导痰汤对大鼠非酒精性脂肪性肝炎的治疗作用

　　作者：应豪 陈汉诚 李凌 周文红 作者单位：315010 浙江省宁波市肝病医院

　　【摘要】 目的 观察导痰汤对实验性大鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的影响，并探讨其作用机理。 方法 采用高脂饮食复制大鼠NASH模型，以导痰汤低、中、高剂量分别进行干预，然后观察动物一般情况，计算肝指数，观察肝组织脂肪变性及炎症活动度，并查血清学指标ALT、甘油三脂(TG)、总胆固醇(TCH)、高密度脂蛋白(HCL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)，肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)。结果 与空白模型组相比，各剂量治疗组大鼠肝指数明显降低(P<0.05)，血清ALT及TG、TCH、LDL- C也有显著降低(P<0.01～P<0.05)，但HCL-C无明显变化(P>0.05)，能够升高肝组织SOD活性(P<0.01～P<0.05)，降低MDA含量(P<0.05)，血清TNF-α含量显著减少(P<0.01)，且表现出一定的量效关系。各治疗组大鼠肝脏炎症活动度也显著改善(P<0.05)，但量效关系不明显。 结论 导痰汤有明显防治NASH作用，其机制在于减轻脂类在肝脏的积聚，缓解氧化应激，降低炎症反应，保护肝细胞等作用有关。

　　【关键词】 非酒精性脂肪性肝炎 大鼠 导痰汤 动物实验

　　【Abstract】 Objective To observe the influence of Daotan decoction on nonalcoholic steatohepatitis(NASH) in rats, and study their relative mechanisms. Methods After NASH in rats was induced by high fat diet, the rats of therapeutic groups were treated with small、middle and high dose Daotan decoction respectively. Then their general condition was observed、 liver index was computed, and fatty degeneration and inflammatory activity of liver were observed . The ALT、triglyceride(TG),total cholesterol(TCH),low density lipoprotein(HCL-C),high density lipoprotei(LDL-C),TNF-α were determined respectively. The SOD ,MDA in liver were determined too. Results The liver index of therapeutic groups were markedly reduced respectively compared with those of model group(P<0.05). ALT, TG, TCH and LDL- C were markedly reduced too (P<0.01～P<0.05). But HCL-C of therapeutic groups were not significant different from that of model groups(P>0.05). The activities of SOD in liver were elevated and the content level of MDA in liver was decreased in all therapeutic groups(P<0.01～P<0.05). the content of TNF-α in serum in all therapeutic groups showed significantly decrease by comparison with model group (P<0.01), and there were significant relations of quantity and effect. The inflammation of liver of therapeutic groups were improved better than those in model group too(P<0.05),but there were not significant relations of quantity and effect. Conclusion Daotan decoction has shown definite effect on NASH. The possible mechanism is its effect of alleviation of fat accumulation、 lipid antioxidation , anti-inflammation and hepatocyte protection.

　　【Key words】 Nonalcoholic steatohepatitis Rat Daotan decoction Animal experiment

　　非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease)是指与饮酒、嗜肝病毒感染等明确的病因无关的肝脏实质细胞脂肪变性的一类肝病，单纯的脂肪变性预后良好，不进展至肝硬化;但一些NASH(nonalcoholic steatohepatitis)患者则伴有炎症坏死、纤维化或肝硬化的脂肪变性，可能进展至肝硬化，甚至引起肝癌，所以应对NASH进行及时有效的治疗，作者于2006年1至6月建立大鼠NASH模型，采用导痰汤治疗，取得明显的疗效，现报告如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 试剂及设备 (1)胆固醇(国产，由广州威佳科技有限公司提供)，猪油为市售，血清学指标用Olymbus全自动生化仪测定。(2)导痰汤：制半夏6g、胆南星3g、枳实3g、茯苓3g、橘红3g、生甘草2g、生姜3g，用自动中药煎煮机制成煎剂，含生药1g/ml，备用。(3)实验动物：采用健康、清洁级质量标准的雄性SD大鼠52只(由广州中医药大学提供)，体重180～200g，分笼喂养。

