手工洗涤血小板的制备及临床输注后疗效的研究

　　作者：王富国 　作者单位： 242000 安徽宣城，宣城市中心血站

　　【摘要】 目的 对比研究手工洗涤后血小板功能与形态的影响,观察洗涤血小板的质量和临床疗效。方法 采用血细胞分析、经典玻球法、经典比浊法、对CS 3000plus血细胞分离机采集血小板和手工制备洗涤血小板相互间的有关形态指标、黏附聚集性的比较，双盲法输注机采血小板和手工洗涤血小板。结果 手工洗涤血小板的回收率可达洗涤前的91.08%，残余红细胞(0.315±0.003)×109/u，残余白细胞(0.032±0.003)×108/u，血浆蛋白清除率≥99.14%，与机采血小板差异有统计学意义(P<0.01)。两组制品血小板PDW和MPV、血小板的黏附聚集率、血小板功能的指标与机采血小板差异无统计学意义(P>0.05)。洗涤血小板临床输注后疗效与机采血小板差异无统计学意义(P>0.05)，且输注不良反应明显低于机采血小板。结论 利用0.9%的生理盐水对血小板进行手工洗涤的工艺方法是科学的、可行的，洗涤血小板各项质量指标符合国家标准，在临床的应用有广阔的前景。

　　【关键词】 血小板;洗涤;机采/CS 3000;临床应用

　　Maded washed platelet and clinical observation of effects

　　WANG Fu-guo.

　　The Central Blood Bank of Xuancheng,Anhui 242000,China

　　【Abstract】 Objective To assess the influence of apheresis and wash on platelet function and morphology.Washed platelet of quality and clinical effect were observed.Methods To determine the count,size,distribution， aggregation of the platelet from the peripheral blood prior to apheresis and aphersed produced by CS 3000 plus or washed platelets,double blindness transport the peripheral blood prior to apheresis and aphersed produced by CS 3000 plus and washed platelet.Results Washed platelet recycle rate 91.08%,residul WBC( 0.032±0.003)×108/u,residul RBC (0.315±0.003)×109/u,plasma protein separate ≥99.14%,both apheresed and washed platelet showed no problem on PDW and MPV,there were no statistical difference between groups.There were no difference in platelet and aggregation expression(P>0.05).But there is no difference between apheresed and washed platelet.Clinical observation of efffects no diffence(P>0.05).In addition it is improving blood safety.Conclusion 0.9%GNS washed platelet was science and safety.Quality of washed platelet fit into country’s standard,washed platelet have reliable quality and can be used in a variety of clinical conditions and new preservation technique.

　　【Key words】 platelet;flow-cytometry;CS 30000;clinical application

　　随着血细胞分离机在国内的推广，我国机采血小板的用量逐年攀升，已占了临床应用血小板的绝大部分[1，2]。影响血小板输注疗效的，包括是非免疫因素和免疫因素[3]。目前国内用CS 3000plus血细胞分离机及专用的配套管道洗涤血小板，成本大，手工采集血小板洗涤报道很少;本文就手工采集血小板洗涤制备的安全性与临床疗效进行研究，报道如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料 采集全血400ml多联袋和机采血小板耗材(南格尔公司)。

　　1.2 设备 大容量低温离心机(J-6M型，美国Beckman)、KX-21型血小板计数仪(美国产)、全自动无菌接口机(TSCDsc-201A型)、0.9%生理盐水(国产)、恒温血小板震荡仪(美国产)、pH计(pH-HJ90B)，CS 3000plus血细胞分离机(美国Baxter公司)等。

　　1.3 方法

　　1.3.1 机采血小板 CS 3000plus血细胞分离机按常规操作一次采集一个治疗量的血小板,取样检测血小板产品各项的相关指标。

　　1.3.2 手工洗涤血小板的制备(WPC) 提取多联袋采集的6h内的400ml新鲜全血,置大容量低温离心机，以1200×g 22℃离心9min，采用富浆法手工制备成富血小板血浆(PRP)。然后将PRP以2475×g 22℃离心15min，制备得PC(2u/袋)，将贮存期内已经解聚的PC，以22℃ 5800×g,离心5min,清除袋底的白细胞、红细胞，将上清液即少白细胞血小板挤压分离到另一无菌空袋内，加入0.9%生理盐水300ml，于22℃ 2475×g 离心15min，移去上清液，再加入0.9%生理盐水300ml，室温静置30min，再经22℃ 2475×g 离心15min，移出上清液，加入0.9%生理盐水60ml悬浮血小板即为WPC，放入血小板恒温保存箱在22℃静置1h后，然后水平震荡(60次/min)解聚，取样检测洗涤血小板的各项指标。

　　1.3.3 血小板黏附试验 采用经典玻球法[4]测定血小板黏附率。

　　1.3.4 血小板聚集试验 采用经典比浊法[4](11.2μmol/L ADP)测定血小板最大聚集率。

　　1.3.5 血小板输注疗效的判断 CCI 1h大于10为有效，小于10为无效[5]。

　　1.3.6 质量指标 用血小板的总形态分数、平均体积、分布宽度、计数、黏附功能、聚集功能、pH值、血浆蛋白清除率和白细胞、红细胞残余量等指标来评价血小板洗涤前后的质量变化。

　　1.3.7 临床效果观察 随机抽取多次输注过血小板的患者40例，分为两组(每组20例)。观察组每例分次输入4个治疗量的手洗血小板，对照组每例分次输入4个治疗量的机采血小板，然后观察临床疗效和输注不良反应以及血小板纠正计数指数(CCI)。

