自组方1号对小鼠酒精性肝损伤的干预作用

　　作者：韦　敏，吕　晔，宋萍萍 作者单位：(中国科学院江苏省植物研究所，南京　210014)

　　【摘要】 目的：研究自组方1号对小鼠酒精性肝损伤的影响。方法：采用50%乙醇灌胃造成小鼠酒精性肝损伤模型，检测血清中甘油三酯(TG)的含量的活性及肝组织丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量，并进行肝脏病理组织学检查。结果：给予自组方后可使肝组织中MDA 含量明显降低，血清TG 含量降低，肝组织病理改变明显好转，且具有剂量依赖性，高剂量组与对照组大鼠的各项指标相似。结论：自组方1号对酒精性肝损伤有明显的保护作用

　　【关键词】 自组方1号;酒精;肝损伤;小鼠

　　[ABSTRACT] Objective： To investigate the effect of No. 1 self-made formula on alcohol-induced hepatic injury of mice. Methods： Mice model with alcoholic liver injury were established by gastric perfusion of 50% ethanol. Levels of triglyceride， triglyeride in serum， malondialdehyde (MDA) and glutathione (GSH) were measured， and pathological examination was also performed. Results： It showed that MDA and TG level decreased significantly， and the hepatic pathological status was obviously improved and it was dose-dependent. The indexes in high dose group were similar to these in control group. Conclusions： No. 1 self-made formula has remarked protective effect on hepatic injury due to alcohol.

　　[KEY WORDS] No. 1 self-made formula; Alcohol; Hepatic injury; Mice

　　酒精性肝病(alcoholic liver disease，ALD)是因长期大量饮酒引起的中毒性肝脏疾病，包括轻症ALD(mild alcoholic liver injury，MAI)、酒精性脂肪肝(alcohloic fatty liver，AFL)、酒精性肝炎(alcoholic hepatitis，AH)、酒精性肝纤维化(alcoholic hepatic fibrosis，AHF)、酒精性肝硬化(alcoholic cirrhosis，AC)5种类型。嗜酒者中，约2/3可发展为酒精性肝病。据统计，世界上有1 500万～2 000万人酗酒，其中10%～20%的人有不同程度的酒精性肝病。ALD是西方国家导致肝硬化的最主要原因[1]，在我国，随着人们生活水平的提高，酒精消费量的增多，ALD的发病率呈逐年上升的趋势，酒精已成为继病毒性肝炎后导致肝损害的第二大病因[2]，实验研究与临床流行病学证明，饮酒对肝炎病毒感染过程有促进作用[3]。酒精中毒者免疫功能降低，对感染的抵抗力降低。酒精性肝病已日益成为危害国人健康和导致医疗费用增加的重要因素。因此，寻找一种有效的预防和治疗酒精性肝病的方法对促进国人健康，减轻社会经济负担具有重要意义。

　　蛹虫草(Cordyceps miliaris)也称蛹草，北冬虫夏草，是天然的滋补品和珍贵药材，现材料已人工栽培成功。其营养成分含有丰富的蛋白质、碳水化合物、脂肪、无机盐、维生素、虫草酸、虫草多糖、虫草菌素及超氧化物歧化酶等，性味甘温，具平益肺肾、补精髓、止血化痰等多种功效。灵芝(Ganoderma lucidum)含有灵芝多糖、有机锗及多种人体必需氨基酸，它不仅能刺激人体的免疫系统，赋予人的抗癌能力，而且有健肝、利尿、益胃、消炎、镇痛、消除呼吸器官疾患和循环系统障碍等多种功效。水飞蓟(Sliybum maruianum CL， Gaertn.)又名水飞雉、乳雉子，菊科水飞蓟属草本植物，原产于地中海沿岸。其果实中的活性有效成分水飞蓟素除具有预防和治疗肝胆疾病外，还具有抗氧化、抗辐射、抗肿瘤、提高免疫力等多种功能。本实验在建立小鼠酒精性肝损伤的模型基础上，以自组方1号(蛹虫草多糖、灵芝多糖、水飞蓟提取物按一定比例配伍制备)进行给药，观察模型组和自组方1号处理组小鼠在肝脏病理学、血清学及免疫组化等方面的改变，从而证明自组方1号对酒精性肝损伤的保护作用。

　　1　材料与方法

　　1.1　材料

　　1.1.1　实验动物

　　健康雌性ICR种清洁级小鼠60只，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，体重18.4～22.0 g，合格证号：SCXK(沪)2007-0005号，按体重随机分为5组，每组12只。SPF级实验动物环境设施合格证号：SYXK(苏)2007-0020。全部动物均给予灭菌鼠饲料和灭菌水自由取用。

　　1.1.2　实验药物

　　自组方1号(蛹虫草多糖、灵芝多糖、水飞蓟提取物按一定比例配伍制备)，人体推荐摄入量每人480 mg/d，即8 mg/kg b.w./d。

　　1.1.3　剂量设计

　　设40、80、240 mg/kg(相当于成人每日每千克体重推荐摄入量的5、10、30倍)三个样品剂量组、一个溶剂对照组和一个模型对照组。分别称取样品200、400、1 200 mg加纯净水至100 mL配制成各剂量组受试物(隔日配制)，溶剂对照组和模型对照组给予纯净水，各组每日以20 mL/kg b.w.的量经口灌胃，连续30 d。给予受试物结束后样品剂量组和模型对照组一次灌胃给予50%乙醇14 mL/kg b.w.，溶剂对照组给予纯净水，禁食12 h，处死动物取同一部位肝脏进行肝脏病理组织学检查及肝组织匀浆测定各项生化指标。

