原发性胆囊癌CD44v6、Survivin的表达与临床病理的相关性

　　作者：谷化平    作者单位：中国人民解放军第251医院 病理科，河北 张家口 075000) 　　【摘要】  目的 探讨CD44v6和Survivin蛋白在原发性胆囊癌组织中的表达与癌组织类型、病理分级和转移状况的关系，以及CD44v6与Survivin表达之间的相关性。方法 应用免疫组化方法检测52例胆囊腺癌、20例胆囊腺瘤和20例慢性胆囊炎组织中CD44v6和Survivin表达水平。结果 胆囊癌组织中CD44v6和Survivin阳性表达率分别为80.8%(42/52)和67.3%(35/52)，均明显高于胆囊腺瘤(分别为45.0%和30.0%，P<0.05)，并随着胆囊癌的分化程度减低、病理分级增高和转移而明显增高(P<0.05)。同时，CD44v6表达与Survivin表达呈明显正相关(χ2=5.19，P<0.05)。结论 CD44v6和Survivin均是胆囊癌高度恶化和预后不良的重要指标。胆囊癌CD44v6表达与Survivin表达可能具有协同作用。

　　【关键词】  胆囊肿瘤;CD44v6;Survivin;免疫组织化学

　　Relationship between expressions of CD44v6， Survivin protein and their clinicopathologic significance in primary gallbladder carcinomaGU Huaping. Department of Pathology， the 251st Hospital of PLA， Zhangjiakou 075000Abstract Objective To study the relationship of CD44v6 and Survivin protein expression with histological type， pathological grading and metastasis. Methods Immunohistochemical method was used to investigate the expression of CD44v6 and Surviving protein in 52 cases of gallbladder carcinoma， 20 of gallbladder adenoma and 20 of chromic cholecystis. Results The positive rate of CD44v6 and Survivin was 80.8%(42/52) and 67.3%(35/52)， which was positively correlated with the histological type， pathological grading and metastasis of gallbladder carcinoma (P<0.05) and higher than that in gallbladder adenoma (CD44v6 45.0% and Survivin 30.0%， respectively). Expression of CD44v6 was positively correlated with the expression of Survivin (χ2=5.19， P<0.05). Conclusion CD44v6 and survivin may be important biologic markers to evaluate the malignancy and prognosis of gallbladder carcinoma. There may be some extent coordinated function between them.

　　Key words gallbladder neoplasms; CD44v6; Survivin; immunohistochemistry

　　恶性肿瘤的发生发展是一种复杂的多阶段过程，与多个基因和多种分子水平变化密切相关。我们应用免疫组化方法对原发性胆囊癌组织进行CD44v6和Survivin蛋白检测，探讨这两种蛋白表达与胆囊癌临床预后性指标的关系及两种蛋白表达之间的相关性，为判断患者预后提供客观的参考指标。

　　1 资料和方法

　　1.1 一般资料 取我院2000年1月至2009年1月间手术切除并经病理证实的胆囊腺癌标本52例。其中男23例，女29例;平均年龄(51.8±13.6)岁(25～77岁)。病理组织学分级：高分化腺癌32例，低分化腺癌20例;伴有淋巴结和脏器(淋巴结、肝脏、胰腺、腹膜及大网膜)转移者29例，未转移者23例。取同期手术的胆囊腺瘤20例和慢性胆囊炎20例作为对照。标本经10%福尔马林固定，石蜡包埋，4μm厚连续切片。

　　1.2 实验方法

　　1.2.1 试剂：鼠抗人CD44v6和Survivin单克隆抗体和LSAB试剂盒购自迈新生物技术公司(均为即用型)。

　　1.2.2 免疫组化染色：采用微波-链霉菌素-生物素(microwave-labelledstrept-avidin biotin，MW-LSAB)免疫组化法，操作方法见文献[1]报道。实验用已知CD44v6和Survivin阳性大肠癌组织作阳性对照，用枸橼酸缓冲液代替一抗作为阴性对照。H2O2-DAB显色。

　　1.3 结果判断 组织结构及背景清晰、所测组织的细胞膜和/或细胞质呈CD44v6和细胞质呈Survivin棕黄色反应者为阳性，凡无着色者为阴性。

　　1.4 统计学方法 采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 CD44v6和Survivin在正常胆囊和胆管癌组织中的表达 免疫组化染色显示，CD44v6和Survivin阳性产物呈棕黄色或棕褐色，CD44v6主要分布于细胞膜和细胞质，Survivin主要分布于细胞质(见图1，2)。CD44v6和Survivin在胆囊癌中的表达阳性率均显著高于胆囊腺瘤和慢性胆囊炎(P<0.05)，见表1。

