单精子卵浆内注射应用于前周期常规体外受精失败和低受精的治

　　【摘要】 目的: 分析常规体外受精(IVF)完全受精失败和低受精随后周期行单精子卵胞浆内注射(ICSI)的临床结果。方法: 2001年10月至2007年5月，30例IVF完全不受精和12例IVF低受精不育夫妇分别在随后周期采取38个周期(A组)和17个周期(B组)ICSI治疗，同期因男性因素行第1周期ICSI治疗的281个周期作为对照(C组)，比较三组的正常受精率、优质胚胎率、胚胎种植率和临床妊娠率。结果: 三组间正常受精率、优质胚胎率和临床妊娠率差异均无显著性;A组的胚胎种植率为14.3%，明显低于B组和C组(29.5% 和26.0%，P均<0.05)。结论: IVF低受精患者在随后周期改行ICSI可获得理想的临床治疗效果，IVF完全受精失败患者随后周期改行ICSI的胚胎种植率较低，表明其完全受精失败至少部分原因是由于卵子异常而导致胚胎发育潜能的下降。

　　【关键词】 受精 体外 精子注射 细胞质内 胚胎移植

　　The clinical outcomes of ICSI in patients with previous fertilization failure or low fertilization rate after conventional IVF ZHOU Wei，HUANG Xue-feng，ZHOU ying，ZHANG Wei，XIAO Shi-quan. Reproductive Medicine Center，the First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical College，Wenzhou，325000

　　Abstract: Objective: To analyze the clinical outcomes of ICSI in patients with previous fertilization failure or low fertilization rate after conventional IVF. Methods: From Oct. 2001 to May. 2007， 38 ICSI cases with previous total fertilization failure after conventional IVF were allocated to group A. 17 ICSI cases with previous low fertilization rate after conventional IVF were allocated to group B. And 281 ICSI cycles for male factor infertility in the same period were allocated to group C as control group. The fertilization rate，high quality embryo rate，implantation rate and clinical pregnancy rate of three groups were retrospectively analyzed. Results: There were no significant differences in fertilization rate，high quality embryo rate and clinical pregnancy rate among three groups，but implantation rate of group A (14.3%) was significantly lower than that of group B and C(29.5% and 26.0%). Conclusion: For patients who have previous low fertilization rate after conventional IVF，ICSI is a good choice to improve clinical outcomes. But for patients who have previous total fertilization failure after conventional IVF，the implantation rate of ICSI embryos is lower than that of the others. It suggests fertilization failure be due at least partly to occyte abnormity，which results in the descent of embryo development potential.

　　Key words: fertilization，in vitro;sperm injection，intracytoplasmic;embryo transfer

　　约5%～10%的常规体外受精(conventional in vitro fertilization，IVF)治疗周期出现完全受精失败和低受精[1]，其原因常常难以明确。尽管随后周期采用单精子卵胞浆内注射(intracytoplasmic sperm injection，ICSI)常可避免受精失败，但进一步的临床结果仍有争议。本中心自2001年10月至2007年5月共对30例IVF完全不受精和12例IVF低受精不育夫妇分别在随后周期采取38个周期和17个周期的ICSI治疗，现将结果报告如下。

　　1 资料和方法

　　1.1 研究对象 2001年10月至2007年5月，30例IVF完全不受精和12例IVF低受精(受精率低于25%)不育夫妇分别在随后周期采取38个周期(A组)和17个周期(B组)ICSI治疗，两组的男方精液正常(WHO分析标准)。将同期因男性因素采用射精精子行第1周期ICSI治疗的连续281个周期作为对照(C组)，男性因素的标准为精子密度<10×106/ml，活动率<30%。三组均除外获卵数少于5个的病例，以避免随机的IVF受精失败。