　　1.1.4　主要仪器与试剂

　　电子秤、电子天平、手术器械、JY92-Ⅱ型超声波细胞粉碎仪、离心机、TU1810型分光光度计、振荡器、恒温水浴箱、奥林巴斯AU-640生化分析仪、无水乙醇(分析纯，南京化学试剂一厂生产)、由中生北控生物科技股份有限公司提供的甘油三酯(TG)和总蛋白(TP)测定试剂盒、南京建成生物工程研究所提供的丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)测定试剂盒等。

　　1.2　方法

　　1.2.1　生化指标的测定

　　取0.2 g肝组织，制成5%肝组织匀浆。用生化仪测定匀浆中TG和蛋白含量，按试剂盒提供的方法手工测定匀浆中MDA和GSH含量。

　　1.2.2　肝脏病理组织学检查

　　取肝脏左叶，12%甲醛固定，石蜡包埋，苏丹Ⅲ染色，镜检评分。

　　1.3　统计学处理

　　采用SPSS统计软件进行数据处理。本实验所得小鼠体重、TG、MDA、GSH等数据均为计量资料，原始数据进行正态性检验和方差齐性检验，在满足“方差齐”和“正态分布”的要求后，用单因素方差分析法(ANOVA)进行统计，对P<0.01的数据用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。对方差不齐和病理组织学检查结果用秩和检验进行统计学处理。

　　2　结果

　　2.1　样品对动物体重的影响

　　实验前、后各组小鼠体重均无显著性差异(P>0.05)，见表1。表1　各组小鼠的初始体重和终末体重

　　2.2　样品对小鼠肝匀浆中丙二醛(MDA)含量的影响

　　模型对照组小鼠肝匀浆中MDA含量升高，与溶剂对照组相比有统计学意义(P<0.05)，样品中、高剂量组小鼠肝匀浆中MDA与模型对照组相比降低，高剂量组差异有统计学意义(P<0.01)，见表2。表2　样品对小鼠肝匀浆中丙二醛

　　2.3　样品对小鼠肝匀浆中还原型谷胱甘肽(GSH)含量的影响

　　样品各剂量组小鼠肝匀浆中GSH与模型对照组相比均升高但差异无统计学意义(P>0.05)，见表3。表3　样品对小鼠肝匀浆中还原型谷胱甘肽

　　2.4　样品对小鼠肝匀浆中甘油三酯(TG)含量的影响

　　模型对照组小鼠肝匀浆中TG含量升高，与溶剂对照组相比有统计学意义(P<0.01)。样品中、高剂量组小鼠肝匀浆中TG含量与模型对照组相比降低，其中中剂量组具有统计学意义(P<0.05)，见表4。表4　样品对小鼠肝匀浆中甘油三酯(TG)　　含量的影响

　　2.5　样品对小鼠肝脏组织病理学变化的影响

　　除溶剂对照组外各组小鼠均出现不同程度的肝细胞脂肪变性，模型对照组肝细胞脂肪变性与溶剂对照组比较，差异有统计学意义(P<0.01)。样品各剂量组小鼠与模型对照组小鼠相比肝细胞脂肪变性程度减轻其中高剂量组具有统计学意义(P<0.05)，见表5。表5　样品对小鼠肝脏组织病理学变化的影响

　　3　讨论

　　本实验显示，酒精性肝损伤小鼠肝组织中GSH活性显著减低， MDA含量显著升高，血清TG含量显著升高，肝细胞出现明显的脂肪变性，可反映出肝脏内肝细胞受损程度。给予自组方1号后，肝组织中MDA 含量明显降低，血清TG 含量降低，肝组织病理改变明显好转，且具有剂量依赖性，高剂量组与对照组大鼠的各项指标相似。

　　由于蛹虫草多糖具其抗氧化作用[4,5];灵芝多糖能抗自由基损伤，抑制脂质过氧化反应[6]并能通过激活解毒酶谷胱甘肽-s-转移酶(GST)介导正常小鼠肝细胞的化学防护作用[7]，灵芝多糖还能抑制一氧化氮合成酶的表达，通过抑制NO产生而保护肝脏[8];水飞蓟素能明显改变CCl4的矿物油溶液给Wistar雄性大鼠注射引起的肝组织硬变，弥漫性坏死，脂变;使胶原带变薄，降低肝胶原含量;抑制CCl4使血中ALT、ALP、γ-GTP和总胆红素的升高;抑制肝匀浆中丙二醛含量的升高，阻止CCl4导致肝糖原下降[9]，水飞蓟宾的保肝作用机理与其抑制TNF的产生和活性有关[10]，其还能抑制肝脂质过氧化活性的增高，并对肝脏药物代谢酶活性有保护作用[11]。试验结果表明，自组方1号对酒精性肝损伤有明显的保护作用，其作用机制可能与其组方药物的以上作用机制相关。

　　【参考文献】

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　　7　Kim YS， Eo SK， Oh KW， et al. Antiherpetic activities of acidic protein bound polysaccharide isolated from Ganoderma lucidum alone and in combinations with interferons[J]. J Ethnopharmacol， 2000,72(3)：451-458.

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　　9　吴东方，彭仁秀.水飞蓟素对小鼠四氯化碳肝损伤时肝微粒体及线粒体膜流动性的影响[J].中国药理通讯，2003,20(1)：74.

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　　11　谢京儿，廖锝麟.烫伤后大鼠肝脏药物代谢酶和脂质过氧化活性的变化以及水飞蓟宾的作用[J].第二军医大学学报，1989,10(5)：413.