利用肾移植受者术后血清可溶性CD30预测早期急性排异反应

　　作者：王栋,谭建明,杨顺良,吴卫真,王庆华　　作者单位：南京军区福州总医院泌尿外科,福建 福州 350025

　【摘要】目的: 评价利用肾移植受者术后血清可溶性CD30(sCD30)水平预测急性排异反应的可行性. 方法： 利用ELISA方法分别在术前、术后5 d和10 d检测231名肾移植受者的血清sCD30水平，根据肾移植受者术后1 mo内临床表现将他们分为三组：急性排异反应组(AR，n=49),肾功能延迟恢复组(DGF，n=11) 和正常组(UC，n=171). 结果: 231名肾移植受者的血清sCD30水平由术前的(178±79) U/mL分别降至术后5 d的(52±30) U/mL和术后10 d的[(9±5) U/mL,P<0.001]. AR组术后5 d的sCD30水平为(92±27) U/mL，高于UC组(41±20) U/mL和DGF组[(48±18) U/mL,P<0.001]. 而术前和术后10 d的sCD30水平在三组患者之间的差异无统计学意义. ROC曲线分析结果表明，利用术后5 d sCD30水平可以预测近期内即将出现的急性排异反应(曲线下面积0.95).并且，根据ROC曲线分析得出： 将65 U/mL作为临界点可以较好的预测急性排异反应(特异性91.8%，敏感性87.1%). 结论: 检测肾移植受者术后5 d的血清sCD30水平可以预测移植后早期出现的排异反应.

　　【关键词】 可溶性CD30;移植物排异;敏感性与特异性;肾移植

　　　Posttransplantation soluble CD30 as a promising predictor of acute renal allograft rejection

　　WANG Dong, TAN JianMing, YANG ShunLiang, WU WeiZhen, WANG QingHua, ZENG ZhangXin

　　Department of Urology，Fuzhou General Hospital，Nanjing Military Area Command, Fuzhou 350025

　　【Abstract】 AIM: To evaluate the feasibility of posttransplantation serum soluble CD30 (sCD30) for prediction of acute graft rejection. METHODS: Two hundred and thirtyone patients were included into the study, whose serum levels of sCD30 were detected by ELISA before and after transplantation. Then, they were divided into three groups according to the clinical features one month posttransplantation: acute rejection group (AR,n=49), delayed graft function group (DGF,n=11) and uncomplicated course group (UC,n=171). RESULTS: Significant decrease of sCD30 was detected on day 5 and 10 posttransplantation respectively[ (178±79) U/mL vs (52±30) U/mL, (9±5) U/mL,P<0.001]. Compared with Group UC and DGF, patients of Group AR had higher sCD30 values on day 5 posttransplantation [(92±27) U/mL vs (41±20) U/mL and (48±18) U/mL, P<0.001)]. However, sCD30 levels were not different between three groups before transplantation and on day 10 posttransplantation (P>0.05). Receiver operating characteristic (ROC) curve demonstrated that sCD30 level on day5 posttransplantation differentiated patients who subsequently suffered acute allograft rejection from others (area under ROC curve 0.95). According to ROC curve, 65 U/mL was the optimal operational cutoff level to predict impending graft rejection (specificity=91.8%, sensitivity=87.1%). CONCLUSION: Measurement of sCD30 on 5 day posttransplantation might offer a noninvasive means to recognize patients at risk of impending acute graft rejection during early posttransplantation period.

　　【Keywords】 soluble CD30; graft rejection; sensitivity and specificity; kidney transplantation

　　0 引言

　　新型免疫抑制剂的出现大大降低了急性排异反应的发生率，但是，急性排异反应仍旧是引起早期移植肾失功和慢性移植肾肾病的主要原因[1-2]. 尽管移植肾穿刺活检仍旧是目前诊断急性排异反应唯一可靠的方法，但是在移植肾穿刺活检诊断排异反应的同时，排异反应所造成的移植物损伤已经形成. 因此，如何尽可能早期诊断急性排异反应，避免排异反应所造成的不可逆的移植物损伤是目前器官移植医师所面临的一个迫切的问题.

　　CD30为Ⅰ型跨膜糖蛋白，属于肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族中的一员，最早在何杰金氏淋巴瘤RS细胞中发现[3]. CD30主要表达于分泌Th2型细胞因子的T淋巴细胞表面[4]. CD30阳性的T淋巴细胞活化后，CD30分子胞外部分被蛋白酶切断，形成分子量为85 KD的可溶性分子sCD30.虽然这一过程的生理学意义尚未被明确阐明[5]，但是，最近有研究表明：术前及术后sCD30分子水平提高的肾移植受者将面临较高的急性排异反应发生率和不良的移植肾预后[6-9]. 本研究检测了231名肾移植受者术前及术后的sCD30分子水平，评价利用sCD30分子水平预测急性排异反应的可行性.