　　1.2 方法

　　1.2.1 促排卵方案、卵泡监测、阴道B超取卵、精液处理、IVF受精和ICSI的操作及胚胎培养观察的过程均按本中心常规方法进行[2，3]。

　　1.2.2 优质胚胎评估：取卵后第2～第3天根据卵裂球大小、形态、碎片进行评分。其中A级：卵裂球大小均匀或轻度不均，无核碎片≤5%;B级：卵裂球大小均匀或轻度不均，无核碎片≤20%。将培养2 d细胞数≥3个的和培养3 d细胞数≥6个的A、B级胚胎定义为优质胚胎[4]。

　　1.2.3 胚胎移植和妊娠试验：取卵后第2或第3天，选择质量最好的胚胎，每周期移植≤3个胚胎。所有患者取卵日起给予黄体支持，胚胎移植2周后检查血清人绒毛膜促性腺激素(hCG)含量，5周后B超检查确认有无胎心。

　　1.3 统计学处理方法 采用SPSS11.0统计软件进行分析，多组均数间的比较采用方差分析，率的比较采用x2检验。

　　2 结果

　　三组的注射hCG日E2、子宫内膜厚度差异无显著性。A、B组的女方年龄、不孕年限及基础FSH值均高于C组(均P <0.01)。A组的获卵数少于C组(P <0.01)，B组的获卵数与C组比差异无显著性。A组的卵子成熟率低于B、C组(P <0.05，P <0.01)。详见表1。A、B组的原发不孕症分别占73.3%(22/30)和41.7%(5/12)。

　　ICSI治疗结果见表2。三组正常受精率、优质胚胎率和临床妊娠率差异均无显著性，A组的胚胎种植率明显低于B和C组(P均<0.05)。

　　3 讨论

　　人类受精过程包括顶体完整的精子与透明带结合、透明带上糖蛋白诱导顶体反应、精子穿透透明带并溶解卵膜、卵子激活和原核形成等过程。上述过程中任何一个步骤的异常都可能导致受精失败。研究表明，常规IVF受精失败55%是由于精子穿透失败和穿透异常造成，而卵母细胞激活失败占15.1%，原核形成障碍占19.2%[5]。

　　Liu等[6]曾报道，卵子受精失败与精子-透明带结合和透明带诱导的顶体反应异常有关，并认为透明带不能诱导正常的顶体反应是低受精的一个主要原因。本研究中，IVF低受精率患者在随后周期行ICSI治疗的受精率、临床妊娠率和胚胎种植率与因男性因素行ICSI治疗者相似，这提示其低受精的原因可能只是精卵结合障碍，而ICSI治疗可以直接跨越精卵结合障碍，避免了受精失败，从而改善了治疗结果，对于低受精患者来说是一个很好的选择。

　　本研究资料显示，尽管完全受精失败组患者在随后周期行ICSI的受精率、卵裂率、优质胚胎率与对照组和低受精组差异均无显著性，但其种植率显著降低。这与Tomas等[7]和Borini等[8]的报道一致，他们发现有受精失败史的病例进行ICSI时的妊娠率与种植率均低于男性因素不育病例。Borini等[8]发现，尽管IVF受精失败患者下一周期行ICSI的妊娠率明显低于男性因素组，但采用供者的卵子行ICSI，其妊娠率可达到与男性因素患者相似的结果。同时我们还发现IVF完全受精失败的患者多为原发不孕，女性年龄、不孕年限、基础FSH值均大于对照组，在随后周期行ICSI治疗中获卵数及卵子成熟率较低，这些可能会对卵子质量产生一定的影响。还有一些研究认为，IVF未受精的卵母细胞中有1/3的染色体有异常[9]，另外卵母细胞胞浆不成熟[10]及卵母细胞中线粒体某些基因组表达缺陷[11]等因素也可导致IVF受精失败，它们均有可能影响胚胎发育潜能，使其不能正常妊娠。因此我们认为完全受精失败至少部分是由于卵子异常所致，而卵子异常又导致胚胎发育潜能的下降。

　　总之，我们的研究表明IVF低受精组在随后周期改行ICSI可获得理想的临床治疗效果。完全受精失败组有可能因卵子的某些缺陷危及胚胎的进一步发育及种植，从而影响ICSI的治疗效果。

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