凉山虫草与冬虫夏草中多糖的含量比较研究

冬虫夏草为麦角菌科冬虫夏草菌Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.寄生在鳞翅目蝙蝠蛾科昆虫幼虫体上的幼虫尸体及子座的复合体川，具有补肾益肺、止血化痰之功效，在临床上常用于治疗久咳虚喘、阳痞遗精、劳嗽咯血、腰膝酸软等肺肾疾病。由于其严格的寄生性和对生态地理环境的特殊要求(海拔3 000--5 000 m高寒地区)，野生资源十分稀少，供需矛盾严重，使得冬虫夏草的替代资源、替代品研究日益受到人们的重视，成为新的研究热点。凉山虫草为麦角菌科真菌凉山虫草Cordyceps liangshanensis Zang,Liu et Hu寄生在鳞翅目昆虫幼虫体上幼虫尸体及子座的复合体，为我国四川凉山州和云南昭通市一带特有的虫草资源，与冬虫夏草功效相似，在民间已有较长的药用历史，1992年被收载人四川省中药材标准川。凉山虫草分布海拔较低，对生态环境要求不高，资源量丰富，极有可能发展成为一种优良的冬虫夏草替代资源。有关凉山虫草的药材性状、显微鉴别、薄层色谱鉴别等研究已有报道，但有关化学成分和分析的报道很少。为此，本研究选择虫草多糖为评价指标，进行凉山虫草与冬虫夏草的多糖含量比较研究，以期为进一步开发和利用凉山虫草奠定基础。

1材料与方法

试剂与仪器:葡萄糖为国药集团化学试剂有限公司产品，重蒸苯酚、浓硫酸均为成都科龙化工厂产品，水为超纯水。电子天平(SARTORIUS,BSA 1245),紫外可见分光光度计(上海尤尼柯，U V-2000)。药材:凉山虫草与冬虫夏草药材来源见表1，经四川省食品药品检验所黎跃成主任药师鉴定确认为

2结果

2.1对照品和供试品溶液的制备对照品溶液的制备:精密称取葡萄糖对照品6 mg,置5 m工、容量瓶中，加蒸馏水溶解并定容，即得1.2 mg葡萄糖对照品溶液;供试品溶液的制备:取干燥至恒重的凉山虫草样品工，冬虫夏草样品S1,S2各3份，每份0.1 g.精密称定，各加入蒸馏水20 mL，称重，沸水浴加热4h，冷却至室温，蒸馏水补足重量。过滤，取续滤液，即得供试品溶液。

2.2标准曲线的制备精密吸取上述对照品溶液0.1,0.2,0.4,0.8,1 mL至1 mI离心管中，用蒸馏水补足每管至1 mI，配置成浓度分别为120cg"mL-1,240}g m 、480}g·mL-'、960}g·mL-'、1 200 ug·m L-1的葡萄糖供试品溶液。各吸取0.2 m工至具塞试管中，加人1 mI_6%重蒸苯酚,5 m工、浓硫酸，混匀，室温放置10 min,40 0C水浴15 min，冷却至室温，摇匀，在490 nm处测定吸光度。以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，并求得回归方程:Y=0.0009X+0.6977,r=0.9991，结果表明葡萄糖浓度在120^-1 200}g"mI‘内线性关系良好。

2.3精密度试验取葡萄糖对照品溶液(480}g"mL-`)0.2 mL至具塞试管中，加人1 m工一6%重蒸苯酚，5 mL浓硫酸，混匀，室温放置10 min,40℃水浴15 min，冷却至室温，摇匀，在490 nm处测定吸光度。记录6次测定值，计算RSD为0.9300，说明精密度良好。

2.4稳定性试验按2.1项下制备凉山虫草与冬虫夏草供试品，取供试品溶液0.2 mI，分别在。,2,4,8,12,24 h按2.7项下测定吸光度。计算得凉山虫草RSD为1.9200，冬虫夏草RSD为2.1400，说明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.5重复性试验取干燥至恒重的凉山虫草L1样品6份，每份0.1 g，精密称定，按2.1项下制备供试品溶液，按2.7项下分别测定6份样品吸光度值，测得多糖的平均含量为13.0l mg·g',RSD为2.320.

2.6加样回收试验取干燥至恒重的凉山虫草Ll样品9份，每份0.1 g，精密称定，置具塞试管中，按下表分别精密加如葡萄糖对照品，按2.1项下制备供试品溶液，按2.7项下分别测定含量，计算回收率，结果见表2，平均回收率为100.65 0 o,RSD=3.07%

2.7凉山虫草与冬虫夏草的多糖含量测定取2.1项下制备各供试品溶液0.2 mL至具塞试管中，加人1 mL 6%重蒸苯酚，5 mL浓硫酸，混匀，室温放置10 min,40℃水浴15 min，冷却至室温，摇匀，在490 nm处测定吸光度，3份求平均值，含量测定结果见表3.

3讨论

真菌多糖(如获等多糖、银耳多糖、灵芝多糖等)普遍具有免疫调节、抗肿瘤、抗氧化等广泛的药理活性，成为近年来药用真菌化学成分研究的热点。现代药理学研究证明，虫草多糖具有增强机体免疫、抗肿瘤、抗肝损伤、降血糖以及防辐射、抗氧化等多种药理活性，是虫草类真菌的主要活性成分之一，检测此类成分含量的高低对虫草质量的评价有一定的意义仁。从测定结果看，凉山虫草中含有丰富的多糖类成分，但含量低于冬虫夏草。近年来由于冬虫夏草独特的功效以及人们健康保健意识的提高，国内外尤其是国际市场对冬虫夏草的需求量持续上升，供需矛盾日益严重，冬虫夏草价格不断飘升，至2012年1月，国内中药材市场冬虫夏草价格已达到15万元/kg<3 500条)。在如此高昂的价格和野生资源日益枯竭的现状下，冬虫夏草的替代品研究显得十分重要。从虫草属真菌中寻找与之亲缘关系相近的品种，开发冬虫夏草替代资源未来的发展方向。凉山虫草与冬虫夏草菌同为麦角菌科虫草属，寄主同为鳞翅目昆虫，二者亲缘关系相近、功效相似，极有希望发展成为一种优良的冬虫夏草替代资源。但到目前为止，凉山虫草的研究工作还刚刚起步，是否能成为冬虫夏草替代品，尚需进行系统的化学成分及药理药效学等方面的研究工作。

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