前列腺癌及前列腺增生组织中p73表达及临床意义

　　作者：蒋宏毅 赵晓昆 钟朝晖 姚干 王荫槐 张磊 欧阳时锋 谢续标 彭龙开 易东生 张选志 扬罗艳 刘任 黄循 作者单位：中南大学湘雅二医院泌尿外科，湖南 长沙 410011

　　【摘要】 目的 p73在前列腺癌及前列腺增生中的表达与临床病理特征和生物学行为的关系。方法 前列腺癌标本26例,前列腺增生标本18例,均为存档石蜡切片，应用免疫组化研究p73表达。结果 p73表达在前列腺癌组织为34.61%，在前列腺增生组织为0%(P<0.01)。组织学分级Ⅰ～Ⅱ级的表达为45.45%,Ⅲ级的26.67%(P>0.05)。临床分期A-C期的表达为8.3%,D期为61.50%(P<0.05)。表达为阳性的血清PSA浓度均值为18.19±3.30,阴性的为23.41±2.29(P>0.05)。结论 p73表达在前列腺癌组织高于前列腺增生组织,表达与临床分期有关(P>0.05)，而与组织学类型及血清PSA浓度无关(P>0.05)。表明p73的表达可以作为判断前列腺癌患者预后的指标.

　　【关键词】 良性前列腺增生;前列腺癌;p73基因;免疫组织化学

　　p73基因在人体内低水平广泛表达，通过RT-PCR方法在脑﹑心﹑肝﹑脾﹑肾等器官组织中可检测到p73基因的转录。1998年，几个研究小组分别在肺癌和前列腺癌中发现了p73蛋白高水平表达〔1〕。国内尚无p73在前列腺癌表达的报道，为了能发现p73与前列腺癌的某种关系，我们采用免疫组化的方法检测了26例前列腺癌及18例前列腺增生组织中p73的表达。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料 26例前列腺癌手术切除标本和前列腺穿刺活检标本作为研究对象，上述标本经病理切片证实。年龄59～90岁，平均(69.2±6.6)岁。病理类型：24例腺癌，1例鳞癌，1例未分化癌。按组织学类型分级为Ⅰ级6例，Ⅱ级5例，Ⅲ级15例。按临床分期A期2例，B期4例，C期6例，D期14例。前列腺增生：选取18例良性前列腺增生手术切除标本，年龄60～86岁，平均(62.7±8.9)岁,经病理切片证实。上述标本均为常规石蜡包埋的存档蜡块，每个标本连续切片2张，切片厚4 cm，1张行HE染色复查诊断和组织学分级，另1张用于p73的免疫组化染色。

　　1.2 免疫组化染色 主要步骤:切片用二甲苯脱蜡，梯度酒精和蒸馏水水化。3%H2O2封闭内源性过氧化酶20 min，自来水冲洗，0.01 /mol/L(pH7.4)洗。滴加一抗37℃孵育40 min，4℃冰箱过夜PBS洗3次×5 min。滴加二抗37℃孵育40 min，PBS洗3次×5 min。滴加ABC试剂孵育60 min。PBS洗3次×5 min。置0.03%H2O2-DAB溶液(DAB50 mg+PBS99.9 ml+30%H2O2 0.1 ml) 显色20 min，自来水洗，蒸馏水洗。苏木素复染2 min或不复染，自来水洗。脱水，透明，封片。p73 免疫组化试剂盒购自深圳晶美公司。

　　1.3 结果判断 细胞核和/或细胞浆含棕黄色粒者为阳性细胞，阳性细胞率≥40%为p73阳性病例(+)，<40%则为阴性病例(-)。

　　1.4 统计学方法 采用SPSS10.0版本软件，χ2检验，t检验或直接概率法，检验水准为α=0.05,α=0.01。

　　2 结果

　　2.1 表达与前列腺癌临床病理特征的关系 见表1。p73的表达与病理类型及组织学分级无关(P>0.05)，与患者的PSA浓度无关(P>0.05)。而与临床分期有关(P<0.05)，临床分期越晚阳性率越高，这表明p73的表达可以预示患者的预后。

　　p73的阳性反应物质主要在细胞核，偶见细胞质染色。p73在前列腺癌组织中表达的阳性率为34.61%(9/26),而在前列腺增生组织中无一例表达为阳性0%(0/18)(P<0.01)(表2)。

