红细胞膜渗透脆性降低对白细胞计数的影响
发表时间：2009-06-26 浏览次数：770次
作者：李芳，白洁 作者单位：宁夏回族自治区人民医院检验科，银川 750021
【摘要】 为分析红细胞膜渗透脆性降低对白细胞计数结果的影响，对20例(其中肝病患者18例，新生儿2例)异常白细胞直方图的标本制片染色作显微镜检查、用稀释液洗涤红细胞后再用仪器检测和做红细胞渗透脆性试验等，并同时对这些标本白细胞计数用显微镜和仪器法分别进行检测并分析。结果出现此种异常直方图的白细胞计数结果与显微镜检测法结果的差异有统计学意义(P＜0.001)，仪器法计数结果显著增高，红细胞渗透脆性均显著降低；因此红细胞膜脆性降低可致白细胞计数假性增高，故须再用显微镜检测法作白细胞计数。
【关键词】 红细胞膜 脆性 直方图 白细胞计数
血液分析仪的应用，使血液分析实现了自动化，且方便、客观、快捷，但有一定的局限性，对一些罕见的、不典型有干扰的结果仍无法鉴别。笔者在CD-1700血液分析仪上作常规分析时，发现一些标本出现异常白细胞直方图，其计数又明显超出正常参考值范围，且红细胞渗透脆性均显著降低.本文对这一现象进行了分析。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 标本来源
2003年1月—2005年12月我院住院患者20例，其中肝病患者18例，新生儿患者2例。
1.1.2 CELL-DYN 1700型血液分析仪(ABBOTT公司产品)；Coulter MAXM血液分析仪(Beckman-Coulter公司产品)。
1.1.3 稀释液、清洗液、溶血素和鞘液等均为进口配套试剂。
1.2 方法
对出现异常直方图的抗凝血标本，再分别作下列试验：制片染色作显微镜检查；用稀释液洗涤红细胞3次后，1∶1稀释上机检测；红细胞渗透脆性试验［1］；显微镜检测法白细胞计数；同时把这些标本在Coulter MAXM血液分析仪检测。
1.3 统计学方法
将仪器法与显微镜检测结果作配对t检验。
2 结果
17例血标本在CELL-DYN 1700型血液分析仪上显示白细胞频数分布图仅在35fl线左侧出现一匕首样峰(图1a)，3例因感染使中性粒细胞相对较高，除出现上述异常情况外，还在300fl右侧出现一扁平峰(图1b)。
显微镜检查未发现有巨大血小板、血小板聚集和有核红细胞，白细胞计数检测结果显著低于仪器法(由于仪器检测结果重复性差，每个标本取其3次平均值)；显微镜白细胞分类时，淋巴细胞相对计数明显减少，中性粒细胞相对计数明显增多(P＜0.01)，见表1。表1 两种方法检验结果比较(略)
另外，用稀释液洗涤和稀释红细胞，再在血液分析仪上检测，上述异常情况依然出现。20例标本的红细胞膜渗透脆性实验结果均小于正常值范围。开始溶血＜3.2g/L，完全溶血＜2.4 g/L(正常参考值：开始溶血：4.0～4.4 g/L，完全溶血：3.2～3.6 g/L)。
Coulter MAXM血液分析仪检测结果，20例中有16例仪器没有给出WBC结果，仪器分析中显示“VOTE OUT”(表决失败)，另外4例结果与显微镜目测法结果差异也较明显。
3 讨论
出现上述异常直方图的干扰原因主要有试剂因素、血液中存在巨大血小板、有核红细胞和冷球蛋白，还有红细胞碎片［2］。试剂因素，因使用的是进口配套试剂，背景计数结果允许，且正常对照标本均无此类异常现象，排除试剂干扰。血涂片染色，显微镜检查，也未发现巨大血小板、聚集血小板和有核红细胞；用稀释液洗涤和稀释红细胞后，再上机检测，仍然出现上述异常情况，排除血浆中的冷球蛋白干扰。
这些标本中的红细胞渗透脆小于正常值范围，说明红细胞的刚性指数增加，耐溶血素的溶血作用加强，短时间内溶血素不能将红细胞膜完全溶解，结果仪器把这些红细胞碎片误当成白细胞而计数，因其碎片体积小，故在35fl线左侧出现尖峰；又因碎片数量多，相比之下，中性粒细胞比例甚少，故直方图上基本看不出中性粒细胞峰，分类以淋巴细胞为主。
Coulter MAXM血液分析仪上的检测结果，也进一步证实是红细胞碎片的干扰。在Coulter MAXM血液分析仪上，其中16份标本的WBC检测结果均未给出，通过“F7”查看该仪器对每个标本的三次检测结果逐次增高，是因为在仪器计数白细胞这段时间内，溶血素对红细胞膜的作用，随着时间的延长，红细胞碎片越来越小、越来越多，且其碎片体积又在仪器设定的计数范围内，故三次计数中，一次比一次多，且第一次与第三次相差较大。因为该仪器检测白细胞时，每份标本在同一个通道内依次作三次计数，若三次结果一致或相近，则仪器显示结果，若三次结果重复性差，仪器则不给出结果而显示“VOTE OUT”。
本文20例中的18例肝病患者均为高胆红素血症，同时阻塞性黄疸患者的红细胞膜渗透脆性也降低［3］，出现上述异常直方图的原因并非是由黄疸引起［4-6］：因为，其一，并非所有高胆红素血标本都出现这种异常直方图，且白细胞结果偏差大小与血浆胆红素高低无相关性；其二，并非所有出现这种异常直方图的患者均为高胆红素血症，其中2例新生儿血浆胆红素结果均正常；其三，若是黄疸干扰，洗涤后上述干扰应该去除，即使不洗涤，仪器计数时，血液经大量稀释，也不足以造成影响。
因此，可以判断出现上述异常结果是由红细胞膜脆性降低、短时间内溶血素不能将红细胞膜彻底溶解，导致WBC结果假性增高，而红细胞膜脆性降低很可能是由于患者体内代谢异常或新生儿酶系统不健全引起脂质代谢紊乱［2，7-8］，而脂质代谢紊乱可使红细胞膜脂质更新障碍，使其红细胞膜中磷脂减少，胆固醇和胆固醇/磷脂比增高，从而使阳离子表面活性剂(如季胺盐表面活性剂)对结构发生改变的红细胞膜上的磷脂溶解能力减弱，磷脂与红细胞膜上的蛋白分离作用也减弱，最终导致红细胞膜不能被溶血剂破坏，造成白细胞计数的假性增高。
血液分析自动化，其优点是简便、客观、快捷、重复性好，但对一些有干扰的标本仍存在一定的缺陷。血液分析仪不能完全取代人工操作，它可作为一种筛选工具。对血液分析仪检测时出现的一些可疑、有干扰的结果，检验者一定要进行人工检测法复检，否则会得出不准确的检验结果。
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