P16、P53和SMAD4蛋白在胰腺癌组织中的表达 及其临床意义

　　作者：张顺，相亭海，李玉军　(青岛大学医学院附属医院，山东 青岛 266003 肝胆外科; 病理科)

　　[摘要]目的 探讨P16、P53和SMAD4蛋白在胰腺癌组织中的表达及其临床意义。方法 采用免疫组织化学方法对30例胰腺癌组织和10例正常胰腺组织中P16、P53和SMAD4蛋白进行检测。结果 P16、P53和SMAD4蛋白在胰腺癌组织中的阳性表达率分别为56.67%、43.33%和50.00%。在正常胰腺组织中的阳性表达率分别为100.00%、0和90.00%。两者比较差异有显著性( χ2 =4.60～5.00，P <0.05)。P16、P53蛋白的表达与胰腺癌病人的临床病理特征无关，而SMAD4蛋白的表达在病理分化程度上存在显著差异( χ2 =7.98，P <0.05)。结论 P16、P53、SMAD4蛋白在胰腺癌发病中起重要作用。

　　[关键词] 胰腺肿瘤;蛋白质P16;蛋白质P53;蛋白质SMAD4;免疫组织化学

　　EXPRESSION AND SIGNIFICANCE OF GENE P16， P53 AND SMAD4 IN PANCREATIC CARCINOMA

　　ZHANG SHUN， XIANG TING-HAI， LI YU-JUN

　　(Department of Hepatobiliary Surgery， The Affiliated Hospital of Qingdao University Medi-cal College， Qingdao 266003， China)

　　[ABSTRACT]ObjectiveTo explore the expression and the relationship of P16， P53 and SMAD4 in pancreatic carcinoma. MethodsImmunohistochemical method was used to examine the expressions of P16， P53 and SMAD4 protein in 30 pancreatic car-cinoma tissues and 10 normal pancreatic tissues. ResultsThe positive rates of P16， P53 and DMAD4 protein were 56.67%， 43.33% and 50.00%， respectively， in the carcinoma tissues， and 100.00%， 0 and 90.00% in normal pancreatic tissues. The difference was significant between the two groups( χ2 =4.60-5.00， P <0.05).The expressions of P16 and P53 were not correla-ted with the clinical pathology， while SMAD4 differed significantly with tumor differentiation ( χ2 =7.98，P <0.05). Conclusion P16，P53 and SMAD4 play an important role in the development of pancreatic carcinoma.

　　[KEY WORDS]pancreatic neoplasms; protein P16; protein P53 ; protein SMAD4; immunohistochemistry

　　90%的胰腺癌病人在诊断后1年内死亡，5年生存率仅为5%～10%[1]。近年关于抑癌基因的研究逐渐成为热点。本文应用免疫组织化学技术检测30例胰腺癌和10例正常胰腺组织中P16、P53和SMAD4蛋白的表达，探讨抑癌基因在胰腺癌发生中的作用。现报告如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 标本采集 取1999年9月～2003年12月在我院手术的胰腺癌病理标本30份。30例病人中，男19例，女11例;年龄44～80岁，平均(63±5)岁。胰腺癌分期按照1993年9月修订的日本胰腺癌规约分期标准进行。30例胰腺癌病人中低分化15例，中分化9例，高分化6例。另外取10份正常胰腺组织块作为对照。

　　1.2 检测方法 P16、P53和SMAD4蛋白检测试剂盒均购自武汉博士德公司。采用免疫组织化学PV 6000法检测P16、P53和SMAD4蛋白表达。用已知阳性切片作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。

　　1.3 各指标阳性判断标准 各指标阳性判断标准见表1。

　　表1 P16、P53和SMAD4蛋白在胰腺癌组织中的阳性表达判断标准 (略)

　　2 结果

　　2.1 两种组织中各指标阳性表达率比较 在本文所检测的30例胰腺癌组织中，P16、P53 和SMAD4蛋白阳性表达率分别为56.67%、 43.33%和50.00%。10例正常胰腺组织中3种蛋白阳性表达率分别为100.00%、0和90.00%。两者存在显著差异( χ2 =4.60～5.00，P <0.05)。

　　2.2P16、P53和SMAD4蛋白在胰腺癌组织中的表达与临床病理特征的关系 P16、P53蛋白在胰腺癌组织中的表达与病人年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期和肿瘤分化程度无显著相关性，SMAD4蛋白的表达在肿瘤分化程度上存在显著差异( χ2 =7.98，P <0.05)。见表2。

　　表2 胰腺癌组织中各指标的阳性表达情况与临床病理特征的关系(略)