　　表1 p73表达与前列腺癌临床病理特征的关系(略)

　　与D期比较：1)P<0.05

　　表2 p73在前列腺癌及前列腺增生组织中的表达(略)

　　与前列腺增生组比较：1)P<0.01

　　3 讨论

　　3.1 p73的分子生物学特性及功能 p73基因是Kaghad〔2〕等在1997年克隆得到的一个新基因，其编码的蛋白质在序列上与p53蛋白有较高的同源性，在功能上与p53蛋白有部分重叠，被认为是p53基因家族的一个成员，但是否属肿瘤抑制基因目前尚无定论。p73基因定位于1 p36.2～1 p36.3区。1 p36区在黑色素瘤﹑乳腺癌及结肠癌中也常发现有缺失，是发生肿瘤的热点区域，据此人们推测，在此区域可能存在抑癌基因〔3〕。p73定位于此区域，人们将其作为一个侯选的抑癌基因。p73基因的表达产物p73蛋白与p53蛋白在氨基酸#11序列上具有高度的同源性。对比分析p73与p53蛋白的序列发现，p73与p53在TAD区(transactivatiodomain)具有29%的同源性，在DBD区(DNA-binding core domain)有63%的同源性，在OD区(homo-oligomerization domain)有38%的同源性〔2〕，但也存在许多不同之处〔4〕：(1)p73基因很少突变;(2)p73基因为等单位基因;(3)p73基因不被DNA所诱导;(4)p73与p53两种蛋白的转录激活调控区不同;(5)两者的失活方式不同。Senoo等〔5〕用Northern blot分析了人的胸腺﹑前列腺﹑肝脏﹑骨骼肌及胰腺等组织，均检测到p73的转录物，但表达水平较低。免疫组化研究表明p73定位于细胞核〔2，6，7〕。Jost等〔8〕研究证实p73基因能诱导p21WAF-1并抑制细胞生长。p21WAF-1是CDK(细胞分裂激酶)抑制剂，可抑制细胞增殖，使之停滞在G1期。Kaghad等〔1〕将野生型及突变型p73α和p53转染入无p73αmRNA及其蛋白的神经母细胞瘤细胞株，发现表达野生型p73α和p53的细胞p21WAF-1蛋白蛋白水平同样增加，并抑制了细胞的增殖。但Wang等〔9〕的研究认为p73的表达能导致p53表达水平的下降。p53基因是被公认的抑癌基因，并在人的多种恶性肿瘤组织中突变与缺失〔10，11〕，p53水平的下降导致肿瘤的生长。

　　3.2 p73在前列腺癌组织中及前列腺增生组织中的表达及其意义 研究发现p73表达率为(9/26)34.61%，而主要定位于细胞核。与前列腺增生组0%(0/18)相比有显著性差异(P<0.01)。本组病例中p73表达显示与肿瘤的临床分期有关，而与分化程度及PSA的浓度无关。组织学分级Ⅰ、Ⅱ级的p73阳性率为45.45%，Ⅲ级p73阳性率26.67%(P>0.05)，无显著差异性。p73表达的阳性PSA浓度均值为18.19±3.30，阴性的均值为23.41±2.29(P>0.05)，无显著差异性。A-C期的p73的阳性表达率为8.3%，低于D期的57.14(P<0.05)，两者有显著差异性。Yokomizo等〔11〕检测了27例前列腺癌p73的表达水平，发现前列腺癌组织与正常前列腺组织的表达水平无差异。Takahashi等〔1〕对106例前列腺癌组进行分析，发现两种组织p73的表达无差异，但p73表达与前列腺癌的发生与生长有某种关系。

