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《血液病学》

妊娠期高血压病患者血栓标志物及血小板活化状态研究

发表时间:2009-07-30  浏览次数:710次

 

作者:丁芳林,刘 丛 , 李丽文,李卓成    作者单位:深圳市第二人民医院检验科, 深圳 518035

【摘要】  目的 检测妊娠期高血压病患者血栓标志物D二聚体 (DD)、血管性血友病因子vWF,抗凝血酶活性(AT:A)、纤溶酶原活性(PLG:A)水平及血小板活化状态标志物血小板α颗粒膜糖蛋白(CD 62P)及溶酶体膜糖蛋白(CD 63)的表达,探讨其与妊娠期高血压病发生发展的关系。方法 采用免疫比浊法、发色底物法和流式细胞术分别测定66例妊娠期高血压病患者(其中妊娠期高血压20例,轻度子痫前期24例,重度子痫前期和子痫22例)和24例正常晚期孕妇(正常晚孕组)及30例正常非孕妇女(正常非孕组)外周血中的DD、vWF 、AT:A、PLG:A水平和CD 62P及CD 63的表达。结果 正常晚孕组DD、CD 62P和CD 63的表达均明显高于正常非孕组(P<0.05及0.01),vWF、AT:A和 PLG:A表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。妊娠期高血压病组DD水平和CD 62P、CD 63的表达均明显高于正常晚孕组(P<0.05及0.01), AT:A水平明显低于正常晚孕组(P<0.05),妊娠期高血压病患者PLG:A与vWF水平与正常晚孕组比较,差异无统计学意义(P>0.05);轻度子痫前期患者与重度子痫前期和子痫患者各标志物分别与正常晚孕组和妊娠期高血压病组比较,差异有统计学意义和非常显著性意义(P<0.05及0.01)。相关分析DD水平与vWF水平无相关性(P>0.05),而 CD 62P、CD 63之间呈正相关(r=0.767,P<0.01).结论 妊娠期高血压病患者均存在血管内皮细胞损伤,血小板明显活化,血液呈高凝和血栓前或血栓状态。DD、vWF、AT:A、PLG:A、CD 62P、CD 63水平在一定程度上可反映妊娠期高血压病患者病情程度,检测其水平对其诊断、观察病情及防止血栓及子痫的发生均有意义。

【关键词】  高血压; 妊娠; 血栓标志物; 血小板

 Study on the Makers of Thrombus and Platelet Activation in Patients of Hypertensive Disorder Complicating Pregnacy

    DING Fang lin, LIU Cong, LI Li Wen , LI ZHONGcheng

    (Department of Laboratory ,Shenzhen Second People’s Hospital, Shenzhen, 518035,China)

    Abstract: Objective  To explore the relationship between the changes levels of makers of thrombosis ( DD,vWF,AT:A,PLG:A)and platelet membrance glycoprotein(CD 62P,CD 63) in patients of hypertensive disorder complicating pregnacy(HDCP).Methods  The level of platelet membrance glycoprotein (CD 62P、CD 63) were determined by flow cytometry (FCW),DD and vWF were determined by immunol nephelometry, AT:A,PLG:A determined by chromogenic substrate analysis, 66 cases of patients and 24 cases of normal late pregnancy women,30 cases of nonpergnacy women were determined. Results  The levels of DD ,CD62P,CD63 in the plasma of normal late pregnancy women  were significantly higher than that in nonpergnacy women( P<0.05 and <0.01), but the levels of vWF,AT:A  and PLG:A were no difference between that in nonpergnacy women (P>0.05). The levels of DD ,CD 62P,CD 63 in the plasma of gestational hypertension patients were significantly higher than that in normal late pregnancy women (P<0.05 and <0.01), but the levels of AT:A was significantly lower than that in normal late pregnancy women (P<0.05), the levels of vWF and PLG:A  in gestational hypertension patients  were no difference between that in normal late pregnancy women (P>0.05). The levels of all makers in  the patients  were higher or lower than that in light preeclampsia patients and  severe preeclampsia and eclampsia patient patients (P<0.05and0.01). The levels of DD was no correlated with  vWF,P<0.05), the levels of CD 62P was correlated with  CD 63(r=0.767,P<0.01).Conclusion  HDCP patients usually exist vascular endothelial injury ,platelet activation and hypercoagulability and prethrombotic state or thrombotic state , The plasma level of DD,vWF,AT:A,PLG:A,CD 62P and CD 63 may reflect  changes in  HDCP patients to a certain extent , the research confirmed that the detection of the markers was useful for diagnosis and monitoring the clinical course to HDCP patients avoiding thrombus and eclampsia occurrence.

