非那雄胺对前列腺癌病理分级及血管形成的影响

　　作者：牛文斌 王春玲 曹会峰 魏巍 作者单位：佳木斯大学附属第一医院泌尿外科，黑龙江 佳木斯 154003

　　【关键词】 前列腺癌;血管形成;低氧诱导因子1α;血管内皮生长因子

　　5α还原酶抑制剂非那雄胺广泛用于治疗良性前列腺增生(BPH),能抑制增生前列腺组织的血管形成。初步观察表明，非那雄胺降低双氢睾酮(DHT)和前列腺特异抗原(PSA)水平，对控制前列腺生长和前列腺癌(PCa)的发生发展起重要作用〔1，2〕,但其作用机制尚不明确。本研究回顾性调查我院429例BPH患者的药物治疗史、PCa发病情况及病理Gleason评分，评估非那雄胺对PCa发生率及病理分级的影响，并探讨非那雄胺对PCa血管形成的影响。

　　1 对象与方法

　　1.1 对象

　　收集2004至2008年在我院确诊的429例BPH患者，年龄68～87〔平均(77.6±7.8)〕岁，整理其BPH药物治疗史。根据BPH患者使用的治疗药物不同，将研究对象分为非那雄胺组(n=214)和对照组(n=215)。非那雄胺组病例持续用药时间均在6～14个月，两组病例中非那雄胺组20例、对照组32例(共有52例)经B超引导行穿刺活检或前列腺电切术后病理确诊为PCa。

　　1.2 方法

　　1.2.1 非那雄胺对PCa发生率及病理分级的影响

　　对两组病例中所有确诊为PCa的病理资料进行分析，根据Gleason分级系统进行分级:高分化腺癌(Gleason 2～6分)、中分化腺癌(Gleason 7分)、低分化腺癌(Gleasons 8～10分)。分析各组PCa的发生率及病理Gleason评分。

　　1.2.2 免疫组织化学染色检测各组肿瘤组织中微血管密度(MVD) 、低氧诱导因子1α(HIF1α)及血管内皮生长因子(VEGF)表达情况

　　肿瘤组织标本来自前列腺穿刺或经尿道前列腺电切，10%甲醛固定,常规石蜡包埋、组织切片，苏木素伊红(HE)染色。采用过氧化氢标记的链霉卵白素进行组织染色(SP法)，一抗鼠抗人VEGF、CD34单抗、二抗SP试剂盒购自福建迈新公司。一抗鼠抗人HIF1α单抗购自美国NeoMarkers公司。按说明书操作。组织切片中先后加入一抗、二抗孵育后用联苯二胺(DAB)显色,HE复染。阴性对照以磷酸盐缓冲液代替一抗。

　　1.3 结果判定

　　VEGF及HIF1α染色结果：细胞质出现棕黄色反应物即为阳性表达。根据切片中细胞阳性数的有无及阳性细胞的百分率,将结果分为:无表达():切片中无阳性细胞;低度表达(+):阳性细胞数<25%;中度表达():阳性细胞数为25%～50%;高度表达():阳性细胞数>50%。CD34染色阳性的单个内皮细胞或一簇内皮细胞作为一个微血管,在200倍视野下计数3个血管密度最高区域(热点)的微血管数目,其平均值即为肿瘤的MVD。

　　1.4 统计学方法

　　应用SPSS11.5统计软件包。计量资料用x±s表示,采用配对t检验,计数资料比较采用χ2检验。

　　2 结 果

　　2.1 两组病例PCa发生率比较

　　入选本研究的429例BPH有52例发生前列腺癌，总发生率为12.14%;其中非那雄胺组214例中有20例(9.34%)发生PCa;对照组215例中有32例(15.39%)发生PCa(χ2=120.134，P=0.042)。组间比较差异显著。

　　2.2 两组病例PCa病理分级比较

　　本研究52例发生PCa的患者中病理分级为中高级(Gleason≥7分)的有28例(56%)，其中非那雄胺组15例(75%)，对照组13例(36.87%)，两组中高级PCa构成比差异显著(P<0.05)。

　　2.3 免疫组化结果

　　对照组癌组织中MVD为66.8±17.7,非那雄胺组为48.4±10.8,两者差异有统计学意义(P<0.05) 。VEGF定位于细胞质;HIF1α定位于细胞质,部分也表达于细胞核，两组比较有统计学意义(P<0.05)。见表1。表1 两组PCa VEGF及HIF1α表达情况(略)