　　2.3P16、P53和SMAD4蛋白在胰腺癌组织中表达比较 P16、P53蛋白同时阳性表达者11例，同时阴性表达者11例，二者在表达上存在相关性( r=0.377，P <0.05);同时阳性表达P16和SMAD4者12例，同时阴性表达者4例，两者在表达上无相关性( r=0.123，P >0.05);同时阳性表达P53和SMAD4者10例，同时阴性表达者6例，两者在表达上无相关性( r=0.075，P >0.05)。

　　3 讨论

　　研究显示，P16蛋白和cyclin D1竞争与CDK4结合，抑制CDK4的活性，阻滞细胞周期从G1 期进入S期，从而影响细胞周期进程，在抑制肿瘤形成中起重要作用。有研究表明，85%以上的胰腺癌有p16基因的纯合性缺失和突变[2]。谷丽君等[3]的研究显示，胰腺癌组织中P16蛋白的阳性表达率为42.86%，本组P16蛋白的阳性表达率为56.67%，可能与病例数及实验方法不同有关。p53基因也是一种抑癌基因，表达蛋白分为野生型和突变型，由于野生型P53蛋白半衰期短，在正常组织中的含量极低，用免疫组化方法只能检测到突变型的表达，本组检测的即是P53蛋白的突变型。本组资料中P53蛋白的阳性表达率为43.33%，与文献报道的结果类似[4]。本组结果显示，P16、P53蛋白在胰腺癌中的表达与正常胰腺中的表达有显著差异，说明P16、P53蛋白可能在胰腺癌的发生过程中起到一定的作用，但是与临床病理特征无关，不能反映胰腺癌的生物学行为。SMAD4蛋白是DPC4基因的蛋白产物，调节细胞分化，抑制细胞增殖。ZHAN等[5]报道胰腺癌组织中SMAD4的表达与病人的性别、年龄、肿瘤直径和TNM分期无相关性，而与分化程度有关。REN等[6]研究显示，SMAD4蛋白的阳性表达率为72.5%，本组病人SMAD4蛋白的阳性表达率为 50.00% ，表达率的差异可能是因为试剂与方法的不同所致。ROZENBLUM等[7]报道胰腺癌中DPC4蛋白失活总是伴有P16蛋白失活，但P16蛋白失活者DPC4蛋白并不一定失活，认为P16蛋白失活使DPC4突变的可能性增加，两者共同作用导致胰腺癌发生。但是本组资料中SMAD4与P16和P53蛋白的表达均无相关性，说明两者在胰腺癌的发生中无协同作用。大量研究显示，P53、P16和SMAD4蛋白在胰腺癌中的表达均缺乏特异性，不能作为胰腺癌早期诊断的特异性指标。本实验证明，P53、P16蛋白的表达与胰腺癌病人的临床病理特征无关，说明两者与胰腺癌的发生过程无关，而SMAD4蛋白的表达与病理分化程度相关，可能参与胰腺癌的恶变过程，因此，SMAD4基因是值得关注的一个基因。虽然基因的改变在胰腺癌发病中可能起着重要的作用，但是胰腺癌的发病原因是复杂的，至今尚不清楚，仍未能摆脱疗效差、预后差的局面，寻找胰腺癌的特异性基因是迫切需要解决的问题。

　　[参考文献]

　　[1] 沈魁，钟守先，张圣道.胰腺外科学[M].北京:人民卫生出版社，2000:405-440.

　　[2] AAKORAFAS GH， TSIOTOU AG， TSIOTOS CG. Molec-cular biology of pancreatic cancer: oncogenes，tumor suppres-sor genes， growth factors， and their receptors from a clinical perspective [J]. Cancer Res， 1997， 57:3929.

　　[3] 谷丽君，陈杰，卢朝晖，等.人胰腺癌组织中DPC4/Smad4， p21wafI， p16蛋自表达的检测[J].癌症，2002， 21 (2):132-137.

　　[4] 陈笑需，张启瑜，余作黔，等.p14ARF、p53抑癌基因与胰腺癌发生、发展的相关研究[J].温州医学院报，2004，34(4):243-246.

　　[5] ZHAN H， ZHANG YC， HU XM. Loss of DPC4 expression and its correlation with clinicopathological parameters in pan-creatic carcinoma[J]. World J Gastroenterol， 2003，9(12): 2764-2767.

　　[6] REN RY， FANG RL， GUPTA MK，et al. Alteration of som-atostatin receptor subtype 2 gene expression in pancreatic tumor angiogenesis[J]. World J Gastroenterol， 2004，10(1):132-135.

　　[7] ROZENBLUM E， SCHUTTE M， GOGGINS M， et al. Tumor-suppressive pathways in pancreatic carcinoma [J]. Cancer Res， 1997，57:1731.