    Key words:  Hypertension; Pregnacy; Thrombus maker; Platelet

    妊娠期高血压病(hypertensive disorder complicating pregnacy ,HDCP)是严重危害母婴健康的疾病, 易发生严重的全身性并发症,如DIC、胎盘早剥和胎儿宫内发育迟缓(IUGR)等,因机制复杂,其病因至今尚未明了。近年来有研究显示HDCP与患者体内血栓前状态、血管内皮损伤、细胞黏附分子的异常表达、血小板活化功能增强及抗凝功能减退等因素密切相关[1]。我们通过检测患者血栓标志物水平变化和血小板活化状态标志物的表达来探讨其与HDCP发生发展的关系。

    1  对象与方法

    1.1  研究对象  选取2007年1月至2008年10月在我院产科住院的妊娠期高血压病患者66例,均排除原发性高血压、肾性高血压以及其它急性感染性并发症者,并按照《妇产科学》第6版诊断标准分为妊娠期高血压20例,轻度子痫前期24例,重度子痫前期和子痫22例。孕期平均38.8周,平均年龄27.6岁,随机选择同期正常晚期妊娠24例为对照组,孕期平均38.3周,平均年龄26.8岁。入选两组对象在年龄、平均孕周等方面差异均无显著性,均未使用抗高血压、抗凝等药物。另随机选取30例正常非孕妇女,均来自我院健康体检者,平均年龄27.2岁.

    1.2  标本采集  各组均静脉采血2.8 ml,1.8 ml注入含有0.2 ml 109 mmol/L枸橼酸钠试管中轻轻混匀, 3 000 r/min 离心10 min,用于抗凝血酶活性(AT:A)、纤溶酶原活性( PLG:A)、D二聚体(DD)、血管性血友病因子(vWF)测定,1ml注入含有20 μl 10%EDTAK2的试管中,轻轻混匀,用于血小板α颗粒膜糖蛋白(CD 62P)、溶酶体膜糖蛋白(CD 63)测定。

    1.3  方法

    1.3.1  AT:A、 PLG:A采用发色底物法, DD、 vWF采用免疫比浊法,试剂盒由美国DADE BEHRING公司提供,日本东亚Sysmex  CA6000全自动血栓止血分析仪测定,严格按试剂盒及仪器说明书操作。

    1.3.2  CD 62P、CD 63采用流式细胞术(FCM),美国Beckman Coulter EPICSXL型流式细胞分析仪测定,试剂由美国Beckman Coulter公司提供。 1 ml血室温下离心(800 r/min)分离富含血小板的血浆,1%的多聚甲醛固定后,用异硫氰酸荧光素(FITC)标记CD 62P、CD 63单克隆抗体CD 62P FITC、CD 63 FITC。采用流式细胞分析仪计数1万个血小板测定CD 62P、CD 63的表达。另取FITC标记的IgG即IgGFITC作阴性对照。用LYSYSII软件读取和分析,结果以平均荧光强度(mean fluorescenceintensity ,MFI)(单位:道数 Mnx)表示。

    1.4  统计学处理  各组计量数据用均数±标准差表示,采用SPSS 11.0统计软件包进行方差分析及t 检验及直线相关分析。

    2  结    果

    2.1  正常晚孕组DD、CD 62 P和CD 63的表达均明显高于正常非孕组(P<0.05及0.01),vWF、AT:A和 PLG:A水平差异无统计学意义(P>0.05)。妊娠期高血压病组DD水平和CD 62P、CD 63的表达均明显高于正常晚孕组(P<0.05及<0.01), AT:A水平明显低于正常晚孕组(P<0.05);妊娠期高血压患者PLG:A与vWF水平与正常晚孕组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。轻度子痫前期患者与重度子痫前期和子痫患者各标志物分别与正常晚孕组和妊娠期高血压组比较,差异有统计学意义和非常显著性意义(P<0.05及<0.01)。见表1。表1 各组血中血栓标志物水平和血小板活化指标表达变化 

    2.2  各试验指标的相关分析:66例妊娠期高血压病患者的DD水平与vWF的表达水平无相关性(P >0.05), 而 CD 62P、CD 63之间呈正相关(r=0.767,P<0.01)

    3  讨    论

    DD可作为血栓形成的重要分子标志物,是继发性纤溶亢进的特有指标。本研究结果表明正常晚期孕妇DD水平即明显高于正常非孕组, 妊娠期高血压病组明显高于正常晚孕组,轻度子痫前期患者的水平比妊娠期高血压患者水平及重度子痫前期和子痫患者的水平比轻度子痫前期患者水平均明显增高。表明患者存在血管内皮损伤,胎盘缺血等变化,启动继发性纤维蛋白溶解系统来清除血栓,使子宫内膜可以再生与修复。随着病情的加重,其水平不断升高[2].