　　1998年，几个研究小组分别在肺癌和前列腺癌中发现了p73的高水平表达〔10，12，13〕，并且Ming等发现在肺癌中p73基因沉默的等位基因被激活表达，并不是单等位基因表达。由此他们提出一种观点：p73不直接起抑癌的作用，而是通过别的途径起作用，p73可能是p53的一种模拟突变体，在细胞内p73分子可模拟p53行使p53分子的功能，从而使p53分子失效，造成细胞恶变，在肿瘤发生中起重要作用。而Wang等〔9〕提出另外一种观点：p73的表达能导致p53的表达水平下降。这是由于①p73α和p73β能活化MDM2(一种p53转录的靶基因)启动子，因为p73增加了MDM2的转录及蛋白稳定性，而MDM2作为p53的靶基因之一能调低p53的水平。在p73的诱导下MDM2既能与p53结合有能与p73结合，MDM2与p53的复合物将p53作为靶基因而调低p53，但MDM2与p73的复合物能稳定p73。②MDM2与p53的亲合力高于MDM2与p73的亲和力。这些都说明p73水平的提高能导致p53活力的降低是一种直接的作用，这就能解释为什么很小的p73功能的丢失能在癌组织中检测得到，而且p73缺乏的小鼠不能很快的生长肿瘤〔13〕。

　　前列腺癌组织中p73表达高于前列腺组织p73表达，前列腺癌组织中p73表达与临床分期有关，而与组织学分级及PSA浓度无关。可以作为判断前列腺癌患者预后的指标。

　　【参考文献】

　　1 Takahashi H,Ichimiya S,Nimura Y,et al.Mutation，allelotyping，and transcription analyses of the p73 gene prostate caricinoma〔J〕.Cancer Res，1998;58(10):2076-7.

　　2 Kaghad M,Bonnet H,Yang A,et al.Monoallelically expressed gene related to p53 at lp36,a region frequently deleted in neurblastoma and other human cancer〔J〕.Cell，1997;90(4):809-19.

　　3 Oren M.Lonely no more:p53 finds its kin in a tumor suppressor haven〔J〕.Cell,1997;90(5):829-32.

　　4 Mai M,Yokomizo A,Qian C,et al.Activation of p73 silent allele in lung cancer〔J〕.Cancer Res,1998;58:2347-9.

　　5 Senoo M,Seki N，Ohira M,et al.A second p53-related protein，p73L,with high homology to p73〔J〕.Biochem Biophsy Res Commun， 1998;248:603-7.

　　6 Tannapfel A,Wasner M，Krause K,et al.Expression of p73 and its relation to histopathology and prognosis in hepatocellular carcinoma〔J〕.J Natl Cancer Inst，1999;91(13):1154-8.

　　7 Tannapfel A,Elgeland K，Weinans L,et al.Expression of p73，a novel protein related to the p53 tumor suppressor p53,and apoptosis in cholangiocellar carcinoma of the liver〔J〕.Br J Cancer，1999;80(7):1069-74.

　　8 Jost CA,Maiin M,Kaelin WG.p73 is a simian (correction of human) p53-related protein that can induce apoptosis〔J〕.Nature，1997;389(664):191-4.

　　9 Wang XQ,Weg M,Ongkeko Anita WS，et al.A Possible Role of p73 on the modulation of p53 level through MDM2〔J〕.Cancer Res，2001;61:1598-603.

　　10 Incognito LS，Cazares LH，Schellhammer PF,et al.Overexpression of p53 in prostate carcinoma is associated with improved overall survival but not predictive of respone to radiotherapy〔J〕.Int J Oncol,2000;17(4):761-9.

　　11 Yokomizo A，Mai M，Bostwick DG,et al.Mutation and expression analysis of the p73 gene in prostate cancer〔J〕.Prostate，1999;39(2):94-100.

　　12 Strohmeyer D，Rossing C，Bauerfeind A,et al.Vascular endothelial groth factor and its correlation with angiogenesis and p53 expression in prostate cancer〔J〕.Prostate，2000;45(3):216-24.

　　13 Sasor A，Wagrowska-Danilewicz M.Ki-67 antigen and p53 protein expression in benign and malignant prostatic lesions.Immunohistochemical quantitative study〔J〕.Pol J Pathol，2000;51(1):31-6.