缓冲剂在凝血仪内的摆放位置对纤维蛋白原测定结果的影响
发表时间：2010-03-25 浏览次数：549次
作者：刘均如 作者单位：（广东省人民医院检验科，广州 510080） 【摘要】 目的 评价Owren’s缓冲剂分别摆放于冷藏区和非冷藏区两种情况下，对血浆纤维蛋白原（Fbg）的检测结果所产生的影响。方法 将120例临床血浆标本分为两大组，分别将缓冲剂放置于凝血仪内试剂盘的非冷藏区和冷藏区，对Fbg进行连续测定分析。对两种情况下测定所得数椐分别进行F方差分析。结果 （1） 缓冲剂放置于非冷藏区（室温24～26℃）情况下，3 h内，4次测定结果之间比较无统计学显著性差异（P＞0.05）；而0 h结果与4 h结果，1 h结果与5 h结果，2 h结果与5 h结果，3 h结果与6 h结果，两两比较均具有统计学显著性差异（P＜0.05）。（2）缓冲剂放置于仪器内冷藏区情况下（实测温度9～12℃），6 h内7次测定结果之间组间比较均无统计学显著性差异（P＞0.05）。结论 当凝血仪内缓冲剂放置于冷藏区内，6 h内（可能更长时间）对测定结果无显著性影响；而当缓冲剂贮放于非冷藏区内，随着时间延长对Fbg测定结果影响逐渐增大，前3 h内无影响；但3 h后，测定值降低。因此认为，Clauss法测定Fbg时，Owren’s缓冲剂摆放位置应在凝血仪内冷藏区，此可保障测定结果的准确性。
【关键词】 纤维蛋白原； 凝血仪； Owren’s缓冲剂
近年来，测定血浆纤维蛋白原（Fbg）的化学法和Clauss法手工操作已逐渐被半自动、全自动凝血仪所取代。全自动凝血仪如MDA180、CA1500等仪器试剂贮放部位通常都设有冷藏功能的低温区和无冷藏功能的室温区。因为除免疫反应外，生物学方法和生物化学方法中的反应通常为酶促反应，试剂中含有酶或酶激活剂，温度升高，酶活性下降而影响测定结果的准确性；也有一些试剂成分为不稳定物质，温度升高使其分解或性质改变加速而影响测定结果。Clauss法测Fbg用的Owren’s缓冲剂就属于后一种情况。大多数凝血仪采用Clauss法测定Fbg，该法是美国国家临床检验标准委员会（NCCLS）推荐的Fbg常规定量方法。该法简便，快速，相关性好，但对试剂要求高。因此，加强试剂的贮放管理及仪器在使用试剂过程中试剂摆放位置的合理设置，对Fbg测定结果的准确性具有重要意义。本实验旨在探讨凝血仪测定血浆Fbg时，缓冲剂摆放位置的合理性。
1 资料与方法
1.1 样本来源 随机选择本院门诊和住院病人120例，送检新鲜标本（0.109 mol/L枸橼酸溶液按1∶9比例抗凝全血）3 000 r/min离心10 min，分离血浆。
1.2 仪器和试剂 测定仪器为日本东亚公司CA1500型全自动血凝仪；试剂为配套的Dade Bering公司的试剂。
1.3 方法
1.3.1 120例标本分为室温组和冷藏组两大组，每组60例，各组每天20例，分3 d完成。在室温（24～26℃）条件下，将缓冲剂放置于仪器内非冷藏区（即处于室温下），室温组标本（按标本送检先后顺序每10例标本为1小组，共6小组）每小时测定Fbg 1次，连续测定7次。每次平行测定两份取平均值为记录结果；将缓冲剂设置于凝血仪内冷藏区（实测温度9～12℃），冷藏组标本（分组方法同冷藏组）每小时测定Fbg 1次，连续测定7次。每次平行测定2份取平均值为记录结果。
1.3.2 时间计算以缓冲剂放置在凝血仪内为开始。
