肝硬化患者血清抗心磷脂抗体的含量变化及其临床意义

　　作者：孙剑经 作者单位：河北北方学院附属第一医院消化科 075000

　　【摘要】 目的：探讨肝硬化患者血清中抗心磷脂抗体(ACA)的含量变化及其与肝硬化病情的演变关系。探索抗心磷脂抗体(ACA)与Child-Pugh分级和普通肝功能及肝纤维化指标间的联系与影响。方法：应用酶联免疫吸附法(ELISA)分别对不同分级的肝硬化患者血清中抗心磷脂抗体(ACA)的含量进行了测定;用酶法测定了ALT、AST与胆汁酸并计算AST/ALT值;用Peariman和Lee改良法测定血清胆红素;用溴甲酚氯比色法测定血清白蛋白;用放射免疫分析法测定透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原氮端肽(PⅢNP)、层粘连蛋白(LN)与Ⅳ型胶原(Ⅳ.C);并测定了凝血酶原时间(PT)与血小板计数等相关指标。结果：肝硬化患者血清抗心磷脂抗体(ACA)的阳性率Child-Pugh A、B、C三级逐级升高,随肝硬化病情加重而增加;血清胆红素和凝血酶原时间(PT)与ACA呈显著正相关(P<0.01),血清白蛋白与血小板计数与ACA呈显著负相关(P<0.01); ALT、AST、AST/ALT、胆汁酸与ACA相关无显著性(P>0.05);ALT、AST、AST/ALT对ACA的影响有显著性(P<0.01),以AST/ALT为最强;透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原氮端肽(PⅢNP)、层粘连蛋白(LN)及Ⅳ型胶原(Ⅳ.C)与ACA均呈显著正相关(P<0.01,P<0.05);HA、PⅢNP、LN 、Ⅳ.C四者中，只有HA与PⅢNP对ACA的影响有显著性(P<0.01),以HA为最强。结论：肝硬化患者血清抗心磷脂抗体(ACA)的阳性率随病情的严重而升高;抗心磷脂抗体(ACA)与Child-Pugh分级和普通肝功能及肝纤维化三者间存在着一定的联系与影响;抗心磷脂抗体(ACA)在肝硬化患者中可能有一定的临床意义。

　　【关键词】 抗心磷脂抗体; 肝硬化;临床意义

　　Change of Content and Clinical Significance

　　of Serum Anticardiolipin Antibodies in Cases with Hepatic Cirrhosis.

　　SUN Jian-jing, XU San-rong, SUN Da-yu.

　　The First Affiliated Hospital, Hebei North University, Zhangjiakou, 075000 China

　　【ABSTRACT】 Objective： To investigate the change of content and clinical significance of serum anticardiolipin antibodies(ACA) in cases with hepatic cirrhosis and its relationship between hepatic cirrhosis and the condition, and the association with and effect on ACA classification of Child-Pugh and indices of regular hepatic functions and its fibrosizing. Methods： The serum ACA levels were determined, by ELISA method, in different classifications of cirrhotic cases. Serum ALT,AST,and bile acid were observed by Enzyme assay and the ratio of AST/ALT was worked out. Serum bilirubin was measured by Peariman and Lee method. Serum albumin was tested by Bromphenol assay and was simultaneously measured to Hyaluronic Acid(HA), Type Ⅲ Procollagen(PⅢNP), Laminin(LN) and Type Ⅳ Collagen(Ⅳ.C) by RIA. Meanwhile, prothrombin Time(PT) and platelet count were measured and so on. Results： The level of serum ACA was raised increasingly in different cirrhotic cases with different classifications of Child-Pugh, according to severity of the condition. There was a significant positive correlation between serum bilirubin and prothrombin time(PT) and ACA(P<0.01), and asignificant negative correlation between serum albumin and platelet count and ACA(P<0.01). There was no significant correlation bewteen serum ALT, AST, AST/ALT and bile acid with ACA (P≥0.05) and ALT,AST and AST/ALT had a significant effect on ACA (P<0.01),the most significant being AST/ALT. There was a significant positive correlationamong HA,PⅢNP,LN and Ⅳ.C, with ACA; among the above-mentioned four indices,only HA and PⅢNP had a significant effect on ACA (P<0.01),the most significant one being HA. Conclusion：The level of serum ACA in cases with hepatic cirrhosis was raised increasingly with the severity of the condition. CAC had some relationship with and effect on the three indices,i.e. the classification of Child-Pugh, regular hepatic functions and its fibrosizing. The ACC might have some clinical significance forcases with hepatic cirrhosis.