　　1.2 实验方法 (1)动物分组：实验大鼠用普通饲料正常喂养1周后，随机分为5组， A组为正常对照组，B组为模型组，C组为治疗组，其中导痰汤低剂量组(C1组)，导痰汤中剂量组(C2组)，导痰汤高剂量组(C3组)，其中B组为12只，其余均为10只。(2)模型建立及给药：参考钟岚等[1]报道的方法复制出大鼠NASH模型，4周后验证造模成功后，B组及治疗组继用高脂饲料喂养，同时B组给予生理盐水1ml/100g灌胃治疗，1次/d;治疗组给予导痰汤灌胃治疗1次/d，其中C1组0.5ml/100g，C2组1.0ml/100g，C3组1.5 ml/100g。C2组剂量相当于成人常规剂量的1/70。(3)取材：给药8周后(即实验12周)，禁食12h，以2%戊巴比妥钠溶液麻醉所有动物，迅速按常规分离血清及留取肝组织。

　　1.3 指标检测 (1)一般情况：动物饲养过程中的精神状态，活动情况，毛发光泽，食欲，大小便情况等，称体重/周。(2)肝脏标本大体观：称重并观察肝脏的大小、色泽、质地、切面情况等。(3) 血清生化测定： 各组大鼠以股动脉放血法处死。取血做各项血清学检查，用全自动生化分析仪测定血清ALT、TG、TCH、HDL-C、LDL-C，按试剂盒操作说明测定TNF-α的含量。(4) 肝匀浆生化测定：取右叶肝组织1g制成10%肝匀浆,按试剂盒说明书测定SOD、MDA含量。(5)肝脏组织病理观察：处死后立即取肝，称重后中性福尔马林固定，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜下观察，评估脂肪变性和炎症活动程度，肝细胞脂肪变性程度，按祁培宏等方法分级[2]：炎症活动度计分标准为汇管区炎症(P)，小叶内炎症(L)，碎屑样坏死(PN)，桥接坏死(BN)4项，每项根据病变程度分别计1～4分，因为PN、BN严重度与预后直接相关，因而计分2倍于其他病变，计分公式为P+L+2PN+2BN。

　　1.4 统计学处理 计量资料以(x±s)形式表示，用t检验分析，等级资料用Radit分析，采用SPSS统计软件进行统计学处理，全部双侧检验。

　　2 结果

　　2.1 造模情况 造模4W时处死B组大鼠2只，经病理切片证实，造模成功。第4周后开始治疗。

　　2.2 体重、肝指数及炎症活动度计分比较 实验过程中，4组大鼠体重增长速度一致，无动物死亡发生，各组大鼠体重、肝指数(肝湿重/体重×100%)及炎症活动度比较，见表1。

　　表1 各组大鼠体重、肝指数及炎症活动度计分比较(略)

　　注：与A组比较，*P<0.05，**P<0.01;与B组比较，△P<0.05，△△P<0.01;与C1组比较，#P<0.05，##P<0.01

　　2.3 血清ALT及脂质变化，见表2。

　　表2 各组大鼠ALT及血脂变化比较(略)

　　注：与A组比较，*P<0.05，**P<0.01;与B组比较，△P<0.05，△△P<0.01;与C1组比较，#P<0.05，##P<0.01;与C2组比较，※P<0.01

　　2.4 肝组织中SOD活性、MDA含量及血清TNF-α含量，见表3。

　　表3 肝匀浆中SOD活性、MDA含量及血清TNF-α含量变化(略)

　　注：与A组比较，*P<0.05，**P<0.01;与B组比较，△P<0.05，△△P<0.01;与C1组比较，#P<0.05，##P<0.01;与C2组比较，※P<0.05