    vWF只在血管内皮受损部位受凝血酶的刺激后由内皮细胞的WeibelPalade小体中释放,目前被当作一种血管内皮细胞损伤和血栓标志物。作为一种黏附蛋白它能介导血小板与血管基底膜的结合,直接参与血栓的形成。由于患者的血管内皮细胞损伤,暴露出的内皮基底膜和胶原蛋白,使血小板黏附聚集,启动了凝血机制,血浆中的凝血酶原被激活为凝血酶的含量增加,vWF水平随之增加,随着妊娠期高血压疾病病情的加重,其水平也明显升高。表明内皮损伤参与了妊娠期高血压疾病的发生发展,损伤程度反映了病情的轻重[3]。

    抗凝血酶(AT)的主要作用是使抑制或灭活各种有活性的凝血因子、血小板聚集和释放反应等。在生理条件下,纤溶酶原(PLG)转化为纤溶酶(PL),清除机体内形成的纤维蛋白,机体通过抗纤溶机理,使纤溶和抗纤溶达到动态平衡[5]。本研究结果表明妊娠期高血压患者AT活性比对照组有显著性下降,随着病情的发展  AT:A和 PLG:A活性均明显下降。说明妊娠期高血压病患者随着病情的发展,其抗凝能力逐渐下降, 凝血活性增强,纤维蛋白形成增多,纤溶活性代偿性增强,纤维蛋白降解增多,内皮细胞的严重损伤激活了内外源性凝血途径,使凝血酶大量生成,同时也消耗了大量的AT,使其活性显著下降,而且血管内皮的损伤也使其生成障碍[4]。

    CD 62P属选择素家族的黏附分子,定位于血小板α颗粒和血管内皮细胞的WeibelPalade小体内,当血小板和内皮细胞受到炎症、损伤等刺激后表达显著增加。CD 63是一种α颗粒膜糖蛋白,血小板活化时可随脱颗粒反应而表达在血小板表面。 CD 62P和CD 63是血小板活化或血栓形成的特异标志, 同时它们还能介导中性粒细胞与内皮细胞黏附造成的血管内皮损伤。妊娠期高血压病患者体内有大量的内皮损害因子(氧自由基、过氧化脂质)产生,导致血管内皮损伤,激活凝血系统,使大量血小板黏附、聚集而活化,血液中处于自然活化的血小板比例增多,其释放较多的活性物质及血栓素(TXA),极易形成血栓[6]。本研究结果显示血小板CD 62P和CD 63表达随着病情的加重而逐渐增高,且每两组间差异均有非常显著性意义。说明正常妊娠时孕妇体内就有血小板的激活且随着病理妊娠的加重表达就越强。活化的血小板又可以通过vWF的桥联作用黏附于受损血管壁使血管变得更窄,使组织缺血缺氧,刺激内皮素的进一步的合成与分泌,加重病情,形成恶性循环,甚至造成患者血栓形成、DIC、IUGR等严重后果。

    综合上述,在妊娠期高血压病发生发展过程中,血管内皮细胞损伤与功能不全,并由此引起血小板活化、血液高凝和血栓前或血栓状态;凝血机制的改变,起着关键性作用。有效地监测DD、vWF、AT:A、PLG:A、CD 62P、CD 63水平对临床妊娠期高血压疾病的诊断、观察病情及合理用药(如抗凝,抗血小板等)以缓解或延迟患者病情发展,防止血栓和子痫的发生均有重要意义。

【参考文献】  [1] 郑媛媛,崔桂荣. 子痫前期的凝血功能变化[J].北京医学,2007,29(4):238240.[2] 凌婉文,林建华,林其德,等. 妊娠期高血压疾病凝血相关指标的变化[J]. 上海交通大学学报医学版, 2008,28(1):7779.[3] RUGGERI ZM. Structure of von Willebrand factor and its function in platelet adhesion and thrombus formation [J] . Best Pract Res Clin Haematol, 2005,16:257259.[4] 叶跃红,李兴禄.抗凝血酶III活性在几种易栓症疾病中的研究 [J].重庆医科大学学报,2004,29(2):208210.[5] 郑磊,王前,孙德华,等. 妊娠期高血压疾病患者血栓前状态指标的检测及其临床意义[J] .实用妇产科学杂志, 2005,19(6):356358[6] KONIJNENBERG A,STOKKERS EW,VANDERPOST JAM,et al .Extensive platelet activation in preeclampsia comparedwith normal pregnancy :enhanced expression of cell adhesion of cell adhesion molecules [J].Am J Obstet Gyneacol , 2004,176:461463.

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