　　【KEY WORDS】 anticardiolipin antibody; hepatic cirrhosis; clinical significance

　　本研究用ELISA法测定了Child-Pugh分级下的肝硬化患者血清抗心磷脂抗体(ACA，包括IgG、IgM、IgA)的含量，用酶法测定了ALT、AST与胆汁酸并计算AST/ALT值;用Peariman和Lee改良法测定血清胆红素;用溴甲酚比色法测定血清白蛋白;用放射免疫分析法测定透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原氮端肽(PⅢNP)、层粘连蛋白(LN)与Ⅳ型胶原(Ⅳ.C);并测定了凝血酶原时间(PT)与血小板计数等相关指标，旨在探讨肝硬化患者血清中ACA含量的变化及其与肝功能受损程度及肝纤维化等相关指标间的联系与影响。

　　1 临床资料

　　1.1 一般资料 对2001.10～2002.5月复旦大学华山医院消化科的96例肝炎后肝硬化住院患者进行了前瞻性研究，其中，男77例，女19例，男∶女=4.05∶1;年龄范围36～62岁，平均年龄(49±6.37)岁，年龄、发病高峰与性别构成比基本与肝硬化流行病学相符[1]。按Child-Pugh等级分类，A级25例(男18例，女7例)，B级48例(男38例，女10例)，C级 23例(男21例，女2例)分成三组，A、B、C各级例数构成比分别是26%，50%和 24%，服从正态分布。

　　1.2 抗心磷脂抗体(ACA)的检测方法与阳性判定 ACA(IgG、IgM、IgA)检测试剂盒由上海德波生物技术有限公司提供，采用ELISA方法，操作步骤严格按说明书要求进行。用酶标仪在490nm波长读取吸光值(A)，ACA结合指数(BI)按下式计算：

　　结合指数(BI)=标本吸光值(A)-空白吸光值(A)正常吸光值(A)-空白吸光值(A)

　　正常参考值ACA结合指数(BI)小于2.2，判定标准以IgG、IgM、IgA三者中只要有一项(BI)值大于2.2即为阳性。

　　1.3 肝功能与肝纤维化指标的检测方法 ALT、AST用酶法测定，试剂盒由美国CENTRONIC公司提供;血清胆红素用Peariman 和Lee改良法测定，试剂由上海长征公司提供;胆汁酸用酶法测定，试剂由日本旭化成工业株式会社提供;血清白蛋白用溴甲酚氯比色法，试剂由美国CENTRONIC公司提供。所有检测均系肝硬化患者必检项目，操作正规，数据可靠。

　　1.4 统计学方法将各组数据依次输入电脑，应用SPSS8.0统计软件对数据进行处理，采用均数、t检验、R×C表卡方检验，双变量相关分析，线性与Logistic回归分析等方法分析数据模型并绘出统计图表。

　　2 结果

　　2.1 ACA在各组内的检测结果 肝硬化患者血清ACA(IgG、IgM、IgA)含量在Child-Pugh A、B、C三级内逐级升高，表明ACA随肝硬化严重程度而进行性增加(表5)，其中，各级内灵敏度递增的顺序是IgA、IgM、IgG(详见表1～表4)，即每级均以IgG灵敏度为最高(P<0.01)。在A级内阳性率差异无显著性(χ2=1.661,ν=3,P=0.646>0.01);B级、C级内阳性率差异均有显著性(χB2=16.087,χ2C=11.634,ν=3,P=<0.01)，全部病例阳性率差异均有显著性(χ2=34.00,ν=3,P=0.01);双变量相关分析显示血清胆红素(r=0.492,P≤0.01)和凝血酶原时间(PT)(r=0.296,P≤0.01)与ACA呈显著正相关;血清白蛋白(r=-0.388,P≤0.01)和血小板计数(r=-0.193,P≤0.01)与ACA呈显著负相关。线性与Logistic回归分析表明，血清胆红素与血小板计数对ACA均有显著性影响(P<0.01 )。

　　2.2 ACA与肝功能的联系与影响 双变量相关分析表明，ALT、AST、AST/ALT、胆汁酸与ACA相关无显著性(P≥0.05)，而线性与Logistic回归分析显示对ACA影响的递增顺序是AST、胆汁酸、ALT、AST/ALT，即AST/ALT的相对危险度最大，成正方向，但只有ALT、AST、AST/ALT对ACA的影响有显著性意义(P<0.01)。

