抗环瓜氨酸肽抗体对类风湿性关节炎诊断的临床应用

　　作者：李云春,钟利,张玉蓉,唐秀英　　作者单位：宁夏医科大学附属医院医学实验中心，银川 750004

　　【摘要】 为了解类风湿关节炎(rheumataid arthritis，RA)患者血液中抗环瓜氨酸肽(CCP) 抗体、抗角蛋白抗体 (AKA)、抗核抗体(ANA)在RA中的诊断价值，选择RA患者239例， 其他自身免疫性疾病220例，健康对照组40例，用间接免疫荧光法测定AKA、ANA抗体;ELISA法测定抗CCP抗体。结果 RA组抗CCP抗体明显高于其他自身免疫性疾病组和健康对照组(P<0.01)，病例组AKA、ANA阳性率明显高于健康对照组，差异均有统计学意义(P<0.01)。抗CCP抗体、AKA及ANA对RA具有良好的特异性诊断价值。抗CCP抗体与AKA有相关性 ，但不完全重叠。抗CCP抗体可视为RA的血清学诊断指标。

　　【关键词】 抗环瓜氨酸肽抗体;关节炎;抗角蛋白抗体;抗核抗体(ANA)

　　类风湿关节炎(rheumataid arthritis， RA)是一种致残性，以慢性关节炎为特征的系统性自身免疫性疾病， 该病如不及时诊断治疗， 即可出现软骨和骨的侵蚀性病变， 造成关节结构破坏， 最终发展成为关节畸形、强直， 导致不同程度的残疾[1]。现行的RA诊断标准缺乏特异性实验室指标，只能根据临床症状和X线表现诊断， 从而导致病人误诊和漏诊， 因此人们一直在寻找特异、敏感的实验室指标以助诊断。2000年Schellekens等[2]以合成的环瓜氨酸肽(cyclic-citrullinated peptide，CCP) 作为底物用ELISA 方法检测RA血清中的抗体，发现此抗体对RA具有很高的特异性和敏感性，可用于RA的诊断。最近有学者提出抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)与RA 严重程度及预后密切相关，但尚未得到进一步的确证[3- 4]。本实验拟通过检测RA患者、其他疾病患者及正常人中抗CCP 抗体的浓度，探讨抗CCP 抗体对RA 的诊断价值及其临床意义。

　　1 资料与方法

　　1.1 对象和分组

　　1.1.1 类风湿关节炎组(RA组)239例

　　为宁夏医科大学附属医院风湿科门诊及住院的患者。均符合1987 年美国风湿病协会(ACR) 修订的RA 诊断标准[4]。所有患者中男98例，女141 例，年龄16～75 岁，平均45 岁。

　　1.1.2 其他自身免疫性疾病组(其他疾病组)220 例

　　包括系统性红斑狼疮(SLE)120例，结缔组织病(OA)23例， 痛风26例， 原发性干燥综合征51例。所有病例均符合国内国际相应的诊断标准。其中男86例，女134 例，年龄14～68 岁， 平均年龄41岁。

　　1.1.3 健康对照组40 例

　　均来自宁夏医科大学附属医院健康志愿者。其中男12例，女28例，年龄23～55 岁，平均39岁。

　　1.2 试剂和方法

　　1.2.1 试剂

　　抗CCP抗体;抗角蛋白抗体(AKA);抗核抗体 (ANA) 试剂盒，均购自德国欧蒙公司。

　　1.2.2 方法

　　采取外周静脉血4mL于非抗凝的灭菌离心管中，室温下静置1～2h， 离心10min( 3000r/min)后，吸取上层血清，置于- 20℃保存备用。抗CCP 抗体的检测采用酶联免疫吸附法(ELISA)，按试剂盒说明书操作。AKA、ANA采用间接免疫荧光法按试剂盒说明书操作。

　　1.3 统计学方法

　　数据分析计数资料以例数和百分率进行描述，计量资料以均数±标准差表示，组间的比较采用t和χ2检验。

　　2 结果

　　2.1 病例组与健康对照组抗CCP抗体测定值比较

　　抗CCP抗体的正常值<5RU/mL，RA组抗CCP抗体(57.9±22.6)明显高于其他自身免疫性疾病组和健康对照组(P<0.01)。

　　2.2 病例组与健康对照组各项自身抗体阳性率

　　AKA阳性率(>1∶100)：RA为56.8%，其他自身免疫性疾病的阳性率分别为5%、4.3%、11.5%、5.8%，健康对照组2.5%;ANA阳性率(>1∶320):RA组为 26.6%，其他自身免疫性疾病的阳性率分别为90.8%、39.1%、46.2%、62.7%，健康对照组7.5%;病例组AKA、ANA阳性率明显高于健康对照组，差异均有统计学意义(P<0.01)。