　　2.5 肝组织病理观察：治疗8周后杀鼠，肉眼观察， 正常对照组大鼠肝脏形态正常，模型组大鼠肝脏体积明显增大，色黄有油腻感，形态饱满，质地较脆。光镜下，正常对照组大鼠肝组织切片HE染色未见明显异常，模型组大鼠所有标本的肝组织切片均可见弥漫性肝细胞脂肪变性， 脂变肝细胞超过肝小叶2/3，还可见肝小叶内和汇管区有以大量单个核细胞为主的炎性细胞浸润，以小叶内炎症为主，一部分大鼠肝组织小叶内坏死灶融合成片，3例出现碎屑样坏死，2例出现桥接坏死，NASH模型复制成功率为100%，各防治组大鼠肝组织也见一定程度的肝细胞脂肪变性， 但呈散在小灶分布，且炎症活动度计分较模型组显著下降(见表1)。各组大鼠肝细胞脂肪变性程度比较见表4。

　　表4 各组大鼠肝细胞脂肪变性程度比较(略)

　　注：与A组比较，*P<0.05，**P<0.01;与B组比较，ΔP<0.05，ΔΔP<0.01

　　3 讨论

　　NASH在病理上主要表现为肝腺泡区的肝细胞脂肪变性，以大泡性脂肪变性为主，伴有炎症坏死的肝细胞退行性改变及窦周的纤维化[3]。早期脂肪肝组织学改变仅为肝细胞脂肪变性，即单纯性脂肪肝;如果在肝细胞脂肪变性的基础上，又出现肝细胞气球样变和小叶内多个核细胞为主的炎症细胞浸润，则提示已发展至NASH，晚期，NASH可因细胞周围纤维化和中央静脉周围纤维化进展，导致桥接纤维化形成，假小叶及再生结节形成，发生脂肪性肝硬化。

　　目前研究主要集中于改善胰岛素抵抗和拮抗氧化应激，尚缺乏有确切疗效的药物，而中药复方在治疗NASH时可以更好地发挥其多方位、多靶点的优势[4]。

　　本病属于中医“积聚”、“胁痛”、“痰湿”、“肥气”等范畴，多因长期饮食不节，嗜食酒酪辛热及肥甘、致痰湿内生，湿瘀互结，肝内气血痰湿凝聚。本病属本虚标实之证，其本在脾胃亏虚，标在肝气郁滞，治宜健脾化痰，疏利肝胆，导痰汤方燥湿健脾化痰，以绝痰浊生成之源。是中医治疗脂肪肝的基础方剂。

　　本研究表明，导痰汤能显著降低NASH大鼠肝指数(P<0.05)， 血清ALT及TG、TC、LDL- C也有显著降低(P<0.01～P<0.05)，能够升高肝中SOD活性(P<0.01～P<0.05)，降低MDA含量(P<0.05)，血清中TNF-α含量显著减少(P<0.01)，且表现出一定的量效关系。因此，导痰汤能够减轻脂类在肝脏的积聚，缓解氧化应激、氧化抗氧化平衡失调，抑制致炎细胞因子的表达、降低炎症反应，保护肝细胞等作用。从病理切片看来，治疗组肝细胞脂肪变性及炎症活动度也明显减轻(P<0.01～P<0.05)。因此，导痰汤可作为治疗NASH的基础方剂，综合评估，临床应从小剂量开始使用，根据病人个体情况，酌情加大剂量。

　　【参考文献】

　　1 钟岚，范建高.非酒精性脂肪肝动物模型.国外医学消化系疾病分册，1999，19(3)：1752～1781.

　　2 祁培宏，余莉芳，刘平.消脂保肝饮抗大鼠脂肪肝作用的研究.中西医结合肝病杂志，2000，10(5)：33～35.

　　3 Bacon BR，Fanhvash MJ Janney GJ，Neuschwander TetriBA， Nonalcoholic steatohepatitis： an expander clinical entity，Gastroenterlogy，1994，107：1103.

　　4 刘成海.中药复方药理研究的几点思考.中西医结合学报，2003，1(2)：86.