瘢痕疙瘩不同部位成纤维细胞周期蛋白D1的表达

作者：梁大宁    作者单位：(广东东莞常平医院，广东东莞 523573) 　　【摘要】  目的 了解瘢痕疙瘩周边和中央部成纤维细胞中Cyclin D1表达的差异。方法 应用免疫组织化SP法检测瘢痕疙瘩成纤维细胞中Cyclin D1表达。结果 在瘢痕疙瘩周边部成纤维细胞存在Cyclin D1呈高表达，而在中央部Cyclin D1表达较低。结论 瘢痕疙瘩周边部成纤维细胞中Cyclin D1呈高表达，可能是瘢痕疙瘩异常增生并呈侵润性生长的原因之一。

　　【关键词】  瘢痕疙瘩;细胞周期蛋白D1;细胞周期

　　Cyclin D1 expression of fibroblasts in different areas of keloid

　　LIANG Daning (Changping Hospital, Dongguang 523573, China)

　　Abstract: Objective To study cyclin D1 expression of fibroblasts in the peripheral and central regions of keloid. Methods Cyclin D1 expression of fibroblasts in keloid was detected by SP method of immunohistochemistry. Results Expression of cyclin D1 in peripheral region was superior to that in central one. Conclusion Cyclin D1 overexpression of fibroblasts in peripheral area of keloid could contribute to the hyperproliferation and invasive growth

　　Key words: keloid; cyclin D1; cell cycle

　　细胞周期蛋白D1(cell cycle protein D1，CyclinD1)是近年出现的一种用于研究细胞增殖状态的标志物，CyclinD1系细胞周期从G1期向S期过渡的重要调控因子，在调节细胞周期进程和调节细胞增殖过程中起着关键作用。目前，临床上同一瘢痕疙瘩不同部位表现出明显不同的生长特性，至今仍无法为其成因提供确凿的实验依据。本文采用免疫组化法检测瘢痕疙瘩不同部位成纤维细胞CyclinD1的表达情况，旨在探讨这种生长特性的机理。

　　1 资料与方法

　　1.1 标本和分组

　　标本均取自南方医院整形外科手术患者。瘢痕疙瘩标本10例，其中男6例，女4例，年龄18～46岁，均经临床及病理诊断证实。直视下区分各标本中央部和周边部，瘢痕组织中央较平且色淡区为中央部，周围明显隆起呈暗红色区域为周边部，均经临床及病理诊断证实。同时取正常皮肤(n=12)作为对照组。标本按中间2/3和周围1/3部分分为中央部和周边部2组。

　　1.2 方法

　　标本以体积分数为10%福尔马林固定,常规石蜡包埋,4μm连续切片,作免疫组织化学SP法染色。以已知的阳性片为阳性对照,以PBS代替一抗为阴性对照。以双人盲法进行结果判别。每张切片取5个高倍视野计数100个细胞,依据染色阳性细胞所占细胞的百分比将结果分为阴性(-);标本中无阳性反应细胞或阳性细胞百分比小于10%;阳性：+(阳性细胞百分比大于10%而小于25%)、(阳性细胞百分比大于25%而小于50%)、(阳性细胞百分比大于50%)。

　　1.3 统计方法

　　数据分析采用SPSS12.0统计软件,进行多组独立样本秩和检验(KruskalWallis检验)。

　　2 结果

　　正常皮肤真皮层内成纤维细胞CyclinD表达阴性，CyclinD阳性表达为细胞核或细胞质出现棕黄色颗粒。在瘢痕疙瘩周边部，CyclinD1阳性表达的成纤维细胞数量较多，呈弥散分布，着色较深，排列紊乱;而在中央部，阳性表达的成纤维细胞明显减少，着色亦较浅，排列较规则(图1)。统计学处理：周边部与对照组及中央部比较，P值分别<0.01、0.05，差异有统计学意义;中央部与对照组比较(P>0.05)，差异无统计学意义(表1)。

　　A. CyclinD1在正常皮肤中的表达(×200);B. CyclinDl阳性表达为细胞核出现棕黄色颗粒(×400);C. CyclinD1瘢痕疙瘩周边部的表达(×100);D. CyclinD1瘢痕疙瘩中央部的表达(×200)表1 瘢痕疙瘩不同部位和正常皮肤成纤维细胞中CyclinD1的表达

