应用聚合酶链反应对144例前列腺疾病病原体的检测
发表时间：2012-08-24 浏览次数：738次
作者：薛慧芳 作者单位：运城市中心医院，山西 运城 044000
【摘要】前列腺炎是男性的常见病，近年来临床发病率有明显的增高，尤其是前列腺炎的解脲支原体(UU)、沙眼衣原体(CT)感染的比例增高，其实验室诊断大多存在着特异性低，敏感性差，本实验早期诊断的缺陷，FQPCR技术对于微生物病原体实验诊断具有灵敏、快捷、安全、可靠，本文利用FQPCR对144例前列腺炎患者进行UU，CT的检测结果，总阳性数92例(68.8%)，UU阳性55例(38.2%)，CT阳性28例(19.4%)，CT、CT相同时阳性9例6.3%。结论：UU与CT是引起男性前列腺炎的主要病原体，认为积极开展FQPCR技术检测病原体对明确前列腺的诊断和提高治愈率是必要的。
【关键词】 前列腺炎;解脲支原体;沙眼衣原体;FQPCR
1 资料与方法
1.1 临床资料 本实验144例患者均为男性，年龄25岁～72岁之间，病程3个月～2 a不等，平均病程8个月，自觉症状为：包括腰部与腹部隐痛腰痛及尿道有炙热感，痒感，排尿刺通及排尿不畅。潜伏期2 d～31 d，平均14 d，病程1个月～13个月不等。
1.2 标本采集 采用前列腺按摩法，令患者排尿，取胸膝卧位，手指以前列腺两侧向正中按摩，再沿正中向尿道外挤压，反反复复数次，再挤压会阴部尿道，即可见有白色粘稠性的液体自尿道口流出，将获得的前列腺液采于1 ml生理盐水试管中，留作FQPCR检测标本。
1.3 仪器与试剂 试剂盒由中山大学达安基因股份有限公司提供，仪器linegen。
1.4 检测方法 FAPCR法将采集的PCR标本.高速1 400 r/min离心5 min弃上请夜取沉淀物经过DNA提液裂解后，取制备好的DNA摸板5 μL做PCR，同时做标准曲线，且设阴阳对照管，循环条件：93°预度性2 min然后93°45″，55°50″做10个循环，最后按93°30″，55°50″做30个循环，保存文件。运行程序。工作结束仪器自动计算出样品中DNA的拷贝数，病原菌量≥1 030 copy/ml定为阳性，结果低于103 copy/ml或未能检出定为阴性。
2 结果
144例前列腺炎患者中，检测解脲支原体(UU) 阳性55例(38.2%)，沙眼衣原体(CT)阳性28例(19.4%)，UU、CT同时为阳性9例(6.3%)，见表1。
表1 病原体的阳性结果比较(略)
3 讨论
3.1 PCR技术 荧光定量(PCR)技术是国外近年来发展起来的新的核酸检测技术，该技术在常规PCR基础上，加入了—条用荧光基因标记的特异性探针，探针两端的—端标记标记荧光报告基因，另—端标记荧光抑制基因，探针完整时抑制基因吸收或抑制了报告基因的荧光，当有特异性PCR扩增时，探针与引物同时结合与模板键上，引物延伸时，探针被Taq酶的5’→3’活性作用切断，这时抑制基因的作用消失，报告基因的荧光信号增加，被切断的荧光探针的量与被扩增的目的基因量呈—一对应关系。因此，荧光信号强度伴随着PCR产物的增长而增长。PCR方法就是利用此原理，在PCR过程中连续不断地检测反应体系荧光信号的变化，待反应结束后，自动计算出期间DNA的拷贝数。
3.2 前列腺炎的诊断 前列腺炎是男性泌尿生殖系统常见病，本病的临床表现变化多端，病因及发病机制未被完全清楚，常用的诊断方法不够详尽，许多临床医生在治疗前列腺炎的过程中感到棘手和困惑，治疗存在一定的盲目性，荧光定量核酸扩增技术，利用成熟的Taq酶技术，保证了结果具有高度的特异性，灵敏度高，并且临床只需采集一次样本就可同时检测几种病原体，检测时间只需4 h左右，大大节约了患者的就医时间，避免了传统的培养法，周期长，条件要求高，阳性率低的缺点，不仅可以对疾病病原体感染进行诊断，还可以对病情的发展和预后进行监控，进行疗效评价已逐渐成为临床广为接受的用于检测性病病原微生物的主要方法。
3.3 UU UU是介于细菌和病毒之间的最小原核生物，无细胞壁能在无细胞的培养体中繁殖，特异性抗体可抑制其繁殖，主要寄居于人体的泌尿生殖道，常导致前列腺炎、阴道炎、宫颈炎，本实验结果144例前列腺炎中UU阳性占38.2%，其感染率之高是不可忽视的问题。
3.4 CT CT是一种可通过性生活，间接接触，母婴传播等多种方式传播的病原微生物，它对人体危害很大，除了易引起尿道炎外，还能引起女性宫颈炎子宫内膜炎、输卵管炎、新生儿感染及男女不育症，而且CT感染后一般症状轻微，而不及时治疗，可呈慢性感染过程，值得注意的是男性CT感染后，通过性生活更易导致性传染病，本结果CT感染率19.4%与文献报道的相近。
【参考文献】
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