　　1 对象和方法

　　1.1 对象 2004年在我院接受肾移植手术231例患者，其中3例活体亲属肾移植，228例尸体肾移植.根据患者术后1 mo内临床表现，将入组患者分为3组：急性排异反应组(AR，n=49)、肾功能延迟恢复组(DGF，n=11)和正常组(UC，n=171).急性排异反应组患者至少在术后1 mo内出现过1次急性排异反应.肾功能延迟恢复组患者在术后1 wk内需要血透治疗，但是没有急性排异反应的证据，并且在术后1 mo内均未出现排异反应.其余在术后临床过程比较平稳，未出现急性排异反应的患者归类于正常组. 所有肾移植的供受者血型完全匹配，术前淋巴毒试验结果阴性(<5%). PRA阳性(>10%)患者25例. 另外随机抽取49名健康献血者静脉血标本作为正常对照.

　　1.2 方法

　　1.2.1 免疫抑制方案 大部分患者均接受常规三联免疫抑制方案. 钙调蛋白抑制剂 (新山地明、新赛司平或者FK506)，骁悉和强的松.少数患者未服用骁悉而选择硫唑嘌呤(依木兰)和咪唑力宾(布雷迪宁).

　　1.2.2 sCD30检测 人sCD30快速ELISA试剂盒购买自奥地利Bender MedSystems公司. 分别于术前2 h,术后5 d和10 d留取患者静脉血标本.血标本立刻离心2 h，去除细胞成分后，将血浆保存于-70℃冰箱等待检测.之后利用ELISA方法按照试剂盒操作手册进行检测.

　　1.2.3 急性排异反应的诊断 为避免移植肾穿刺活检可能出现的并发症，1 wk之内的排异反应主要依据临床表现进行诊断，诊断标准为：(1)肌酐水平进行性升高，升幅超过20%，并且经过抗排异治疗后逆转;(2)同时伴有下述临床表现之一： 发热 (>38℃),尿量减少、移植肾肿大压痛、血压升高、或移植肾彩超提示移植肾肿大，血管阻力指数>0.8. 1 wk之后所有移植肾功能恶化的患者均接受移植肾穿刺活检，并按照Banff97标准进行病理分级.

　　统计学处理： 计量资料用x±s表示，计数资料用频率表示，组间比较采用方差分析，两变量关系研究采用相关分析，并进行ROC曲线分析. P<0.05为有统计学意义.

　　2 结果

　　术后1 mo时间内本组病例中共有49例(21.2%)患者出现急性排异反应，平均急性排异反应出现时间为术后10 d ，相关性分析结果显示： 急性排异反应出现时间与sCD30水平之间无相关性. 49例急排患者中，43例是通过移植肾穿刺活检证实的. 另外有11例患者被诊断为DGF，其中3例通过移植肾穿刺活检诊断为急性肾小管坏死(ATN)，11例患者均未伴有急性排异反应. 其余171例患者术后肾功能迅速改善，临床过程平稳，其中8例患者虽然术后肌酐水平升高，但经过活检证实为钙调蛋白抑制剂中毒，经过调整免疫抑制剂剂量后，肾功能明显改善. 231例患者术前sCD30水平为(178±79) U/mL，高于正常献血者水平(41±13) U/mL,(P<0.001). 三组患者术前sCD30水平依次为(183±74) U/mL,(168±53) U/mL和(178±82) U/mL，组间差异无统计学意义(P>0.05). 231例患者的sCD30水平在术后发生下降，分别降至术后5 d的(52±30) U/mL和术后10 d的(9±5) U/mL,(P<0.001). 三组患者在术后5 d的sCD30水平存在下降(P<0.001)，AR组患者高于其余两组[(92±27) U/mL vs (48±18) U/mL和(41±20) U/mL，P<0.001]. 与术后5 d相比，到术后10 d时三组患者的sCD30水平均下降(P<0.001)，但是，三组患者的sCD30水平之间的差异无统计学意义. 另外，分析了231名患者术前和术后5 d的sCD30水平后可以得出：术后5 d的sCD30水平与术前无相关(r=0.124，P=0.06). 分析25例PRA阳性患者的sCD30水平后得出：PRA术前、术后5 d和10 d的sCD30水平之间均无相关(术前：r=0.03,P=0.89;术后第5天：r=0.196, P=0.37;10 d：r=0.278,P=0.20). 为排除PRA因素的影响，我们将25名PRA阳性的患者资料剔除后分析，仍旧可以得出，AR组患者术后5 d的sCD30水平高于其余两组(P<0.001)，而在其它时间点时，三组之间的差异无统计学意义(P>0.05).将231名患者分为多HLA位点错配组(HLA错配>3)和少HLA位点错配组(HLA错配≤3), 环孢霉素组和FK506组进行分析，HLA错配以及免疫抑制方案对术后sCD30水平无统计学影响. 在上述的各亚组内，术后1 mo内发生急性排异反应的患者的术后5 d sCD30水平高于同亚组的其他患者(P<0.001)，而在另外时间点时sCD30水平无统计学差异(P>0.05).