　　3 讨论

　　瘢痕疙瘩以其侵润性生长、无自限性、单纯手术切除后易复发的特点，已被大多学者视为一种肿瘤而进行研究。它在组织学上以成纤维细胞增殖并分泌大量的细胞外基质为主要特征，多数学者认为成纤维细胞异常增殖是病理性瘢痕过度增生和持续存在的主要原因[1]，它的数量往往取决于它的增殖和凋亡的平衡关系的变化,而细胞增殖和凋亡则与细胞周期及细胞周期蛋白密切相关。对瘢痕疙瘩成纤维细胞的细胞周期分析表明瘢痕疙瘩中央部和周边部成纤维细胞的增殖能力和生长状况是有差别的，周边部成纤维细胞大量分布于G2、S、M期，中央部成纤维细胞主要分布在G1/G0期(静止期)[2]。也就是说，瘢痕疙瘩成纤维细胞主要是处于G2、S、M期的细胞。造成的原因是由于在细胞周期过程中，G1/S调节点失控，导致细胞过快进入S期，细胞增殖加剧。目前认为在细胞周期G1/S调控点的控制中CyclinD1起重要作用，是细胞增殖过程中意义最大的细胞周期蛋白，是细胞周期调控网络中的重要构成之一[34]。其表达有助于细胞转化，并为维持转化细胞的细胞周期进展所必需[5]，但过度表达可以缩短G1期，从而导致细胞增殖失控。因此，我们通过对瘢痕疙瘩成纤维细胞中CyclinD1的表达进行免疫组织化学检测，结果表明瘢痕疙瘩周边部表皮基底层下成纤维细胞中存在CyclinD1的高表达，并且其表达量与中央部及对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05、0.01)。由此笔者认为：CyclinD1在瘢痕疙瘩周边部成纤维细胞中的高表达，可能是通过促进成纤维细胞细胞周期进程导致成纤维细胞增殖失控，促进了瘢痕疙瘩的形成，并可能是瘢痕疙瘩侵犯局部正常组织，浸润性生长的原因之一。而在瘢痕疙瘩中央部成纤维细胞中CyclinD1的表达远低于周边部，可能是在瘢痕疙瘩的生长过程中其中央部有逐渐萎缩趋势现象的原因之一。但是为什么所有的瘢痕疙瘩标本周边部CyclinD1的表达并没有像增生性瘢痕那样，晚期发生表达下调[6]，而是均保持高表达状态呢?有研究表明，各种细胞增殖性疾病包括众多类型肿瘤与CyclinD1基因突变密切相关[7]。那么，一直被认为是体表良性肿瘤之一的瘢痕疙瘩，其周边部成纤维细胞CyclinD1高表达，有可能是由于CyclinD1的基因突变引起的，而且这可能是瘢痕疙瘩有癌变倾向的原因之一。但是否确实如此及具体的机制如何还有待我们进一步去探讨。

　　广 东 医 学 院 学 报 2009年第27卷 瘢痕疙瘩周边部CyclinD1的高表达提示CyclinD1是瘢痕疙瘩异常生长的重要因子或者可以称为终末效应因子。由此我们设想，如果病理性瘢痕成纤维细胞中CyclinD1存在着高表达，并因此而造成了细胞早期的异常增殖，那么应用相关技术阻止或抑制CyclinD1基因的表达[89]，减少CyclinD1蛋白合成，从而抑制成纤维细胞的细胞周期早期增殖，就有可能达到早期预防和治疗瘢痕增生的目的。

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　　[3]DumanScheel M，Weng L，Xin S，et al.Hedgehog regulates cell growth and proliferation by inducing cyclin D and cyclin E [J].Nature，2002，417(6886)：299304.

　　[4]张玲，刘宏亮，张雪，等.瘢痕组织中细胞周期蛋白D1表达特征对瘢痕增生程度的评估[J].中国临床康复，2005，9(6)：9091.

　　[5]Schuuring E.The involvement of the chromosome 11q13 region in human malignancies：cyclinD1 and EMS1 are two candidate oncogenesa review[J].Gene，1998，159(1)：8396.

　　[6]黄谦,梁大宁,罗少军，等.cyclinD1在增生性瘢痕不同时期的表达及意义[J].广东医学院学报，2005，23(3)：238239.

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　　[8]梁大宁，高建华，鲁峰.病理性瘢痕成纤维细胞生长与小干扰RNA分子抑制细胞周期蛋白D1表达的影响[J].中国组织工程研究与临床康复，2008，12(2)：241244.

　　[9]梁大宁，高建华，鲁峰.小干扰RNA抑制CyclinD1表达诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡研究[J].中华整形外科杂志,2008，24(3)：276279.