1.3.3 由于实验时间较长，所有标本在仪器加样后均存放在4～8℃环境下。凝血酶在仪器每次测定完后均贮放于4～8℃环境中，并保证试剂复溶后4 h内用完或更新。尽可能避免因环境因素使标本及凝血酶变异而带来的影响。
1.3.4 实验所得数据利用SPSS 1.0统计学软件进行差方分析。
2 结 果
2.1 缓冲剂设置于凝血仪内非冷藏区（室温24～26℃），室温组60例标本Fbg 6 h内7次测定结果呈趋势性下降，缓冲剂放置时间越长，测定结果与首次测定测定结果之间的偏差越大。前3 h内4次测定结果组间比较无统计学意义（P＞0.05）；而0 h结果与4 h结果，1 h结果与5 h结果，2 h结果与6 h结果，两两比较均具有统计学意义（P＜0.05）。其中0 h与5 h，1 h与5 h，2 h与6 h结果两两比较差异均具有极显著性（P＜0.01）。结果见表1，表2。 表1 Owren’s缓冲剂在凝血仪内非冷藏区不同留置时间所测 Fbg结果的均数排列表2 Owren’s缓冲剂在凝血仪内非冷藏区不同留置时间所测 Fbg结果的组间比较结果（P值）
2.2 室温25℃条件下缓冲剂放置于凝血仪内冷藏区（冷藏区实测温度9～12℃），冷藏组60例标本6 h内7次测定结果之间两两比较均无统计学意义（P＞0.05）。7次结果的均数排列见表3、表4。表3 Owren’s缓冲剂在凝血仪内冷藏区不同留置时间 Fbg测定结果的均数排列表4 Owren’s缓冲剂在凝血仪内冷藏区不同留置时间FBg测定结果的组间比较结果
3 讨 论
纤维蛋白原（Fbg）测定日益受到临床的重视。其不仅用于术前、术中、术后监控出凝血状况，还作为血栓性疾病中溶栓、抗凝治疗的监测指标。同时，Fbg是急性时相反应蛋白之一，常被列为某些疾病的危险因素。
仪器测定血浆Fbg的方法大致分为3类：（1）生物学方法（凝固酶法）：（2）生物化学方法；（3）免疫学方法。Clauss法属凝固酶法，与其他同类方法比较具为有简便，快速，相关性好等优点，缺点是试剂昂贵。
Clauss法测Fbg试剂组成有凝血酶和Owren’s缓冲剂（血浆稀释剂）。Owren’s缓冲剂的主要成分是二乙基巴比妥钠（又名咪唑）和氯化物，其中二乙基巴比妥钠是一种不稳定物质，常温中易分解，使缓冲液内组分浓度改变，缓冲能力下降，从而影响测定结果的准确性。很多文献和有关报道对Clauss法的方法学评价中均有强调酶试剂的使用和贮存注意事项，却极少提到缓冲剂是不稳定溶液这一特性。
本组实验结果表明，Owren’ｓ缓冲剂在室温25℃左右放置超过3 h即会影响Fbg测定的准确性，导致Fbg测定值下降；缓冲剂放置时间越长，测定结果越偏离首次测定值。而凝血仪冷藏区内（实测温度9～12℃）缓冲剂则受到较好的保护，留置时间6 h内（可能更长时间）不会影响Fbg测定结果准确性。由于凝血仪通常全天不间断工作，试剂会在仪器内留置较长时间，如果Owren’s缓冲剂设置于仪器内非冷藏区，那在实际工作中是极容易忽略缓冲剂在室温下的这种变化给测定结果带来的影响的。本组实验结果肯定了在Clauss法测定Fbg时，凝血仪内Owren’缓冲摆放位置设在冷藏区比设在室温区更加合理，因其可以保障检验结果的准确性。
【参考文献】[1] 丛玉隆，王 丁.当代检验分析技术与临床［M］.北京：中国科学技术出版社，2002.
[2] 丛玉隆.临床检验质量管理体系——贫血、血栓及遗传学检验技术与临床［M］.天津：天津科技出版社，2002. 订阅登记：
