生殖道感染与不孕不育的关系

　　生殖道淋球菌(NG)，沙眼衣原体(CT)和解脲支原体(UU)通过性传播所致的泌尿生殖道感染日益增多，且有逐年上升趋势[1]。它们是影响人类生殖健康的重要病原体，其感染者是不孕不育的高发人群[2]。随着分子生物学诊断技术的迅猛发展，检测泌尿生殖道病原体感染已由培养法、快速免疫法、PCR法发展到实时荧光定量PCR法。该技术集PCR技术的高效、灵敏、特异和光谱技术敏感性及精确定量的特点[3]，全程全封闭反应，从根本上解决了PCR扩增产物污染的问题，具有高灵敏度、高特异性、高精确性、高效率、污染小等特点，在检测技术上具有划时代的意义，为临床及科研提供了及时、准确、可靠的依据。本文应用实时荧光定量PCR技术，对来本院就诊的1038例不孕不育患者NG、CT、UU检测结果进行分析，现将结果报道如下。

1　资料与方法

1.1　一般资料　选择来本院就诊的1038例不孕不育患者为实验组，平均年龄(29.12±3.16)岁，其中151对为不孕不育夫妇;选择1012例正常孕前检查者或健康体检者为对照组，平均年龄(28.12±2.96)岁。两组年龄比较差异无统计学意义(p>0.05)，具有可比性。

1.2　仪器与试剂　ABI-7500型全自动荧光定量PCR仪，NG-DNA，CT-DNA及UU-DNA检测试剂均由中山大学达安基因股份有限公司生产。

1.3　标本收集与处理　取消毒棉拭子，将宫颈外口分泌物拭净，将女性专用的一次性无菌棉拭子伸入宫颈管内，沿管壁旋转3周采取分泌物并保存于配套管中;男性用专用男性拭子插入尿道2～75px，旋转数周，停顿30s，取出放入无菌试管中，以上均由专科医生操作，取好标本立即密闭送检。在生物安全柜内取出棉拭子放入装有1mL无菌生理盐水的1.5mLEp-pendorf管中，充分悬浮后取出拭子弃去，12000r/min(离心半径200px)离心3min，弃上清留沉淀备用。样本处理及DNA提取严格按照试剂说明书由专业技术人员操作。

1.4　DNA的扩增与结果判读　分别吸取2μL样品DNA、质控品DNA和阳性定量参考品于扩增管中，8000r/min(离心半径200px)离心数秒后上机扩增，每次检测均设阳性、阴性对照和空白对照。扩增参数为：93℃预变性120s;93℃45s→ 55℃60s10个循环，作为荧光本底信号;93℃30s→55℃ 45s30个循环，55℃时采集荧光。扩增结果以Ct值表示，根据阳性定量参考品扩增结果分析并调节基线和阈值，使标准曲线图达到最佳，线性相关系数(r)>0.97。若增长曲线不呈S型或Ct≥30，则判样品的DNA含量小于检测极限，结果为阴性;如果增长曲线呈S型且Ct值小于30，结果为阳性。

1.5　统计学处理　采用SPSS16.0统计软件进行统计学分析，3种病原体PCR检测结果采用非参数犣检验，阳性率采用 χ 2检验，不孕不育组夫妻间感染CT、UU阳性率比较采用相关性分析，以p<0.05为差异有统计学意义。

2　结　　果

2.1　实验组与对照组NG、CT和UU检测结果比较　实验组UU-DNA平均拷贝数最高(1.11E+08)，阳性率为63.2%(317/502);其次为CT，CT-DNA平均拷贝数为6.06E+06，阳性率为38.1%(177/464);同时感染CT和UU的阳性率为34.9%(109/312);三者中NG-DNA平均拷贝数最低，为9.81E+05，阳性率为33.3%(24/72)。对照组UU-DNA平均拷贝数为1.22E+03，阳性率为21.0%(102/485);CT-DNA平均拷贝数为7.20E+02，阳性率为22.6%(44/195);同时感染CT和UU的阳性率为8.87%(25/282);NG-DNA平均拷贝数为1.08E+03，阳性率为16.0%(8/50)。与正常对照组相比，实验组NG、CT和UU3种病原体载量均高于对照组(p<0.05)。

2.2　实验组夫妻间感染CT、UU的相关性分析　151对实验组夫妻间男性和女性CT阳性率分别为42.58%、44.27%，UU阳性率分别为61.05%、64.08%。为进一步明确夫妻间一方感染CT或UU是否会对另一方产生影响，作者进行了实验组夫妻间感染CT、UU阳性率的相关性分析，夫妻间感染CT、UU阳性率存在相关性(rCT=0.852;rUU=0.762)。见表1、2。