　　2.3 ACA与肝纤维化指标间的作用 双变量相关分析显示，透明质酸(HA)(r=0.559,P<0.01)和Ⅲ型前胶原氮端肽(PⅢNP)(r=0. 337,P<0.01)与ACA呈显著正相关;层粘连蛋白(LN)(r=0.225,P<0.05)与Ⅳ型胶原(Ⅳ.C)(r=0.253, P<0.05)与ACA也呈显著正相关。而线性与Logistic回归分析显示对ACA影响的递增顺序是LN、 Ⅳ.C、PⅢNP、HA，即HA的相对危险度最大，成正方向，但只有HA与PⅢNP对ACA的影响有显著性意义(P<0.01)。 表1 A级肝硬化患者ACA结果表2 B级肝硬化患者ACA结果 表3 C级肝硬化患者ACA结果表4 全部肝硬化患者ACA结果表5 96例肝硬化患者Child-Pugh分级下ACA阳性率结果

　　3 讨论

　　抗心磷脂抗体(AntiCardiolipin Antibody,ACA)属于抗磷脂抗体(Antiphospholipid antibody,APA)系列。APA系自身抗体家族，分为狼疮抗凝物(Lupus-anticoagulant,LAC)和抗心磷脂抗体(Anticardiolipin antibody,ACA)两大类[2]。APA最常见于自身免疫性疾病，如结缔组织病，某些感染性疾病，药物诱导性疾病也与习惯性流产(RSA)，血小板减少，血栓形成等症密切相关[3]。ACA是一组异质性抗体，有IgG、IgM、IgA三类，以单一或混合形式存在，它的靶物质是心磷脂。根据ACA与临床的关系，将其分为自身免疫(自身免疫性疾病产生)和非免疫型(感染性疾病产生)ACA[3]。ACA与某些疾病的凝血系统改变，血小板减少等密切相关，并与疾病的发生机理有关联，并发现IgM型ACA患者易患血栓症明显高于 IgG型ACA患者，而在感染性疾病中则多为 IgG型ACA[4]，我们的结果与其一致。我们研究发现，肝硬化患者血清ACA阳性率随病情的加重而升高，其凝血酶原时间(PT)与ACA呈显著性正相关，而血小板计数与ACA呈显著性负相关，提示随着肝硬化病情的进展出现血小板数目的减少与凝血酶原时间(PT)的延长，与上述观点基本一致，也与当APA阳性时在体外表现为凝血酶原时间(PT)和部分凝血酶原时间(APTT)的延长[5]相吻合。典型的ACA常见于自身免疫性疾病，并依赖于某种血浆蛋白的存在，伴有动静脉血栓形成，高滴度的IgG型ACA被认为与血栓形成具有很强的相关性，但目前尚未发现抗体形成与血栓之间的关系，因不同亚型具有不同的机制[6]。我们的研究也未发现高ACA肝硬化患者其血栓性并发症的发生率明显增高。雷鸣、王鸿利[7]等认为肝脏疾病所致的血栓性并发症临床上并不常见，因它的发生和发展与血管管状内皮细胞的损伤、血液成分的改变和血液流变学的异常等多种因素有关，常见的有门静脉系统的肝静脉血栓(Budd-Chiari综合征)与重症肝病合并DIC等，国内外报道发生率很低。近年来，APA与慢性肝病的关系逐渐引起重视，但国外主要集中于酒精肝与丙肝病毒感染等方面[8～10]，国内高普均[11]等的研究表明，乙型肝炎与乙肝后肝硬化患者血清中APA含量明显升高，提示HBV感染与APA相关。其ACA检出率与我们的结果大致相当。我们的研究表明，随着肝功能受损程度的加重，肝细胞破坏的越重，ALT、AST、血清胆红素就越高，则ALT、AST、AST/ALT对ACA的影响就越有显著性，且血清胆红素与ACA呈显著正相关，可能是肝细胞诱导新的抗原决定簇产生，从而生成了包括ACA在内的多种自身抗体[12]，肝病变过程中，肝细胞及内皮细胞可能通过表达某些粘附分子来影响免疫系统的功能，从而加重了自身免疫反应的发生[13]。另外，我们的研究还发现，肝纤维化指标与ACA之间存在着一定的相关与影响，但详细的机制也不清楚，需要进一步研究。

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