　　1.3.8 统计学方法 采用t检验。

　　2 结果

　　2.1 机采与手工分离洗涤的血小板指标观察 手工洗涤血小板的回收率可达洗涤前的91.08%，洗涤后各项血小板功能的指标与机采血小板比较差异无统计学意义(P>0.05)，残余红细胞(0.315±0.003)×109/u，残余白细胞(0.032±0.003)×108/u，血浆蛋白清除率≥99.14%，差异有统计学意义(P<0.01)，见表1。

　　表1 机采与手工分离洗涤的血小板指标观察 (略)

　　注：2u血小板为1袋400ml全血制备,每组为100

　　2.2 洗涤前后血小板质量对比 洗涤血小板PDW与MPV进行对比，24h内差异无统计学意义(P>0.05)，36h后差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

　　表2 洗涤前后血小板质量对比 (略)

　　注：洗涤前与洗涤后PDW、MPV,洗涤前与洗涤后24h PDW、MPV差异无统计学意义(P>0.05);洗涤前于洗涤后36h PDW、MPV差异有统计学意义(P<0.05)

　　2.3 手工制备洗涤后与机采血小板临床疗效对比 洗涤血小板经临床输注后，疗效与对照组机单采血小板差异无统计学意义(P>0.05)，且输注不良反应明显低于机采血小板，见表3。

　　表3 手工制备洗涤后与机采血小板临床疗效对比(略)

　　注：每次输注1个治疗量,*P<0.05

　　3 讨论

　　目前临床上应用机采血小板已非常广泛，机采血小板的应用也大大降低了输注血小板的不良反应;由于浓缩血小板的悬浮液采用供者的血浆，血浆中含有抗原、抗体、凝血酶、纤溶酶等异体蛋白，白细胞、红细胞、血小板自身特异性抗原和HLA I类抗原均可引起同种免疫[6]，输注血小板引起的输注不良反应也日益得到重视。特别是对血浆过敏、IgA缺乏的患者，由于患者血浆中有IgA抗体，当输入含有IgA的机采血小板时，往往发生严重的抗原抗体反应[7]，多次输注血小板患者中约有8%产生血小板特异性抗体[8]，Sanz报道，HLA配合的血小板输注也有3.8%出现输注无效，是由血小板特异性抗体引起的[9]。洗涤血小板不仅能解决血浆过敏、IgA缺乏、同种免疫等患者的血小板输注无效治疗问题，而且对血小板输注中预防非溶血性发热反应、急性血管内溶血反应有一定的作用[10]。

　　本文洗涤血小板后对血小板的功能指标进行了观察，测定了血浆蛋白、红细胞、白细胞的清除率，差异有统计学意义，说明应用0.9%生理盐水作洗涤液及悬浮液的方法是可靠的、稳定的，但生理盐水作为悬浮液缺乏血小板代谢所需的物质，生理盐水不是最理想的悬浮液。洗涤血小板保存36h后PDW增宽，MPV增大，其原因可能是血小板悬浮在生理盐水中保存，细胞内能量消耗后，Na+进入细胞内，导致细胞内渗透压增高，使PDW增宽、MPV增大;同时血小板保存的最适pH值为6.6~6.8，所以洗涤血小板不宜长时间保存，应在洗涤后6h输注，未能及时输注能在(22±2)℃震荡条件下保存12h。对临床输注的20例患者进行观察，仅有1例患者输注洗涤血小板后出现了低热，这可能与患者当时的病情有关，其他无任何不良反应发生。

　　欧美临床血小板始终以手工采集为主，国内输血界对全血中血小板资源缺乏足够的认识，手工采集的全血中血小板资源严重浪费[11]。手工制备洗涤的血小板，不仅能节约全血中的血小板资源，而且为临床上需要反复输注血小板而发生输注无效或输注不良反应的患者，提供了一条新的治疗途径，手工制备洗涤血小板是一种安全有效的血小板制剂，值得在临床上推广应用。

　　【参考文献】

　　1 洪婴，郑碧华.献血者血细胞参数与机采血小板采集效率的关系.中国输血杂志，2002,15(5):340.

　　2 汤小娴.机采血小板输注治疗血小板严重减少的疗效观察.宁波大学学报(理工板),2002,15(2):95.

　　3 傅菊芳.血液病患者血小板输注无效的分析与护理.中华护理杂志，2000,35(10):596.

　　4 李家增.实验血液学.上海：上海科学技术出版社，1997,300.

　　5 田兆嵩.临床输血学.北京：人民卫生出版社，2002,35.

　　6 Kurz M, Knobl P. Platelet-reactive HLA antibodies associated with how a comparison between the monoclonial antibody-specific immobilization of platelet antigens assay and the lymphocytotoxicity test. Tansfusion,2001,41(6):771.

　　7 江朝富.血细胞分离机制备的浓缩血小板与洗涤血小板的体外实验对照.中国输血杂志，2002,3(15):167.

　　8 Sanz C, Freire I. Platelet-specific antibodis in HLA-immuzed patients receiving chronic platelet support. Tansfusion,2001,41(6):762.

　　9 Boehlen F, Bulla O, Michel M, et al. HPA-genotyping and antiplatelet in femal blood donors. Hematol J,2003,4(6):441.

　　10 Vo TD, Cowles J, Heal JM, et al. Platelet washing to preveent recurrent febril reactions to leucocyte-reduced transfusions. Transfusion Med,2001,11(1):45.

　　11 马曙轩.手工采集血小板的制备与临床应用.中国输血杂志，2004,17(5):372.