急性肝炎、肝硬化和肝癌病人TM检测及其意义

　　作者：陈兵 作者单位：青岛大学医学院附属医院，山东 青岛 266003

　　【摘要】 目的 探讨急性肝炎、肝硬化和肝癌病人血浆血栓调节蛋白(TM)水平及其在疾病病情进展及预后判断中的意义。方法 采用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法，检测59例急性肝炎和肝硬化病人(其中急性甲型肝炎20例，急性重症肝炎14例，肝硬化代偿15例，肝硬化失代偿10例)、28例肝癌病人治疗前和治疗后血浆TM水平，并与12例健康者进行对照。结果 急性重症肝炎、肝硬化代偿、肝硬化失代偿组血浆TM水平皆较正常对照组显著增高，急性重症肝炎组明显高于急性甲型肝炎组，肝硬化失代偿组显著高于代偿组(F=389.19，q=3.08～45.77,P<0.001);肝癌病人术前血浆TM水平明显升高，与正常对照组比较差异有显著性(F=55.64，q=6.959～17.544,P<0.05)，Ⅰ、Ⅱ期病人术后10 d的血浆TM水平较术前明显降低，接近正常水平(t′=2.366,t=8.372,P<0.01)。肝癌病人血浆TM水平随分期的增高而增高，差异均有显著性(F=55.64，q=4.099～17.544,P<0.05)。结论 TM为血管内皮细胞损伤的标志物，可作为某些肝脏疾病病情进展及预后判断的重要指标。

　　【关键词】 肝炎 甲型 肝硬化 肝肿瘤 血栓调节蛋白 酶联免疫吸附测定

　　CLINICAL SIGNIFICANCE OF PLASMA THROMBOMODULIN MEASUREMENT IN PATIENTS WITH ACUTE HEPATITIS, HEPATIC CIRRHOSIS AND LIVER CANCER CHEN BING, YANG JIE， ZHANG GUIJUN(Research Room of Hemopathy, The Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College, Qingdao 266003, China) [ABSTRACT]ObjectiveTo study the levels of plasma thrombomodulin (TM), and to explore its significance in the development and prognosis of in patients with acute hepatitis, hepatic cirrhosis and liver cancer. Methods59 patients with hepatitis and hepatic cirrhosis, 28 cases of liver cancers were selected into the study, the plasma TM levels were measured by ELISA, of which 19 patients of liver cancer in stageⅠand Ⅱ were measured by the same method before and after operation, respectively. ResultsExcept acute hepatitis, plasma TM levels increased markedly in the group of hepatitis and hepatic cirrhosis, the level of acute fatal hepatitis and decompensated hepatic cirrhosis were higher than those in acute hepatitis and compensated hepatic cirrhosis respectively (F=389.19,P<0.001). Compared with normal control group, the preoperative plasma TM level of patients with liver cancer increased obviously (F=55.64,q=6.959-17.544,P<0.05). 10 days after operation, TM levels of plasma TM decreased to normal range in stageⅠand Ⅱ (t′=2.366,t=8.372,P<0.01). There were obvious differences of TM between the three stages of preoperative liver cancer, TM level increased upgrading (F=55.64,P<0.01).ConclusionAs a marker of vascular endothelium cells damaged, the plasma TM levels can be used as an important indicator of the development and prognosis of some liver diseases.

　　[KEY WORDS]hepatitis A; liver cirrhosis; liver neoplasms; thrombomodulin; enzymelinked immunosorbent assay

　　血栓调节蛋白(TM)是一种跨膜糖蛋白，广泛存在于血管内皮细胞表面，它与凝血酶具有较高的亲和力，二者结合后可大大激活抗凝血物质蛋白C的活性，从而使蛋白C转化为活化的蛋白C，在凝血和纤溶过程中发挥重要作用。血浆可溶性TM作为血管内皮细胞损伤的标志物，已被公认是反映血管内皮损伤最敏感的指标之一[1]，它在凝血与纤溶中的作用早已引起人们广泛的关注。近年研究发现，TM参与炎症反应，并与肿瘤疾病有关，可通过抑制纤维蛋白形成，阻止肿瘤细胞与细胞外基质的黏附，抑制肿瘤的侵袭和转移[2]。本文检测肝脏疾病病人血浆TM水平的变化，以探讨TM在其诊断、治疗及预后判断等方面的价值。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料