　　3 讨论

　　抗CCP抗体主要为IgG类抗体，近年来国外研究发现APF、AKA的共同抗原族可能是CCP。1998年Schelekens等[2]、Kroot等[3]分别根据角蛋白微丝蛋白(filaggrin)的cDNA序列合成多肽，证实瓜氨酸是RA特异的抗filaggrin抗体识别表位的必要组成。有研究显示用ELISA 法检测的抗CCP 抗体对RA 具有高度的特异性(96.0%以上)，虽然敏感性一般波动于45.0%～80.0%之间， 但仍明显高于其他特异性的RA 自身抗体[6-7]。在本研究中， RA组抗CCP抗体测定值高于其他自身免疫性疾病和健康对照组;其AKA阳性率亦高于其他自身免疫性疾病和健康对照组，说明抗CCP抗体、抗核抗体及抗角蛋白抗体对RA具有一定的实验室诊断意义，抗核抗体在SLE、痛风、原发性干燥综合征患者中具有较高的阳性率，其具体原因有待进一步探讨。作为一种新的高特异性和高阳性预报率的抗体，抗CCP 抗体可以成为辅助诊断RA 的一个指标。根据国外文献报道，抗CCP 抗体似乎与疾病的严重程度，特别是影像学的侵蚀性改变密切相关[2-4]。研究发现抗CCP 抗体阳性的患者晨僵时间明显长于抗CCP 抗体阴性的患者，而且X 线Ⅱ期及Ⅱ期以上患者比例亦明显高于抗体阴性患者，认为抗CCP 抗体阳性患者比抗CCP 抗体阴性患者骨质破坏更严重[5-7]。文献推测其原因可能是由于抗CCP 抗体阳性患者的滑膜液中含有大量的CCP 特异性B 细胞，它们在某种外来刺激的作用下发生了抗原诱导的突变，自动产生抗CCP 抗体，导致局部抗CCP 抗体聚集，引起骨质破坏，而抗CCP 抗体阴性患者的B 细胞却不能表明抗CCP 抗体与RA 的发病机制可能存在一定的关系，确切的支持点尚有待进一步研究阐明[8-9]。因此如能在疾病早期检测到抗环瓜氨酸肽抗体、抗角蛋白抗体， 并对患者早期联合应用改善病情药物治疗，或许可以延缓关节破坏的发生，减少致残率，提高患者的生活质量。

　　【参考文献】

　　[1]范列英.类风湿性关节炎血清学诊断指标的研究进展[J]. 中华检验医学杂志，2003， 4: 632-633.

　　[2]Schellekens GA，Visser H， DE Jong BAW. Diagnostic properties of rheumatoid arthritis antibodies recognizing a cyclic citrullinated peptide[J]. Arthritis Rheum， 2000， 43: 155- 163.

　　[3]Kroot E-J JA， DE Jong BAW， VAN Leeuwen MA， et al.The prognostic value of anti- cyclic citrullinated peptide antibodyin patients with recent- onset rheumatoid arthritis [J]. Arthritis Rheum， 2000， 43: 1831-1835.

　　[4]O Meyer，C Labarre， M Dougados，et al. Anticitrullinated protein/peptide antibody assays in early rheumatoid arthritis for predicting five year radiographic damage[J]. Annals of the Rheumatic Diseases， 2003， 62:120-126.

　　[5]Arnett FC， Edworthy SM，Bloch DA， et al. The American Rheumatism Association 1987 revised criteria for the classification of rheumatoid arthritis[J]. Arthritis Rheum， 1988， 26: 315-324.

　　[6]VAN Boekel M，Vossenaar ER，VAN Den Hoogen FHJ， et al. Autoantibody systems in rheumatoid arthritis: specificity， sensitivity and diagnostic value[J]. Arthritis Res， 2001， 47: 1089- 1093.

　　[7]蔡细英，袁柳，谭慧清.AKA、APF、抗CCP检测在来类风湿性关节炎诊断中的应用[J].医学临床研究，2005，12(22)：1764-1765.

　　[8]Reparon-Schuijt CC，VAN Eschwje，VAN Kooten C， et al. Secretion of anti- citrulline- containing peptide antibody byB lymphocytes in rheumatoid arthritis[J]. Arthritis Rheum， 2001， 44: 41-47.

　　[9]Jacques-Eric Gottenberg，JEAN Sibilia，Francoiseaucouturier，et al. Positve Anti- filaggrin Antibodies Shouldnot Exclude the Diagnosis of Primary Sjogren's Syndrome [J]. Arthritis Rheum， 2002， 45(suppl): 926.