　　我们将UC组和DGF组合并为1组后，利用ROC曲线分析了利用术后5 d sCD30水平预测肾移植术后早期急性排异反应的可行性，术后5 d sCD30水平可以较好的预测术后1 mo内出现的急性排异反应，曲线下面积为0.95. 而如果将65 U/mL作为临界点的话，其预测术后1 mo内出现的急性排异反应的特异性为91.8%，敏感性为87.1%.

　　bP<0.001 vs AR.

　　3 讨论

　　急性排异反应仍旧是肾移植受者所面临的一个主要问题，只有早期诊断并治疗才有可能降低甚至避免急性排异反应对移植物造成的不可逆损伤.关于移植肾急性排异反应的无创、早期诊断方法的研究一直是研究者们所关注的热点领域，虽然已经取得了一定的成绩，但是，迄今为止仍旧没有一种可靠性能与移植肾穿刺活检相当的诊断方法应用于临床实践中.

　　本研究进一步证实,肾移植受者术前sCD30水平明显高于正常人[6-12]. 但是，不同的研究者所报道的肾移植受者术前的sCD30水平是不一致的：Suesal等[7]检测的将近4000份标本中只有23%的标本的sCD30水平高于100 U/mL;而在Rajakariar[12]的研究中，两组患者的术前sCD30水平的平均值均大于100 U/mL.我们国内学者对707例肾移植受者术前血清进行了回顾性研究发现，肾移植受者术前血清sCD30水平明显高于100 U/mL[9-10]. 这与我们的研究结果是一致的，但是，我们的研究并没有证实肾移植受者术前sCD30水平与术后早期的AR事件之间的相关性. 出现这种分歧的原因可能是对于术后早期之一时间段的定义不同所致，本研究中只观察了术后1mo内的AR时间，而陈江华的研究中观察了术后6 mo[10].由于本组病例随访时间尚不足两年，因此，我们没有分析肾移植受者术前sCD30水平与移植物长期存活之间的关系. 是否象其他研究者报道的那样肾移植受者术前sCD30水平与移植物长期存活相关仍需进一步的随访证实[6,9].

　　虽然本研究中所有肾移植受者的sCD30水平均在术后5 d和10 d发生明显下降，但是肾移植术后1 mo内发生急性排异反应的患者在第5天的sCD30水平明显高于其他患者. Slavcev等[13]研究发现,肾移植术后1 mo内无急性排异反应的患者在术后2 wk时的sCD30水平明显低于发生急性排异反应的患者. 我们的研究显示,肾移植受者术后10 d的sCD30水平与肾移植术后1 mo内的急性排异反应事件不相关，并且，本组病例术后10 d的sCD30水平平均值明显低于Slavcev等[13]报道的病例. 目前的研究资料尚不能对上述差异作出合理的解释，同时，为什么本组病例的sCD30水平在术后5 d和10 d之间发生明显的下降也需要进一步的研究来阐明.

　　ROC曲线是目前比较常用的统计学分析方法，它可以评价一种实验方法区分阳性和阴性受试者的准确性，并且可以帮助研究者找出理想的临界值，以便同时兼顾该方法的特异性和敏感性[14]. 本研究中ROC曲线分析结果显示： 通过检测术后5 d血清sCD30水平可以较好的预测术后早期的急性排异反应，与目前常用的诊断方法比较，平均可以提前5 d预测急性排异反应的发生，尤其是可以较好的区分术后早期的急性排异反应和DGF. 另外，我们的研究结果还显示：肾移植受者血清sCD30水平与PRA不相关，并且术后sCD30水平的变化也不受HLA错配和免疫抑制剂方案的影响.

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