穴位敷贴对过敏性鼻炎小鼠血细胞分类和血清SIgE的影响
发表时间：2009-12-22 浏览次数：592次
穴位敷贴对过敏性鼻炎小鼠血细胞分类和血清SIgE的影响作者：陈劼， 杨挺， 赖新生， 唐纯志， 何利雷， 金炳旭 作者单位：广州中医药大学针灸推拿学院，广东广州 510405；武警南昌市消防医院，江西南昌 330003；广州中医药大学针灸推拿学院七年制硕士研究生，广东广州 ５１０４０５ 【摘要】 【目的】观察穴位敷贴对过敏性鼻炎模型小鼠外周血嗜酸性粒细胞（ＥＯＳ）和血清卵白蛋白（ＯVＡ）特异性IgE（SIgE）的影响。【方法】选用ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠６０只，随机分成５组：正常对照组、模型组、穴位敷贴组、激素阳性对照组（激素组）和磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）阴性对照组（ＰＢＳ组）；除正常对照组以外，其他组均采用ＯＶＡ致敏及攻击方法复制过敏性鼻炎模型，穴位敷贴组以中药（白芥子、玄胡、细辛、甘遂、苍耳子）敷贴大椎穴，激素组以１００ｍｇ／Ｌ地塞米松腹腔注射，ＰＢＳ组采用大椎穴假治疗同时腹腔注射ＰＢＳ。以苏木素-伊红（ＨＥ）染色检测各组小鼠外周血ＥＯＳ计数及百分率，酶联免疫吸附（ＥＬＩＳＡ）法检测各组小鼠血清SIgE水平。【结果】模型组小鼠外周血ＥＯＳ计数与百分率、血清SIgE水平均显著性升高（Ｐ＜０.０５或Ｐ＜０.０１）；穴位敷贴组和激素组的治疗均可显著性降低模型小鼠ＥＯＳ计数与百分率及SIgE水平（Ｐ＜０.０５），两治疗组作用相仿（Ｐ＞０.０５）。【结论】穴位敷贴治疗过敏性鼻炎的作用可能与其能降低外周血ＥＯＳ计数及血清SIgE水平有关。 【关键词】 鼻炎 过敏性／穴位疗法 嗜酸性粒细胞／血液 SIgE／血液 疾病模型 动物 小鼠 过敏性鼻炎是鼻黏膜接触致敏原后，由免疫球蛋白ＩｇＥ介导的Ｉ型变态反应炎症性疾病，以嗜酸性粒细胞（ＥＯＳ）等多种炎性细胞浸润为特征；过敏性鼻炎呼吸道局部过敏反应是全身过敏反应在呼吸道局部的表现［１-２］。本研究观察了卵白蛋白（ＯＶＡ）过敏性鼻炎模型小鼠血细胞变化情况以及穴位敷贴等处理对其影响。现报道如下。1 材料与方法 1.1 动物与分组 ＢＡＬＢ／c小鼠６０只，６～１０周龄，雌性，体质量２０～２５g，ＳＰＦ级，由广州中医药大学实验动物中心提供，饲养于屏障系统中，饲养以标准颗粒饲料，自由饮水，室温，光照时间为８：００～２０：００。小鼠随机分为５组：正常对照组、模型组、穴位敷贴组、激素阳性对照组（激素组）、磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）阴性对照组（ＰＢＳ组），每组各１２只。 1.2 试剂与仪器 苏木素-伊红（ＨＥ）染液（广州化学试剂公司）；辣根过氧化物酶（ＨＲｐ）标记的大鼠抗小鼠ＩｇＥ单克隆抗体（ＨＲｐ，ＩｇＥｍＡb）(1：1000，SouthernBiotech 公司)；酶标亲和素（AvidinHRp）为军事医学科学院微生物流行病研究所产品；ＭＤＦ１３５型ＣＯ２培养箱（上海医疗器械厂）；SpectorⅠ型酶标分析仪（苏州医疗器械厂）；７５３Ｂ型紫外分光光度计（上海第三分析仪器厂）。 1.3 药物 取白芥子、玄胡、细辛、甘遂、苍耳子各等份，烘干后碾成细粉（过100目筛），密封，恒温（冰箱保鲜）保存备用。用时以生姜汁调成糊状，制成药饼，上放少许肉桂粉。 1.4 模型复制［１-２］ 除正常对照组外，小鼠于第1、15天腹腔注射0.1mL抗原佐剂混悬液进行致敏。并于初次致敏第15天开始每日1次采用50μL的2mg/mLOVA滴鼻，连续攻击15d，每隔3d观察喷嚏及挠鼻次数，观察时间3min/只，直至出现烦躁，喘促，咳嗽，点头，喷嚏抓鼻，甚至跌倒等呼吸道痉挛梗阻症状，提示造模成功，然后将造模成功的小鼠按实验设计开始给药，同时持续以OVA滴鼻至处死取材，剂量同上。 