　　肝病病人87例，男48例，女39例;年龄18～72岁，平均43岁。包括：肝炎及肝硬化病人59例，其中急性甲型肝炎20例，急性重症肝炎14例，肝硬化代偿病人15例，肝硬化失代偿病人10例，所有病例均参照1995年第五届全国传染病、寄生虫病学术会议修订的诊断分型标准进行诊断分型;肝癌病人28例，均经影像和病理学检查确诊，参照全国肝癌防治研究协作会议肝癌临床分期方案分期，其中Ⅰ期病人8例，Ⅱ期病人11例，Ⅲ期病人9例，Ⅰ、Ⅱ期病人均经手术治疗，而Ⅲ期所有病人均无手术指征。随机抽取同期健康查体者12例作为正常对照组，其中男8例，女4例，年龄32～68岁，平均48岁。均无心、脑血管疾病，无肝、肾疾病及其他血液学异常。

　　1.2 标本采集

　　肝炎、肝硬化及Ⅲ期肝癌病人于治疗前，Ⅰ、Ⅱ期肝癌病人于术前和术后10 d，分别采集清晨空腹静脉血1.8 mL，129 mmol/L枸橼酸钠9∶1抗凝，3 000 r/min 离心10 min，分离血浆，置-30 ℃冻存待测。

　　1.3 检测指标及方法

　　TM检测采用酶联免疫吸附方法(ELISA)，严格按照试剂盒说明书的操作步骤进行操作。试剂盒由法国DIACLONE公司提供。

　　1.4 统计学处理

　　所有数据均以±s表示，数据间比较采用t检验和方差分析。

　　2 结 果

　　2.1 肝炎及肝硬化病人血浆TM水平比较

　　对照组血浆TM为(4.641±0.737)μg/L，急性甲型肝炎组、急性重症肝炎组、肝硬化代偿组及肝硬化失代偿组血浆TM水平分别为(5.392±0.648)、(12.875±1.034)、(10.336±0.988)、(17.224±1.735)μg/L，急性甲型肝炎、急性重症肝炎、肝硬化代偿及肝硬化失代偿各组TM水平均高于对照组，急性重症肝炎组明显高于急性甲型肝炎组，肝硬化失代偿组高于代偿组，差异均有显著性(F=389.19,q=3.08～45.77，P<0.05、0.01)。

　　2.2 肝癌病人血浆TM水平比较

　　Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期肝癌病人治疗前血浆TM水平均有明显增高，分别为(7.309±1.900)、(8.909±1.286)、(11.139±0.614)μg/L，各期与正常对照组比较差异均有显著意义(F=55.64，q=6.959～17.544,P<0.05);Ⅰ、Ⅱ期病人术后10 d血浆TM水平较术前均明显降低，分别为(4.868±0.220)和(4.900±0.932)μg/L，与术前比较差异均有显著性(t′=2.366、 8.372,P<0.01);血浆TM水平与肝癌分期相关，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期逐期增高(F=55.64，q=4.099～17.544,P<0.05)。

　　3 讨 论

　　TM是存在于血管内皮细胞表面的跨膜糖蛋白，存在于动脉、静脉、毛细血管和淋巴管的内皮细胞表面[3]。生理状态下可少量从内皮细胞表面水解脱落，游离于血浆中。当内皮细胞受损时则大量释放入血，是内皮细胞损伤的特异性分子标志物之一。有研究显示，在某些肿瘤和炎症性疾病，TM可在内皮细胞发生浸润和炎症等病理过程和损伤后被释放入血，使血浆TM水平明显升高，并且与疾病的活动性密切相关[4]。

