血浆D二聚体和纤维蛋白原在兔脊髓缺血再灌注损伤中的意义

　　作者：巩守平，王文涛，钟大林，吕健，吴锋，车金，僧志远，贺西京 作者单位：西安交通大学医学院：1. 第二附属医院神经外科，陕西西安 710004;2. 血液病实验室,陕西西安 710061;第二附属医院骨外科，陕西西安 710004

　　【摘要】目的 观察血浆D二聚体和纤维蛋白原(FIB)在脊髓缺血再灌注损伤(SCIRI)中的变化，探讨D二聚体和FIB在SCIRI中的意义。方法 采用Zivin法建立家兔SCIRI模型，动态监测兔SCIRI缺血前即刻(10min)、缺血45min(Ⅰ 45min)、缺血再灌注后2h(I/R 2h)、缺血再灌注后6h(I/R 6h)、缺血再灌注后12h(I/R 12h)5个时间点D二聚体和FIB在血浆中含量的变化。结果 血浆D二聚体和FIB在Sham组和I/R组逐渐升高，均在缺血再灌注后2h达到峰值，之后呈下降趋势。血浆D二聚体于缺血再灌注后2h和6h时间点，I/R组与Sham组比较差异具有统计学意义(P<0.05);血浆FIB于缺血再灌注后2h、6h和12h时间点，I/R组与Sham组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 D二聚体和FIB在SCIRI时显著增高，提示SCIRI与血液高凝和继发性纤溶状态密切相关。

　　【关键词】 缺血再灌注 D 二聚体 纤维蛋白原 脊髓

　　Significance of plasma Ddimer and fibrinogen concentrationin spinal cord ischemiareperfusion injury in rabbits

　　GONG Shouping, WANG Wentao, ZHONG Dalin, L Jian,WU Feng, CHE Jin, SENG Zhiyuan, HE XiJing

　　1. Department of Neurosurgery, the Second Affiliated Hospital, Medical School ofXian Jiaotong University, Xian 710004; 2. Hematopathy Laboratory, Medical School ofXian Jiaotong University, Xian 710061; 3. Department of Orthopedic Surgery,the Second Affiliated Hospital, Medical School of Xian Jiaotong University, Xian 710004, China

　　ABSTRACT: Objective To explore the changes and significance of plasma Ddimer and fibrinogen (FIB) in spinal cord ischemiareperfusion injury (SCIRI). Methods SCIRI models were established with Zivin method in rabbits. Plasma Ddimer and FIB were measured at five time points: at ischemia (10min), ischemia 45 min (Ⅰ 45min), 2h after ischemiareperfusion (I/R 2h), 6h after ischemiareperfusion (I/R 6h) and 12h after ischemiareperfusion (I/R 12h). Results In both the sham group and I/R group, plasma Ddimer and FIB increased gradually and reached the peak value at I/R2h, then the decrease tendency was observed 2 hours later. There was a significant difference in Ddimer value between the sham and I/R groups at 2h and 6h time points (P<0.05). A significant difference in FIB was found between the sham and IR groups at 2h, 6h and 12h time points (P<0.05). Conclusion The overexpression of Ddimer and FIB in SCIRI showing hypercoagulability and secondary fibrinolysis may be closely related to SCIRI.

　　KEY WORDS: ischemia/reperfusion; Ddimer; fibrinogen; spinal cord

　　胸腹主动脉瘤、脊髓脊柱手术引起的脊髓缺血再灌注损伤(spinal cord ischemiareperfusion injury, SCIRI)通常导致严重的神经功能障碍，截瘫的发生率约为6%～20%[1]。近年研究发现，微循环障碍和血流动力学、血液流变学、凝血纤溶状态改变在缺血再灌注损伤的病理生理过程中起着重要的作用[2]。我们通过对SCIRI过程中血浆D二聚体和纤维蛋白原(FIB)含量的动态观察，探讨SCIRI时的凝血纤溶状态的改变，旨在为揭示其机制和为临床预防治疗提供理论依据。