　　3 讨 论

　　非那雄胺抑制睾酮在前列腺组织中转化为作用更强的DHT，从而达到抑制BPH进而使腺体缩小的目的，广泛应用于BPH的治疗;在缩小前列腺体积、减少急性尿潴留和手术的风险、提高尿流率等方面取得公认的疗效,并且对PCa有一定治疗作用〔3〕。一项为期7年的非那雄胺预防PCa的研究结果显示,非那雄胺可使PCa发生率减少24.8%〔2〕。PCa的发生、发展与雄激素密切相关，因此理论上影响雄激素合成、代谢和活性的因素(包括基因)均有可能影响PCa的发生。本研究结果显示,长期服用非那雄胺的PCa患者癌组织中MVD明显少于对照组。由于肿瘤生长、转移有血管形成依赖性,抑制PCa的血管形成,就可能延缓PCa的进程。这可能是长期服用非那雄胺防治PCa的机制之一。

　　目前的研究表明，5α还原酶是影响BPH的一种十分重要的酶，长期服用非那雄胺使PCa病理分级提高〔2〕。Shirakawa〔4〕等用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)方法也发现，人前列腺标本中同时有5α还原酶1和2的表达，两者对前列腺内DHT的生成可能都起到一定的作用。国内叶烈夫等通过RTPCR的方法证实在正常前列腺、BPH、PCa组织中，两型5α还原酶表达上皮均强于间质。在PCa上皮组织中5α还原酶1的表达强于5α还原酶2，后者的表达与正常组织相近，且5α还原酶1与肿瘤的分级、分期正相关〔5〕。而在BPH上皮组织中，两型5α还原酶的表达正相反，5α还原酶2的表达高于5α还原酶1，5α还原酶1的表达与正常组织相近〔6〕。雄激素依赖和非依赖性PCa细胞株均可表达5α还原酶活性，较高浓度的非那雄胺能够抑制雄激素依赖和非依赖性PCa细胞的增殖，这为非那雄胺治疗PCa提供了理论依据。近期研究表明非那雄胺能够提高PCa病人直肠指检的阳性率〔7〕。本研究结果显示非那雄胺组发病率与对照组相比有显著差异，证实在PCa的发展过程中5α还原酶起着重要作用，5α还原酶抑制剂非那雄胺能有效降低PCa的发病率。同时本研究显示在应用非那雄胺治疗的病理分级中，诊断为中高级PCa者明显增多，认为主要因为非那雄胺是5α还原酶2抑制剂，引起PCa组织中5α还原酶2通路被抑制，5α还原酶1通路反馈性增强,诱导PCa细胞分化并使PCa病理分级提高有关。

　　肿瘤的生长发展离不开肿瘤血管的生成〔8〕，PCa血管生成是多因素激活VEGF的结果〔9〕。HIF1 能激活编码葡萄糖转运、糖酵解酶及VEGF的基因转录,在肿瘤对缺氧的适应性及侵袭转移中起重要作用。HIF1α是HIF1主要的异二聚体亚单位，通过与一种特异的VEGF DNA低氧性应答物质连接,诱导VEGF表达,从而促进肿瘤血管形成〔10〕。HIF1α在肺癌、结肠癌、乳腺癌等多种实体肿瘤中有高表达〔11〕,与PCa关系也很密切。Zhong等〔12〕发现,在PCa旁组织及高分级前列腺上皮肉瘤中，HIF1α表达明显增加,提示HIF1α与PCa的发生密切相关。Gao等〔13，14〕通过体外细胞培养观察到铬、矾酸盐两种致癌物质可引起人PCa DU145细胞株HIF1α表达增加,其细胞培养液中VEGF蛋白含量增多,认为HIF1α、VEGF表达增加可能是铬、矾酸盐诱发PCa的一个重要途径。体外实验发现,DHT可刺激雄激素依赖性PCa LNCaP细胞株内HIF1α及VEGF表达,而非那雄胺可抑制其刺激作用〔15〕。本实验结果显示,长期服用非那雄胺后,PCa组织中HIF1α及VEGF表达均显著减少,提示非那雄胺可能通过抑制HIF1α,下调VEGF表达,从而抑制PCa血管形成,延缓PCa的发展进程，有效降低PCa的发病率。

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