血管内皮细胞生长因子受体在急慢性白血病患者中的表达
发表时间：2010-04-12 浏览次数：459次
作者：王 敏 顾 健 马 莉 作者单位： 225001 江苏扬州，苏北人民医院血液科
【摘要】 目的 探讨血管内皮细胞生长因子受体(VEGFR)与急慢性白血病之间的关系和意义。方法 采用流式细胞术(FCM)分析初诊急慢性白血病患者骨髓单个核细胞(MNC)的VEGFR表达。结果 全组31例初诊未治急慢性白血病患者骨髓单个核细胞VEGFR平均表达率为(69.33±30.34)%，而对照组骨髓均无VEGFR表达。结论 白血病细胞不同程度表达VEGFR，阻断VEGF-VEGFR信号通路可成为白血病治疗新的靶点。
【关键词】 血管内皮细胞生长因子受体;流式细胞术;急慢性白血病
血管新生是恶性肿瘤细胞生长、增殖及浸润不可缺少的重要条件之一。血管内皮细胞生长因子(VEGF)是主要的促血管新生因子，与其相应受体(VEGFR)结合，发挥重要生物学功能。
1 资料与方法
1.1 一般资料 病例组31例均为初诊急慢性白血病患者，经MIC分型确诊，男20例，女11例，中位年龄46岁(9～88岁)。急性髓系白血病(AML)患者18例，包括3例M0，3例M1，2例M2，4例M3，4例M4，2例M5;急性淋巴细胞白血病(ALL)患者7例，慢性粒细胞白血病慢性期(CML-CP)患者3例，慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者3例。正常对照组5例，均为大致正常骨髓象，无血液系统疾病及其他系统恶性肿瘤患者。
1.2 标本采集与处理 无菌采集骨髓液2ml，枸橼酸钠抗凝，PBS稀释后，使用人淋巴细胞分离液(比重1.007)分离单个核细胞，调整细胞数至4.0×109/L。
1.3 检测方法 采用的人VEGFR荧光素检测试剂盒(购自R&D公司)分析骨髓单个核细胞表面VEGFR表达。按试剂盒说明书操作，25μl细胞悬液依次与生物素化rhVEGF和avidin-FITC孵育，同时等量细胞悬液和生产商提供的生物素化阴性试剂孵育做对照，以减少非特异性荧光。使用FACSalibur型流式细胞仪(BD公司)分析，根据FSC-SSC点图，以目标细胞群设门，根据细胞发出的荧光测定VEGFR表达率。
1.4 统计学方法 用SPSS 8.0软件包处理，结果用百分率表示。
2 结果
全组31例初诊未治急慢性白血病患者骨髓单个核细胞VEGFR平均表达率为(69.33±30.34)%。其中27例初诊白血病患者不同程度表达VEGFR，3例CML患者和4例AML-M3患者中各有2例无VEGFR表达。而对照组骨髓均无VEGFR表达(见图1)。表达VEGFR的白血病患者中，有44.4%的患者骨髓存在VEGFR高表达，表达率>90%。
A：正常骨髓单个核细胞VEGFR阴性管 B：正常骨髓单个核细胞VEGFR测定管C：白血病患者骨髓单个核细胞VEGFR阴性管D：白血病患者骨髓单个核细胞VEGFR测定管
图1 流式细胞术检测VEGFR结果
3 讨论
越来越多的研究表明，VEGF是促进血管新生最主要的调节因子之一，在恶性肿瘤细胞的生长和增殖中扮演重要角色。VEGF有5种同种异构体，其中VEGF121和VEGF165是内皮细胞分裂的强促进剂。VEGF特异性受体目前发现有4种，其中最主要的是VEGFR-1和VEGFR-2，均为酪氨酸激酶家族成员。VEGFR-1和VEGFR-2在正常成人体内主要表达于内皮细胞，与VEGF121和VEGF165结合力最强，是参与血管新生过程主要的受体。VEGFR与其配体结合后，发生二聚体化及自身磷酸化，从而被激活。
本研究采用FCM分析新鲜分离的白血病细胞表面VEGFR的表达，主要检测的是VEGFR-1和VEGFR-2。使用FCM分析时，根据白血病细胞在FSC-SSC点图上的位置与其他细胞不同，通过设门可选定分析白血病细胞群，减少其他细胞和碎片的干扰，结果更准确。结果显示，31例白血病患者中27例表达不同程度VEGFR，提示VEGFR是参与白血病发病过程的重要因素之一。而多种白血病细胞系及新鲜分离的白血病细胞培养上清中均可检测出高水平VEGF[1，2]，说明白血病细胞可分泌VEGF，与自身VEGFR结合，通过自分泌途径促进肿瘤细胞生长、增殖。使用VEGFR抗体可有效中和VEGF介导的受体活性，抑制人脐静脉血内皮细胞(HUVEC)有丝分裂，有效阻止人白血病细胞增殖、迁移[3]。31例急慢性白血病患者中仅有4例不表达VEGFR(CML-CP和AML-M3各2例)，而3例M0患者白血病细胞VEGFR表达率均在90%以上，M1和M2表达程度不同，是否VEGFR表达率与肿瘤细胞分化程度有关，有待积累更多病例加以分析。即使同一类型白血病，不同患者VEGFR表达率亦不同，甚至无表达，说明VEGFR在白血病患者中的表达有个体差异。提示针对VEGFR高表达的白血病患者选用干扰VEGF-VEGFR信号途径的药物进行治疗，可能提高缓解率、延长患者生存期。
【参考文献】
1 Hussong JW,Rodgers GM,Shami PJ.Evidence of increased angiogenesis in patients with acute myeloid leukemia.Blood,2000,95(1):309-313.
2 Fielder W,Graeven U,Ergun S,et al.Vascular endothelial growth factor,a possible paracrine growth factor in human acute myloid leukemia.Blood,1997,89(6):1870-1875.
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