成骨细胞培养微环境对Hela细胞STAT3的转录表达及细胞增殖的调控作用
发表时间：2014-01-21 浏览次数：518次
特定肿瘤微环境对肿瘤的发生发展具有重要的调控作用，阐明不同微环境与肿瘤间的相互调控机理对于靶向机体微环境寻找肿瘤防治方法具有十分重要的意义。宫颈癌是威胁女性生命健康的第二大恶性肿瘤。晚期宫颈癌会发生骨转移，此时，成骨细胞微环境对于转移瘤的定居和增殖至关重要。本研究初步探讨了成骨细胞微环境（OBM）对宫颈癌细胞增殖的影响，并研究了其对重要的促宫颈癌因子STAT3表达的调控。
1 资料与方法
1.1 一般资料：12周龄SPF级SD大鼠5只购自广东医学院动物中心，Hela细胞为本所保存，DMEM培养基及胎牛血清购自 Gibco，CCK-8试剂盒购自上海生工。
1.2 方法：大鼠处死后75%乙醇浸泡10 min，取其胫骨和股骨分离培养大鼠成骨细胞，取其培养液与DMEM血清培养基按照1:1比例混合，培养Hela细胞。分为对照组 （ 添 加 正 常 D M E M 培 养 液 ） 与 实 验 组 （ 添 加 成 骨 细胞混合培养液）。于24 h、48 h、72 h三时间点，采用 Realtime PCR检测STAT3的mRNA水平改变。其中STAT3的引物序列为：Forward：TGTGCGTATGGGAACACCTA； Reverse：AGAAGGTCGTCTCCCCCTTA；Forward： G T G T C A G AT C A C AT G G G C TA A A ； R e v e r s e ： CTGGAGGCTTAGTGCTCAAGAT CCK-8法检测Hela细胞的增殖。实验过程中每组均3个复孔。重复3次。实验组细胞增殖率= （实验组吸光度值/对照组吸光度值-1）×100%。
2 结果成功分离成骨细胞，见图1，并取其培养液作用于宫颈癌Hela 细胞。与对照组相比，实验组STAT3 mRNA水平升高，在24 h、 48 h、72 h分别升高约28.2%、37.5%、32.1%，见图2，与对照组间差异有统计学意义（P＜0.05）。实验组细胞增殖能力较对照组亦有不同程度增强，在24 h、48 h、72 h分别升高约11.7%、29.5%、 24.6%，与对照组间差异有统计学意义（P＜0.05）。
3 讨论近年来，全世界每年有多于53万的宫颈癌新发病例及27万的死亡病例，并且80%的病例发生于发展中国家[1]。宫颈癌最为重要的促癌因子之一是STAT3。STAT3属于STAT家族，它以磷酸化形式（p- STAT3）被激活，并通过参与细胞周期激活靶基因的表达，控制肿瘤细胞因子的分泌调控血管生成与免疫反应[2]。Yang 等发现，p-STAT3在正常宫颈上皮组织及部分宫颈上皮内瘤变组织和宫颈鳞癌组织中表达增高[3]；在HeLa、SHia和HT-3等子宫颈癌细胞株中也存在p-STAT3的高表达。STAT3能够通过激活一系列下游信号如VEGF、survivin、cyclinD1、MMP-9、P53、Skp2等发挥其促进肿瘤发生发展的功能[4]。亦有研究表明，STAT3在宫颈癌中的表达具有重要意义，该因子能够提高宫颈癌预后判断的可靠性。因此，本研究选择肿瘤微环境以及STAT3作为调控对象。笔者发现，OBM可上调STAT3的转录表达并促进Hela细胞增殖，虽然其具体机制有待深入研究，但是这一结果初步为将来靶向肿瘤微环境提供了一种新的借鉴途径，有利于加深对肿瘤及其生长微环境相互作用的理解和认识。
4 参考文献
[1] Sahasrabuddhe VV,Parham GP,Mwanahamuntu MH,et al.Cervical Cancer Prevention in Low and Middle-Income Countries:Feasible,Aff ordable,Essential[J].Cancer Prev Res,2012,5(1):11.
[2] 杨华静,吴晓梅,万小平.STAT3在妇科肿瘤中的研究进展[J].肿瘤,2010,30(11):985.
[3] Yang SF,Yuan SS,Yeh TT,et al.Positive association between STAT3 and Ki-67 in cervical intraepithelial neoplasia[J].Kaohsiung J Med Sci,2006,22(11):539.
[4] 靳亚妮,王海琳,侯大乔.STAT3信号转导通路调控人宫颈癌Hela 细胞增殖、凋亡的机制[J].中国妇幼保健,2011,26(29):4591.
[收稿日期：2013-11-13 编校：郑英善]