　　1 材料与方法

　　1.1 实验仪器及试剂

　　LGPABER型血小板聚集凝血因子分析仪(北京世帝科学仪器公司生产);DG3022A型酶联免疫检测仪(国营华东电子管厂生产)。D二聚体试剂盒(上海太阳生物技术有限公司提供);FIB试剂盒(Dade Behring Marbug GmbH Germany提供);100mL/L水合氯醛(西安交通大学医学院第二附属医院药剂科配置)。

　　1.2 实验动物及分组

　　雄性大白兔20只，体重1.8～2.2kg，由西安交通大学医学院实验动物中心提供。实验动物随机分为假手术组(Sham组)和缺血再灌注组(I/R组)，每组10只。

　　1.3 动物模型的制作

　　参照Zivin法建立SCIRI模型。于手术当日晨动物禁饮食，术前100mL/L水合氯醛(2mL/kg)耳缘静脉麻醉, 仰卧位固定，于剑突下5cm取腹正中切口开腹，暴露腹腔器官，探查腹腔，钝性分离并显露腹主动脉，确认并谨慎游离左肾下动脉分支处以下腹主动脉。I/R组紧靠左肾动脉分支下方约1cm处用无损伤动脉夹夹闭腹主动脉，确认钳夹点以下腹主动脉搏动完全消失后开始计时;缺血45min时再松开动脉夹实现血流再灌注。术中用温盐水纱布敷盖腹腔脏器，监测呼吸、心跳、下肢氧饱和度。Sham组只显露腹主动脉，确认并谨慎游离左肾下动脉分支处以下腹主动脉，但不予以夹闭。术中术后肛温维持在36～37℃，动物苏醒后常规喂食饮水，保温。

　　1.4 标本采集及处理

　　Sham组与I/R组分别于缺血前即刻(I 0min)、缺血45min(I 45min)、缺血再灌注后2h(I/R 2h)、缺血再灌注后6h(I/R 6h)、缺血再灌注后12h(I/R 12h)5个时间点于耳动脉采血各2.5mL，制备血浆,按试剂盒说明书检测血浆D二聚体浓度;血小板聚集凝血因子分析仪检测FIB浓度。

　　1.5 统计学分析

　　各组实验数据以±s表示，应用SPSS13.0统计学软件进行重复测量数据的方差分析，P<0.05表示差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 两组D二聚体检测结果的比较

　　两组在Ⅰ0min时间点相比差异无统计学意义。Sham组血浆D二聚体逐渐升高，I/R 2h时点达到峰值，与Ⅰ0min时间点相比差异有统计学意义(P<0.05)，于I/R 6h时点下降到I 0min时点水平(P>0.05);I/R组血浆D二聚体逐渐升高，在I/R 2h时点达到峰值，之后虽呈渐降趋势，但I/R 12h时点与Ⅰ 0min时点相比较仍有统计学意义(P<0.05)。I/R 2h和I/R 6h时间点I/R组与Sham组比较差异有统计学意义(P<0.05，表1)。表1 两组D二聚体的检测结果(略)

　　2.2 两组FIB检测结果的比较

　　两组I 0min时间点比较差异无统计学意义。Sham组血浆FIB逐渐升高，I/R 2h时点达到峰值，I/R 2h和I/R 6h时点与I 0min时点比较差异有统计学意义(P<0.05)，I/R 12h时点下降到I 0min时点水平(P>0.05);I/R组血浆FIB逐渐升高，在I/R 2h时点达到峰值，之后虽呈渐降趋势，但I/R 12h时点与I 0min时点比较差异仍有统计学意义(P<0.05)。I/R 2h、I/R 6h和I/R 12h时间点I/R组与Sham组比较差异有统计学意义(P<0.05，表2)。表2 两组FIB的检测结果(略)