　　2.2 CD44v6和Survivin表达与胆囊癌临床病理特征的关系 CD44v6和Survivin表达与胆囊癌患者性别、发病年龄和肿瘤大小无关，而与胆囊癌的分化程度、浸润深度和转移相关，见表2。

　　2.3 CD44v6表达与Survivin表达的关系 在CD44v6阳性表达的42例胆囊癌组织中，Survivin阳性32例(72.7%)，在CD44v6阴性的10例中，Survivin阳性3例(42.9%)，差异有统计学意义(χ2=5.19，P<0.05)。

　　3 讨论

　　CD44是位于人类第11号染色体短臂上的基因所编码的细胞粘附分子，是单基因编码、分布极为广泛的细胞表面跨膜糖蛋白，能与透明质酸等多种配体分子结合，介导细胞与细胞间、细胞与细胞外基质间的粘附，通过粘附、迁移、渗透、信号传导等促进肿瘤细胞的侵袭转移。CD44v6是最早被发现的含有变异型外显子v6编码序列的CD44分子，已有研究表明，CD44v6基因是肿瘤转移促进基因，可赋予肿瘤细胞以转移能力。近年来许多临床研究发现，CD44v6的过量表达与多种人体恶性肿瘤的发生发展、侵袭转移和不良预后密切相关，是判断肿瘤生物学行为及预后因素的重要标志[2-3]。Survivin基因是1997年由耶鲁大学的Altieri等利用效应细胞蛋白酶受体-1(effector cell protease receptor-1，EPR-1)cDNA在人类基因库中杂交筛选并克隆出的一种凋亡抑制基因，属于IAP家族新成员，具有显著的抗凋亡作用。Survivin基因具有肿瘤特异性表达的特点，其表达与细胞周期密切相关，是G2/M期的调节基因，参与细胞周期调控、有丝分裂及肿瘤的恶性转化，并与肿瘤的发生发展和预后密切相关[4-8]。本研究结果显示，CD44v6和Survivin在慢性胆囊炎中不表达，在胆囊癌中两者表达阳性率均明显高于胆囊腺瘤(P<0.05)，并随着癌细胞分化程度的减低、浆膜浸润和转移，其阳性表达率亦随着显著增高(P<0.05)。这提示，CD44v6和Survivin表达与胆囊上皮细胞的恶性转化密切相关;表明CD44v6和Survivin在胆囊癌的肿瘤临床进展、分化水平和淋巴结转移过程中起着重要作用;尤其是Survivin在肿瘤中的高表达可能会抑制正常细胞的凋亡过程，从而导致细胞的异常增生和恶性转化，使癌细胞获得永生性。Survivin在肿瘤细胞中表达越强，其对癌细胞的抑制能力越强，癌细胞的生存能力和肿瘤的恶性程度也随之增高，癌细胞更容易侵袭周围组织而发生转移，由此导致患者的生存期缩短，死亡率增高。Survivin表达可能是胆囊癌的发生和临床进展过程中的早期事件。因此，在胆囊癌的临床病理诊断中，检测这两种蛋白表达不仅对于研究肿瘤的发生、预测肿瘤的临床进展和生物学行为是一种重要的分子生物学标志，而且可作为预测胆囊癌预后不良的参考指标。

　　恶性肿瘤的发生发展是一个涉及到多基因、多分子水平变化的多阶段过程。本研究结果显示，在胆囊癌中CD44v6表达与Survivin表达明显呈正相关。这提示，在胆囊癌发生发展、侵袭转移过程中，CD44v6和Survivin异常表达具有相互诱导、调控和协同作用的可能，其机制有待深入研究。

【参考文献】　　[1] 谷化平，周翠玲. 环氧化酶-2和nm23H1蛋白表达及其与胆管癌的相关性[J]. 肝胆胰外科杂志，2008，20(4)：264-266.

　　[2] Joo M， Lee HK， Kang YK. Expression of E-cadherin， betacatenin， CD44s and CD44v6 in gastric adenocarcinoma：relationship with lymph node metastasis[J]. Anticancer Res，2003，23(2B)∶1581-1589.

　　[3] 谷化平. 环氧化酶-2和CD44v6蛋白在宫颈鳞癌中表达及临床意义[J]. 生命科学研究，2008，12(1)：87-90.

　　[4] Ikeguchi M， Kaibara N. Survivin messenger RNA expression is a good prognostic biomarker for oesophageal carcinoma[J]. Br J Cancer，2002，87(8)：883-887.

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　　[7] 黄辉，耿小平，熊奇如，等. Survivin与Caspase-3在胆管细胞癌中的表达及相关性研究[J]. 肝胆胰外科杂志，2009，20(6)：403-406.

　　[8] 陈科济，王义，孙延富. 肝细胞癌Survivin的表达及其与化疗药物顺铂敏感性的关系[J]. 肝胆胰外科杂志，2009，21(1)：4-6.