33例骨髓增生异常综合征的染色体核型分析

　　作者：何涛　　作者单位：合肥　安徽医科大学第一附属医院血液内科

　　【摘要】目的分析染色体核型异常在骨髓增生异常综合征(MDS)诊断、预后评估中的价值。方法对33例MDS患者按常规行骨髓穿刺，进行形态学检查，同时对患者骨髓细胞进行染色体培养，采用直接法、短期培养法和RHG显带技术制备染色体，进行核型分析。结果33例MDS患者中，染色体核型异常者15例，异常核型检出率45.4%，其中MDS-RA 1例占3%，MDS-RARS 1例占3%，MDS-RCMD 4例占12.1%，MDS-RAEB1 6例占18.2%，MDS-RAEB2 3例占9.1%。MDS-RAEB1、2较RA、RARS、RCMD检测到更高的异常核型比例。 结论　MDS的染色体核型异常，各型之间差异较大，染色体核型分析对MDS的诊断、分型及预后评估有重要价值。

　　【关键词】 骨髓增生异常综合征; 染色体异常核型; 诊断预后

　　[Abstract]　Objective　To analyze the value of chromosome abnormal karyotype in diagnosis and prognosis of myelodysplastic syndrome (MDS).Methods　33 cases of MDS patients were carried out routine bone marrow aspiration and to be morphologically checked， while the bone marrow cells of the patients were chromosomally cultured， using direct method ，brief culture of cells and R- banding techniques， then karyotype analysis was performed.Results　Among 33 cases of MDS patients,15 cases were found with chromosomal abnormal karyotype， the abnormal karyotype detection rate was 45.4%， in which there were 1 case (3%) of MDS-RA， 1 case (3%) of MDS-RARS， 4 cases (12.1%) of MDS-RCMD， 6 cases (18.2%) of MDS-RAEB1， and 3 cases (9.1%) of MDS-RAEB2. The abnormal karyotype detection rate in MDS-RAEB1 and MDS-RAEB2 was much higher than that in RA， RARS， RCMD.Conclusion　Karyotype abnormalities are the larger differences between various types of karyotype analysis of MDS， so karyotype analysis is very useful for diagnosis，typing and prognosis evaluation in MDS.

　　[Key words]　Myelodysplastic syndrome;Chromosomal abnormality;Prognosis evaluation

　　骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome，MDS) 是一组异质性、获得性造血干细胞和(或)祖细胞的克隆性疾病，特点是伴有血细胞减少的骨髓病态造血和无效造血及有向白血病转化的危险[1,2]。常规细胞遗传学检测发现为40%～70%的原发性骨髓增生异常综合征患者在初诊时存在染色体异常[3]。我们对33例MDS患者的细胞遗传学、细胞形态学及相关临床资料进行分析，探讨染色体异常克隆在MDS不同型别中的分布及预后评估中的作用。

　　1　对象与方法

　　1.1　研究对象

　　33例患者均为我院2009年1月至2010年10月住院及门诊经骨髓细胞形态学确诊的骨髓增生异常综合征患者，取骨穿标本进行细胞形态学和染色体检查。其中男性20例，女性13例，年龄 21～85岁，中位年龄61岁。

　　1.2　方法

　　1.2.1　细胞形态学检查

　　骨髓涂片瑞姬氏染色，参照WHO的分型标准分析诊断。

　　1.2.2　染色体制备

　　在无菌条件下抽取MDS患者骨髓4 ml，肝素抗凝，有核细胞计数后按1×106/ml细胞密度注入含有肝素的RPMIl640培养基中，采用直接法和24 h培养法，将培养瓶放入37℃温箱中持续培养1 h和24 h，标本处理后加入秋水仙素作用1 h以阻留中期细胞，用0.075 mol?L-1氯化钾低渗溶液低渗处理30 min，以3∶1甲醇及冰醋酸溶液固定3次，制成骨髓细胞悬液，制片R显带染色。

　　1.2.3　染色体分析

　　显带后行核型分析，每例分析10～20个中期分裂象，按《人类细胞遗传学国际命名体制》(ISCN2005)[4]进行染色体核型描述。至少2个细胞有同样的染色体增加或结构重排，或者3个细胞有同样的染色体丢失，方可确认1个异常克隆。