3　讨　　论随着社会交往日益频繁，人们的性意识在逐渐发生变化，不洁性行为导致的各种泌尿生殖道疾病也快速蔓延。同时，人们对性卫生知识缺乏，自我保护意识淡薄，感染泌尿生殖道疾病的机会也随之增多，各种泌尿生殖道疾病严重威胁着人类身体健康。据统计，全球育龄夫妇中约8%～12%会出现不孕不育，与生殖道感染有关的不孕占20%～60%[4]，而NG、CT和UU是引起生殖道炎症的重要病原体。NG为革兰阴性双球菌，是人类淋病的病原菌。NG以单个植入方式破坏精子，其可直接黏附于精子细胞膜中，破坏膜结构的完整性，进而侵入到精子内部破坏精子的细胞结构，影响精子密度、活动率、运动能力，严重时可致精子死亡，是影响男性生殖能力，造成不育的重要因素。另外，炎症也可致输卵管阻塞、粘连，影响黏膜上皮正常的分泌机能和正常的纤毛运动，也是致不育的重要原因。本文中实验组患者NG阳性率为33.3%，NG-DNA扩增平均拷贝数为9.79E+05，明显高于对照组16%和1.04E+03，说明NG感染与不孕不育存在一定关系。CT为革兰阴性病原体，有始体和原体两种发育形式，其中原体有很强的感染力，它不侵入鳞状上皮细胞而偏向于柱状上皮细胞，宫颈是它的主要靶器官[5]。CT入侵人体后主要存在于宫颈、尿道分泌物、精液、粪便及易感宿主细胞内，通过亲密接触、性交及直接的体液交换来传播[6]。欧美国家CT感染在泌尿生殖感染已超过淋球菌而成为性传播疾病的首位病原菌，中国人群中CT感染率也有上升趋势。本研究发现，464例不孕不育患者CT阳性者有177例(阳性率达38.1%)，CT和UU混合感染阳性率达34.9%，均高于张木坤等[7]和韦红[8]报道。CT感染后导致生殖腔道的炎症、粘连和阻塞，使黏膜细胞坏死、输卵管纤毛运动停滞，生殖道黏膜受损使免疫细胞有可能直接接触精子而产生抗精子抗体，引起不孕。CT感染后也可使宫颈黏液的葡萄糖含量降低，影响进入宫颈管中的精子活力而影响受孕;另外，男性前列腺或附睾感染CT后精浆的生理功能受到影响也可引起男性不育[9]。本文中不孕不育患者CT-DNA扩增平均拷贝数为5.56E+06，明显低于对照组，提示CT感染亦与不孕不育有关。UU是一种界于细菌和病毒之问的原核微生物，是目前发现的能够在无生命体培养基中生长繁殖的最小微生物。它可寄生于人泌尿生殖道，在妇女下生殖道寄生率可高达80%[10]。UU主要通过性接触传播，黏附于泌尿生殖道细胞表面，杀伤细胞，引起宫颈炎、子宫内膜炎、输卵管炎等。近年来，UU感染与不孕症的关系越来越受到人们的重视。本文502例不孕不育患者中317例为阳性，阳性率高达63.15%，UU-DNA扩增平均拷贝数达1.11E+08，且80%以上的患者均有外阴瘙痒、不适等症状。UU引起女性不孕主要机制是造成子宫内膜的慢性炎症，此外，这些感染诱发的变态反应和自身免疫也可能是不育的因素[11]。UU除可以黏附于巨噬细胞表面外，还可以黏附于精子的表面，从而阻止精子运动，其产生的神经氨酸酶样物质，可干扰精子与卵子的结合，这也是UU引起不孕的原因之一[13]。本研究发现，151对实验组夫妻间男性和女性CT阳性率分别为42.58%、44.27%，UU阳性率分别为61.05%、64.08%。为进一步明确夫妻间一方感染CT或UU是否会对另一方产生影响，作者进行了相关性分析，结果显示夫妻间感染CT、UU阳性率存在相关性(rCT=0.852，rUU=0.762)。因此若发现夫妇中一方UU或CT阳性，均应常规检查对方CT或UU。综上所述，NG、CT、UU生殖道感染率有上升趋势且与不孕症有密切关系。对不明原因的不孕不育症患者及其配偶进行NG、CT和UU的检测是不孕不育症的诊断的必要手段。女性UU、CT感染的常见部位是子宫颈，且常无自觉症状，不易引起注意，常反复迁延，造成不可逆的病理改变。因此，早期诊断并尽早治愈会对优生优育有积极帮助。

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(收稿日期：2013-11-02)