　　肝窦内皮细胞(SEC)是肝窦壁的主要细胞，占肝脏非实质细胞的40%。正常时体外分离的SEC仅表达少量的TM，而在肝坏死及肝再生结节毛细血管上TM的表达量明显增多[5]。ZENIYA等[6]研究了慢性病毒性肝炎病人肝窦内皮细胞TM的表达情况，认为TM的表达与慢性病毒性肝炎的肝脏炎症反应相关。肝硬化病人血浆TM水平随Child分级而增加，而不依赖于病因，Child A、B、C级病人血浆TM水平明显高于无肝硬化的病人。急性肝炎时主要表现为肝细胞变性、灶性坏死与再生，不影响周围的血管，因此血浆TM水平仅轻度升高。发展到重症期和肝硬化时，肝细胞广泛坏死，再生结节形成，肝小叶结构改建和弥漫性结缔组织增生，造成肝脏内血液循环紊乱，表现为血管床缩小、闭塞和扭曲，血管受到再生结节的挤压，从而加重血管内皮细胞的损伤;此外，内毒素血症和中性粒细胞活性增加与肝病时血管内皮细胞损伤也有密切关系，这些均可导致血浆TM水平的持续增高。本文结果显示，肝炎和肝硬化病人血浆TM水平有不同程度的增高，急性重症肝炎组明显高于急性肝炎组，肝硬化组明显高于肝炎组，而肝硬化失代偿组显著高于代偿组。由此可见，肝病病人血浆TM水平随病情的加重而逐渐升高，TM可作为监测病情进展及预后判断的有效指标，当急性肝炎病人TM升高时可考虑重症倾向，肝硬化病人TM持续增高应考虑失代偿的可能，这些病人往往预后较差。

　　有关实体瘤病人血浆TM的变化国内罕见报道，LINDAHL等[7]研究显示，结肠、直肠癌病人在发病初期血浆TM水平正常，到疾病晚期则显著升高;而胰腺癌病人在发病初期血浆TM就升高，疾病晚期升高更为显著，表明血浆TM水平同肿瘤的进展呈正相关，随病情的恶化，其含量逐渐升高。肿瘤病人血浆TM除来自由于肿瘤细胞的侵袭导致血管内皮细胞损伤外，也有可能为肿瘤病人体内大量的蛋白溶解酶裂解内皮细胞表面的TM，使之脱落释放入血所致。肿瘤细胞自身所产生的TM释放入血，也可能是肿瘤病人血浆TM水平升高的原因之一。本文测定了25例肝癌病人术前、术后血浆TM水平，结果显示，肝癌病人术前血浆TM显著高于正常水平，术后10 d则明显降低，接近正常水平。随着病情的进展，从Ⅰ到Ⅲ期肝癌病人血浆TM水平逐步升高，差异有统计学意义。说明血浆TM与肝癌临床分期相关，随病变进展病情加重，而进一步升高，这与BOFFA等[8]报道的结果一致。故血浆TM的检测可作为肿瘤病人病情进展和预后判断的有用的指标。

　　综上所述，TM作为凝血和纤溶的调节蛋白，与肝脏疾病的发生发展密切相关，它既可以作为血管内皮细胞损伤的一个标志物，又可以作为肝脏疾病病情进展及预后判断的重要指标。

　　【参考文献】

　　[1]BOFFA M C, KAMOCHKINE M. Thrombomodulin: an overview and potential implication in vascular disorders[J]. Lupus, 1998,7:120125.

　　[2]SUEHIRO T, SHIMADA M, MATSUMATA T, et al. Thrombomodulin inhibits intrahepatic in human hepatocellular carcinoma[J]. Hepatology, 1995,21:12851290.

　　[3]COMI K, ZUSHI M, HONDA G, et al. Antithrombotic effect of recombinant human thrombomodulin on thrombininduced thromboembolism in mice[J]. Blood, 1990,75:13931398.

　　[4]杨忠思,管洪在,田玉芹,等. 急性白血病病人血浆TM、PC抗原和DD测定及其临床意义[J]. 齐鲁医学杂志, 2004,19(2):124126.

　　[5]ARAI M, CHAYAMA K, SHIMONO T, et al. Peroperative estimation of liver injury and operative risk[J]. Thromb Res, 1995,80(2):113123.

　　[6]ZENIYA M, FUKATA H, TODA G, et al. Thrombodulin espression of sinusoidal cells in chronic viral hepatitis[J]. J Gastroenterol Hepatol, 1995,10:7780.

　　[7]LINDAHL A K, BOFFA M C, ABILDGAARD U. Increased plasma thrombomodulin in cancer patients[J]. Thromb Haemost, 1993,69:112119.

　　[8]BOFFA MC, LAPEYRE RE C, BERARD M, et al. Plasma thrombomodulin level in malignancy varies according to the tumor type[J]. Nouv Rev Fr Hematol, 1994,36(SupplⅠ):S8793.