　　2　结果

　　2.1　形态学结果分析

　　33例MDS患者中，MDS-RA(4例)，MDS-RARS(5例)，MDS-RCMD(10例)，MDS-RAEB1(10例)，MDS-RAEB2(4例)。

　　2.2　染色体结果分析

　　33例MDS患者中，5例未见分裂象，15例检出染色体核型异常，异常核型检出率45.4%，其中染色体数目异常者7例，占21.2%(7/33)，包括+8、+18、+21、-10、-15、-19;结构异常者8例，占24.2%(8/33)，其中8q-3例、i(8q)1例、5q-1例。具体核型描述见表1。表1　15例伴核型异常的MDS患者资料

　　2.3　染色体核型异常与MDS亚型之间的关系

　　33例MDS患者染色体异常核型检出率为45.4%,15例异常核型中，RA 1例占25%(1/4)、RARS 1例占20%(1/5)、RCMD 3例占30%(3/10)、RAEB-1 6例占60%(6/10)、RAEB-2 3例占75%(3/4)，可见RAEB-1和RAEB-2核型异常所占比例较高，高于RA、RARS、RCMD的核型异常，表明染色体异常克隆与MDS的亚型有相关性，与原始细胞比例呈正相关。通过染色体核型分析，从形态学诊断RCMD型中分出5q-型1例。

　　3　讨论

　　MDS是造血干细胞的克隆性疾病，与原发性急性髓细胞白血病相比，MDS患者染色体平衡易位很少，非平衡性染色体缺失如：3q-，-5,5q-，-7，-18，-19，+8，+9，+21,11q-，12p-，13q-， 20q-及复杂核型较多见[5]。在本文33例MDS患者中，MDS的异常克隆检出率为45.4%，其中RAEB-1和RAEB-2的异常检出率分别为60%和75%，均高于RA(25%)、RARS(20%)、RCMD(40%)的异常检出率，本文MDS总体异常检出率与相关文献报道较一致[3]。

　　+8是MDS中最常见的染色体数目异常，本文15例MDS患者染色体的异常克隆中，有2例为+8的染色体异常克隆，占13.3%(2/15)，与国际报道的比例(10%)相近[6]。Haase[7]认为，5q-是MDS最常见的异常核型，约占异常核型的30%，而本文中5q-只有1例(1/15)占6.7%，远低于文献报道，这可能与病例较少或该核型地区分布种族差异等因素有关。

　　本文分析结果显示，MDS患者骨髓核型异常与MDS亚型有相关性，和骨髓中原始细胞比例呈正相关，原始细胞增多的MDS(RAEB-1和RAEB-2)染色体核型异常高达60%和75%。染色体异常发生率高的MDS大多不易缓解，有的很快转变为急性白血病，且与存活期有关。本文15例染色体异常克隆的MDS患者中，有5例在半年内转化为急性白血病(1例RAEB-2转化为M5b,2例RAEB-1转化为M2a,1例RAEB-1转化为M6,1例RCMD转化为M5b，)经多疗程化疗后，均未缓解。

　　综上所述，MDS患者具有较高的染色体异常，其检测对MDS诊断、治疗、预后判断具有重要价值，应进行常规检测。

　　【参考文献】

　　[1]　Brunning RD，Bennett JM，Flandrin G.Myelodysplastic syndromes：Introduction// Jaffe ES，Harris NL，Stein H，eds.World Health Oganization Classification of Tumours：Pathology&Genetics.Tumours of Haematopoietie and Lymphoid Tissues.Lyon：IARC Press,2001：142-156.

　　[2]　代志明，夏海龙.骨髓增生异常综合征的治疗进展.安徽医学，2010,3l(4)：404-407.

　　[3]　Babicka L，Ransdorfova S，Brezinova J，et al.Analysis of complex chromosomal rearrangements in adult patients with MDS and AML by multicolor FISH.Leuk Res,2007,31(1)：39-47.

　　[4]　Shaffer LG，Tommerup N.ISCN(2005).An International System for Human Cytogenetic Nomenclature. Switzerland：Karger Basel publication,2005,55.

　　[5]　Hildebrandt B，Beier M.Molecular cytogenetic profiling of complex karyotypes in primary myelodysplastic syndromes and acute myeloid leukemia. Cancer Genet Cytogenet,2006,165(1)：51-63.

　　[6]　Olney HJ，Le Beau MM.The cytogenetics of myelodysplastic syndromes.Best Pract Res Clin Haematol,2001,14(3)：479-495.

　　[7]　Haase D.Cytogenetic features in myelodysplastic syndromes.Ann Hematol,2008,87(7)：515-526.