人白细胞太高，代谢旺盛。二者都能使CO2大量产生，从而干扰荧光物质使系统产生假阳性[1,2]。343份培养标本中1例假阴性，假阴性率为0.29%。由于各种原因使CO2产生减少，如细菌不利用培养基中的葡萄糖(部分非发酵菌)，或糖代谢能力弱(真菌)或抽血量少使菌量太少等均使CO2产生减少，或由于种种原因使苛氧细菌死亡不足以激发荧光系统，都可导致假阴性[2]，因此常规培养系统不论报告阳性还是阴性一定进行涂片和转种。表1 56株细菌种类分布及报阳时间表2 不同浓度细菌的检出时间 细菌浓度

　　3.3 微生物培养标本一定按要求留取并尽可能及时送检，如不能及时送检，标本应放置在室温下，不能放入冰箱。此例为送检的脑脊液标本，抽取脑脊液后因午休，没能送检，临床将标本放于冰箱内，4h后送检，结果涂片见到G+链球菌形似肺炎链球菌，乳胶凝集试验证实为肺炎链球菌，培养后无细菌生长。由表2显示9120系统检出细菌或真菌时间的快慢与细菌或真菌的种类和菌含量多少有关，菌含量多，仪器检出时间短。临床标本加入血培养瓶后立刻上机，而有报道室温延迟12h上机对阳性率没有影响，延迟上机24h以上鲍曼不动杆菌、脆弱拟杆菌、大肠埃希菌、粪肠球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌和肺炎链球菌的阳性率都严重下降[3]，因此，标本加入血培养瓶后尽快上机。

　　【参考文献】

　　1 李超，周铁丽.miniVITAC全自动血液培养仪假阳性/假阴性结果分析[J].检验医学，2004,19(2)：120121

　　2 周樱，钱厚明，刘文娟，等.Bactec9120全自动血培养仪的假阳/假阴结果及常见故障的研究 [J].中国医学装备，2006,3(2)：4849

　　3 王瑶，徐英春，谢秀丽.两种血培养系统的需氧与厌氧瓶对模拟菌血症标本检测能力的对比研究[J].中华检验医学杂志，2007,30(5)：582587