1.5 治疗方法 穴位敷贴组于小鼠初次致敏第15天开始以药物敷贴于背部大椎穴，取穴方法参照文献［１-２］，每日1次，每次6h，连续治疗4周。激素组于小鼠初次致敏第15天开始以100mg/L地塞米松腹腔注射，在OVA滴鼻前1h注射（0.5mL/只），每日1次，治疗时间同上。PBS组于小鼠初次致敏第15天开始背部脱毛，大椎穴位处用纸团代替药物进行穴位固定，在OVA滴鼻前1hPBS腹腔注射（0.5mL/只）。每日1次，治疗时间同上。 1.6 细胞分类计数 小鼠用乙醚麻醉后无菌方法摘除右眼放血，1滴血涂片2张，HE染色后检测外周血EOS计数及百分率。EOS绝对值采用血片直接计数。 1.7 血清制备 各组小鼠最后1次激发24h后，采用眼球摘除法收集外周血，37℃静置30min，收集血清，-70℃保存备用。 1.8 血清OVA特异性IgE(SIgE)检测 采用酶联免疫吸附（ELISA）法。小鼠血清按1：21稀释，以10μg/mL的OVA包被酶标板，最终加HRp标记的大鼠抗小鼠IgEmAb(1：1000)、AvidinHRp，于酶标仪490nm处测量D值。以不加待测样本和HRpIgEmAb的复孔为对照孔。 1.9 统计学方法 采用SPSS 11.0软件进行数据的统计分析。2 结果 2.1 各组外周血EOS值比较 表1结果显示，模型组外周血EOS百分率及计数均显著性升高（Ｐ＜０.０５）；穴位敷贴及激素治疗均可显著性降低ＥＯＳ计数和百分率（Ｐ＜０.０５），两组间作用相仿（Ｐ＞０.０５）。 表1 各组外周血ＥＯＳ值比较（略） Table 1 Comparison of peripheral blood EOS in various groups（略） 统计方法：t检验；①Ｐ＜０.０５，与正常对照组比较；②Ｐ＜０.０５,与模型组比较2.2 各组血清SIgE水平比较 表２结果显示，模型组血清SIgE水平显著性升高（Ｐ＜０.０１）；穴位敷贴和激素治疗可显著性降低SIgE水平（Ｐ＜０.０５），两种治法作用相仿（Ｐ＞０.０５）。 表２ 各组小鼠血清SIgE水平比较（略） Table 2 Comparison of serum SIgE level in various groups 统计方法：t检验；①Ｐ＜０.０１，与正常对照组比较；②Ｐ＜０.０５,与模型组比较３ 讨论 呼吸道炎症是各型、各期呼吸道过敏性疾病共同的病理基础，以ＥＯＳ为主的多种炎症细胞介导了呼吸道炎症。呼吸道发生炎症时，全身血液中的ＥＯＳ迁移到呼吸道组织，由于ＥＯＳ有大量低亲和力IgE受体，可通过IgE介导并激活气道上皮炎性递质、细胞因子，并参与气道变态反应炎症，ＥＯＳ在过敏性鼻炎的发病机制中起着重要作用［１-７］。 过敏性鼻炎是机体对变应原刺激产生反应而引起的一种气管、支气管反应性增高的疾病，属Ⅰ型变态反应性疾病，其产生与IgE的生物学作用有关。IgE具有反应素活性，属于亲细胞抗体。IgE对同种细胞有亲嗜性，通过IgE的Fc段与血液中的ＥＯＳ及组织中的肥大细胞表面的高亲和力IgE受体（FcεRⅠ）及EOS表面的低亲和力IgE受体（Fcε R Ⅱ）特异性地结合，使机体处于致敏状态；当同一变应原再次吸入已致敏的个体内，即与结合在肥大细胞上的Ｆab段发生特异性结合，使靶细胞产生冲动，导致细胞脱颗粒结合于多价致敏原的IgE分子上，经过聚合使IgE受体互相联结，激发一种生化反应，导致肥大细胞分泌一系列化学介质，这些介质与周围组织互相作用，诱发变态反应。 IgE是过敏性鼻炎发病中的重要抗体。体内IgE水平增高是特应性体质和过敏性鼻炎的共同特征，往往可以反映过敏性鼻炎的特应征的存在。血清IgE常规用来检测过敏性鼻炎IgE介导的Ⅰ型变态反应，IgE增高提示有过敏性鼻炎［８-９］。 本研究结果显示：ＯＶＡ过敏性鼻炎模型组小鼠外周血ＥＯＳ计数与百分率、血清SIgE水平均显著性升高（Ｐ＜０.