　　3 讨论

　　缺血再灌注(ischemia reperfusion)损伤在临床上较为常见，多引起严重后果。近年研究表明其病理过程与微循环调节异常和血流量变化、血管内皮细胞损伤、微循环障碍、血流动力学变化、凝血纤溶状态改变等密切相关，已引起众多学者的重视[2]。

　　FIB(凝血因子Ⅰ)是由肝实质细胞合成的一种急性反应性蛋白质，既是凝血系统中的“中心”蛋白质，也是一种炎症标记物，除直接参与凝血过程外，还介导血小板聚集，影响血液黏度。FIB增高多见于应激反应、炎性栓子(多在急性感染时)、脂肪栓子、血液高凝状态、先天性FIB增高等[34]。李健等[5]研究脑缺血再灌注损伤时发现，再灌注后存在血管内微血栓形成及微循环灌注障碍，并认为血浆FIB升高在此病理过程中起着至关重要的作用。戴菁等[6]研究心肌缺血再灌注损伤时发现，损伤早期激活凝血系统，血浆FIB含量出现消耗性降低。我们研究发现，Sham组单纯手术创伤时应激反应就使血浆FIB水平显著升高;而I/R组血浆FIB升高水平与Sham组相比较，于I/R 2h～I/R 12h时间段最为显著(P<0.01)。推测其升高的原因：一方面手术创伤应激可促使血浆FIB升高;另一方面SCIRI过程所致的大量炎症介质释放、炎症状态的持续、炎性栓子的形成等可能是导致血浆FIB极显著升高的重要原因。

　　D二聚体是交联纤维蛋白在纤溶酶作用下产生的一种特异性降解产物，可作为反映高凝状态和纤溶亢进的分子标志物，其水平增高反映了血液高凝状态，继发性纤溶活性增强。血浆D二聚体水平对血栓性疾病的临床诊断、疗效观察和预后判断有重要意义[7]。研究显示，大鼠脑缺血再灌注损伤后第1天大鼠血浆D二聚体水平升高，第3～7天显著高于对照组，第14天尚未恢复正常，提示脑缺血再灌注损伤后体内有纤溶蛋白形成和溶解、高凝状态和继发性纤溶亢进[8]。我们的研究结果显示，Sham组单纯手术创伤时应激反应就使血浆D二聚体水平在I/R 2h时点显著升高;I/R组手术创伤加上SCIRI，血浆D二聚体水平极显著升高，以I 45min～I/R 6h时间段最为显著。原因可能为：Sham组手术应激使D二聚体升高;SCIRI时局部血流动力学改变，血管内皮细胞与脊髓组织损伤，在体内发生血栓性病变，导致组织和血管的纤溶酶原激活物大量释放，引起继发纤溶活化，从而使纤维蛋白大量分解成D二聚体。

　　近来研究证实，大鼠大脑中动脉栓塞造成脑组织缺血损伤后血浆纤维蛋白原和D二聚体含量较正常对照组显著增高，表明脑组织缺血损伤后大量的纤维蛋白原形成和降解，存在着高凝状态、微血栓形成和继发性纤溶活性增强。联合检测血浆D二聚体和FIB水平可作为监测缺血性脑血管疾病、颅脑损伤患者血液凝血和纤溶状态的重要指标,不仅可以反映脑缺血情况及脑内血栓形成情况，还可以监测患者溶栓治疗情况，对预测患者预后有重要的临床价值 [910]。重型颅脑损伤患者亚低温治疗和缺血性脑血管病患者高压氧治疗后血浆纤维蛋白原和D二聚体显著下降，高凝状态、继发纤溶亢进减轻，预后明显提高[1112]。我们的研究结果显示，在SCIRI病理过程中，FIB与D二聚体均存在升高后逐渐降低的过程，以I 45min～I/R 6h时间段升高最为显著。结果证实在结扎腹主动脉造成SCIRI的病理过程中存在高凝状态和继发性纤溶系统亢进倾向，以I/R 2h时间点极为显著，提示高凝和继发性纤溶亢进存在于SCIRI的病理过程中，并可能影响SCIRI病情的转归。

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