０５或Ｐ＜０.０１）；穴位敷贴和激素治疗均可显著性降低模型小鼠ＥＯＳ计数与百分率及SIgE水平（Ｐ＜０.０５），两组作用相仿（Ｐ＞０.０５）。而ＰＢＳ组假治疗对模型小鼠外周血ＥＯＳ计数与百分率及血清SIgE水平均无显著性影响（Ｐ＞０.０５）。 综上所述，中药穴位敷贴治疗过敏性鼻炎的作用可能与其能降低外周血ＥＯＳ值及SIgE水平有关，其确切机制有待进一步探讨。【参考文献】 ［１］Kay A B．Asthma and inflammation［J］．J Allergy Clin Immunol，1991,87(5)：893. ［２］Gutierrez V,Prieto L, Torres V, et al．Relationship between induced sputum cell counts and fluidphase eosinophil cationic protein and clinical or physiologic profiles in mild asthma［J］．Ann Allergy Asthma Immunol，1999,82(2):559． ［３］Sanmugalingham D, DeVries E, Gauntlett R,et al．Interleukin5 enhances eosinophil adhesion to bronchial epithelial cells［J］．Clin Exp Allergy,2000,30(2)：255． ［４］Schuster M, Tschernig T, Krug N，et al．Lymphocytes migrate from the blood into the bronchoalveolar lavage and lung parenchyma in the asthma model of the brown Norway rat［Ｊ］．Am J Respir Crit Care Med，2000，161：558． ［５］Hogan R J, Zhong W，Usherwood E J,et al ．Protection from respiratory virus infections can be mediated by antigen specific CD+4 T cells that persist in the lungs［Ｊ］．J Exp Med，2001，193：981． ［６］Walsh G M．Mechanisms of eosinophil survival and apoptosis［Ｊ］．Clin Exp Allergy，1997，27(2)：4821． ［７］Beauvais F, Micheal T，Dubertret T,et al ．The nitric oxide donors, azide and hydroxylamin,inhibit the programmed cell death of cytokinedeprived human eosinophils［Ｊ］．FEBS Letters，1995，361(3)：229． ［８］Tada T, Okumura K L．Regulation of homocytotropic antibody formation in the rat:Ⅲ. Effect of thymectomy and splenectomy［Ｊ］.Immunol，1971，106：1019． ［９］Lee I H．Cytokine network in the pathogenesis of bronchial asthma implication for therapy［Ｊ］．J R Coll Physicians Lond，1998，32：56．
